復方鹿骨健骨顆粒的制備及藥效學研究

郭靜茹

摘要：目的：探究復方鹿骨健骨顆粒的制備及藥效學研究察。方法：選擇冷凝回流法提取黃精、梅花鹿骨超微粉，通過吸濕性、流動性、顆粒成粒率、溶化性等確定最佳制備工藝，并分析藥效學。 結果：復方鹿骨健骨顆粒劑的制劑工藝為浸膏粉：乳糖=1：3，20%乙醇制軟材，80目和12目篩進行篩選，烘干2h即得;小鼠血清相關生化指標顯示，給藥組中小鼠血清中鈣離子（Ca2+）、叉頭型基因P3（FOXP3）、骨鈣素（OCN）、小鼠降鈣素（CT）、雌二醇（E2）和小鼠羥輔氨酸（Hyp）的表達量明顯升高（p<0.05）。WB檢測結果顯示，與模型組相比較，給予CDBE治療后小鼠股骨中P16和P67 phox相關因子的蛋白的表達水平明顯降低（p<0.05）。HE染色觀察到小鼠左側股骨骨小梁豐度增加明顯，更加寬厚，并且連接較為緊密。結論：本研究中制備的復方鹿骨健骨顆粒劑工藝穩定可行，能夠為工業化生產提供依據和指導，對改善骨質疏松癥有不錯的療效。

關鍵詞：復方鹿骨健骨顆粒;藥效學;制備

【中圖分類號】 R282 【文獻標識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）05--01

1.資料與方法

1.1一般資料：

選擇60只3月齡的雌性ICR小鼠，體重24～27 g，衛生許可證號SCXK（吉）-2019-0015。將所有小鼠隨機分為4組（n=10），分別為模型組（Model）、陽性藥組（Positive）、CDBE組（CDBE）以及空白對照組（Control）。梅花鹿骨（安國肖氏康源飲品有限公司）;黃精（安國市保康中藥飲片加工有限公司）;BCA蛋白濃度測定試劑盒（上海碧云天生物技術有限公司）;鈣離子（Ca2+）ELISA試劑盒（江西海聯生物科技有限公司）、叉頭型基因P3（FOXP3）ELISA試劑盒（江西海聯生物科技有限公司）;骨鈣素（OCN）ELISA試劑盒（江西海聯生物科技有限公司）;降鈣素（CT）ELISA試劑盒（江西海聯生物科技有限公司）;雌二醇（E2）ELISA試劑盒（江西海聯生物科技有限公司）;羥脯胺酸（HyP）ELISA試劑盒（江西海聯生物科技有限公司）。

1.2方法

按干燥鹿骨超微粉：黃精=1：2的比例精密稱取原料，加15倍體積蒸餾水，浸泡2 h后經水浴提取2次，每次2h，合并煎液，濾過，將濾液進行濃縮、干燥，除去濾液中多余的水分，即得干燥浸膏粉，不同輔料與干浸膏粉以1：1的比例混合均勻，以不同濃度的乙醇溶液作潤濕劑潤濕，用一號篩和五號篩過篩進行整粒，干燥，即得。

各組于術前記錄體重，腹腔注射濃度為8%烏拉坦進行麻醉，麻醉劑量為：0.1ml/10g。除Control組之外的其他三組小鼠需手術絲線結扎卵巢及其周圍相連組織，切除雙側卵巢。Control組小鼠在打開腹腔后，只摘除腹腔內適量脂肪。術后將所有小鼠于原環境飼養，自由攝食、飲水。術后三天，每天腹腔注射8萬單位的青霉素，防止感染。密切觀察小鼠術后狀態。CDBE組：每天給予濃度為1.2g/ml的CDBE，給藥劑量為0.28ml/10g小鼠體重;Positive組：每天給予濃度0.073g/ml阿侖膦酸鈉藥液，給藥劑量為0.19ml/10g小鼠體重;Control組和Model組：每天給予同體積蒸餾水。以灌胃方式給藥，持續給藥12周。

1.3觀察指標：分析復方鹿骨健骨顆粒的制備及藥效學情況。

1.4統計學分析

對本次結果數據由統計員處理分析，并獲取最終結論，處理軟件為SPSS22.0，統計的全部資料中，用χ2檢驗計量最后差異、t檢驗計數資料最后差異，表示方式為用“x±s”和（%）等，若得到結論P<0.05，則表明結果的統計分析要求。

2.結果

2.1復方鹿骨健骨顆粒的制備

當物料與輔料的比例為1：3時，該顆粒劑的吸濕性最弱。所以，最終選擇物料：乳糖=1：3進行復方鹿骨健骨顆粒劑的制備。在72 h后，使用濃度為20%乙醇作為潤濕劑的顆粒吸濕性最小，80%與60%的濃度乙醇在吸濕性無明顯差別。同時，在顆粒劑的制備過程中，在乙醇濃度為20%的時候，潤濕劑的使用量最少。結合吸濕性考察結果，可以確定選擇濃度為20%的乙醇作為潤濕劑最為合適。

2.2復方鹿骨健骨顆粒的藥效學

Western Blot實驗結果表明：與Control組相比，Model組小鼠右側股骨中P16和P67 phox蛋白表達水平明顯增加;與Model組相比。CDBE給藥治療后，小鼠股骨中蛋白表達水平明顯降低，差異具有統計學意義（P<0.05）。

Control組小鼠的骨小梁結構致密且規則。與Control組相比較，Model組小鼠的骨小梁豐度明顯降低，骨髓腔明顯增大，骨小梁結構中出現大量空白的區域，不能連接成完整的網狀結構。CDBE組的小鼠的HE染色切片與Model組相比較，骨小梁豐度增加明顯，更加寬厚，并且連接較為緊密，與Control組較為接近。

3.討論

復方鹿骨健骨顆粒由梅花鹿骨、黃精提取制成，顆粒劑具有便于服用與攜帶、劑量準確，方便儲存與運輸，是最接近傳統湯劑的現代中藥劑型，具有良好的市場開發前景。所以，復方鹿骨健骨顆粒緩解骨質疏松作用具有較好的理論基礎。骨質疏松癥模型小鼠的骨吸收會增強，會導致骨質中膠原分解加速，但是成骨細胞合成的膠原蛋白質會減少，HyP可以加速體內膠原蛋白的重建以及彈性蛋白的再生和更新，通過補充體內HyP可以促進骨形成，預防和治療骨質疏松[4]。作為一種骨骼健康補充劑，CDBE可以刺激膠原蛋白質的合成與增加，促進骨質疏松小鼠血清中的Ca2+、FOXP3、OCN、CT、HyP表達。以上這些結果表明CDBE對骨形成的刺激起主導作用。

綜上所述，把CDBE治療的方式用于骨質疏松模型小鼠，可以升高小鼠血液中Ca2+、FOXP3、OCN、CT、E2、和HyP的表達量，使小鼠骨骼中P16及P67 phox蛋白表達水平降低，并且可以改善絕經后小鼠的骨的微組織結構，有效增加脛骨骨小梁的數目、厚度，使骨小梁連接緊密，使小鼠骨的健康情況得到很好的改善，說明復方鹿骨健骨顆粒用于骨質疏松癥療效顯著。

參考文獻：

[1] 倪立堅，嚴錦賢，宋紅梅，等. 復方巴戟天健骨顆粒的質量標準升級研究[J]. 海峽藥學，2021，33（4）：78-81.