不同酶聯免疫吸附法檢測丙肝抗體的效果

吳菲菲

深圳市羅湖區疾病預防控制中心微檢科，深圳 518020

現階段較常見的傳染性疾病為丙型肝炎（簡稱丙肝），患者因感染丙型肝炎病毒（HCV）患病，具體涉及2 種類型，免疫介導損害、HCV 損害，其中病毒復制能力、病毒基因型為病毒因素，宿主因素涉及細胞免疫、體液免疫及先天性免疫等，傳播途徑以吸毒、針刺及輸血等方式為主［1］，其中最常見的傳播途徑為輸血，患者多因血液制品、輸血傳播而患病。經流行病學顯示，此病在全球范圍中的感染率約為3%。近年來其患病率逐年升高，也呈年輕化發展，已成為嚴重的社會、公共衛生問題。近年來研究表明，丙肝與乙肝的病理機制具有相似性，以肝細胞壞死、淋巴細胞浸潤為主，患者患病后匯管區有纖維組織增生現象，若疾病持續進展，則肝硬化風險增加，甚至對其生命安全造成直接威脅［2-3］。因此，盡早檢測丙肝抗體，對明確疾病、改善患者預后有積極作用。鑒于此，本研究選取深圳市羅湖區轄區醫院2019年6月至2021年6月收治的80 例丙肝患者為研究對象，分析丙肝抗體經不同酶聯免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測丙肝抗體的價值。

資料與方法

1、基線資料

選取深圳市羅湖區轄區醫院2019年6月至2021年6月收治的80例20～65歲男性丙肝患者，根據檢測方式分為常規組（間接ELISA 法，40 例）和試驗組（雙抗原夾心ELISA法，40 例）。兩組基線資料差異均無統計學意義（均P＞0.05）。患者及親屬知情，并簽署知情同意書。

納入標準：⑴與“丙肝防治指南（2004年版）”診斷標準相符；⑵呈食欲減退、腹脹及易疲勞等癥狀表現；⑶病程＞1年，年齡20～65歲；⑷教育水平在小學及以上；⑸有完整性資料。排除標準：⑴伴有其他傳染性疾病；⑵重要臟器功能衰竭；⑶正處懷孕或者哺乳期；⑷檢查禁忌證；⑸精神病史或者患有精神病；⑹中途退出研究。

2、方法

入院后所有對象均在同一實驗室內檢驗血清標本，同一組檢驗人員、同一檢驗儀器完成所有對象的檢測流程。

表1 兩組丙肝患者基線資料比較

兩組患者均行ELISA 法檢測。先采集空腹、晨間肘部靜脈血3 ml，3000 r∕min 離心10 min，完成離心后分離血清，等待檢測，具體檢測流程：室溫下平衡30 min，將板條從試劑中取出，各板陽性對照有2孔、陰性對照3孔，按照編號進行不同加樣量，編號從低到高編為1、2、3、4、5 號，1 號標本中取樣6 μl，2 號標本中取樣8 μl，3 號標本中取樣10 μl，4 號標本中取樣12 μl，5 號標本中取樣14 μl，各個孔內放置100 μl 稀釋液，陰陽對照10 μl 待測血清標本，將溫度調節為37 ℃，溫育處理1 h、洗板機進行洗板5 min，最后扣干即可，陽性標準為OD值≥臨界值，陰性標準為OD值＜臨界值。

常規組（間接ELISA 法）：間接ELISA 法試劑盒由北京萬泰生物藥業股份有限公司提供，嚴格按試劑盒說明書操作。

試驗組（雙抗原夾心ELISA 法）：雙抗原夾心ELISA 法試劑盒由北京萬泰生物藥業股份有限公司提供，嚴格按照試劑盒說明書操作。

3、觀察指標

檢測結果：記錄抗-HCV陽性、抗-HCV陰性的例數。

診斷效能：統計靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值［4］。靈敏度=真陽性例數∕（真陽性例數+假陰性例數）×100%，特異度=真陰性例數∕（真陰性例數+假陽性例數）×100%，陽性預測值=真陽性例數∕（真陽性例數+假陽性例數）×100%，陰性預測值=真陰性例數∕（真陰性例數+假陰性例數）×100%，陽性檢出率=真陽性例數∕總例數×100%。

4、統計學方法

Excel 整理，SPSS22.0 軟件分析，符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗。計數資料構成比以例（%）表示，采用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。

結果

1、檢測結果

經檢測發現，抗-HCV 陽性標本有8 份，試驗組陽性檢出率為87.50%（7∕8）；常規組陽性檢出率為25.00%（2∕8）；抗-HCV 陰性標本有72 份，試驗組陰性檢出率為97.22%（70∕72）；常規組陰性檢出率為83.33%（60∕72）；兩組比較，差異均有統計學意義（χ2=6.3492、7.9121，P=0.0117、0.0049）。見表2。

表2 兩組丙肝患者的檢測結果比較（份）

2、診斷效能

與常規組比較，試驗組靈敏度、特異度、陽性預測值及陰性預測值更高（均P＜0.05），見表3。

表3 兩組丙肝患者的檢測方法的診斷效能比較（%）

討論

研究發現，丙肝是臨床較常見病癥，機體因感染HCV病毒而患病［5-8］。HCV 屬單股正鏈RNA 病毒，丙肝患者感染初期癥狀不典型，極易被忽視；若疾病持續進展，部分群體具體表現為食欲減退、疲勞等。丙肝具有患病率高、病程長、預后差及難治愈等特征，若疾病持續進展，極易增加慢性肝炎、肝功能衰竭及肝癌等發病風險，甚至對患者生命健康造成直接威脅［9-15］。近年來研究表明，目前全球范圍內的公共衛生問題為HCV，輸血傳播是主要傳播途徑［16］。目前臨床對HCV 控制感染情況并未研制出有效的疫苗進行治療，缺乏針對性治療辦法。因此，控制HVC 感染需嚴格遵守“早期篩查、早期診治”原則，對疾病進展嚴格控制、改善患者生活質量，對減少疾病發生有積極意義［17-20］。

有文獻報道，雙抗原夾心ELISA 法用于丙肝抗體檢測中具有可行性［21］。分析發現：⑴其具有較高的特異度，是篩查抗-HCV 陽性的最常見方式；其充分利用重組抗原技術，提高檢測準確度，借助酶類標記抗原、替代酶類標記二抗，重點對免疫球蛋白（Ig）G、IgM等總抗體進行檢測，對相關抗體進行2 次特異性反應，明顯減少非特異性的IgG 干擾，為檢測準確度提供可靠保障，盡早明確患者疾病情況，改善患者預后，利于達到預期檢測效果，具有實踐價值［22-24］；⑵實際檢測時，加樣量的多少對丙肝抗體的實驗室結果造成直接影響，若加樣量減少，最終結果呈陰性，導致臨床極易被漏診，帶來嚴重醫療安全隱患；且實際進行ELISA 檢測時，人為操作方式最易對最終結果產生不利影響。因此，日常生活中，加強相關操作人員的培訓及技能考核很重要，及時矯正加樣槍，避免人為因素引起假陰性、假陽性結果，利用先進的儀器及穩定的試劑切實完成試驗操作流程，更要對手工操作的準確度高度重視，根據相關操作要求準確完成加樣，可獲得準確的檢驗結果［25-29］。

本研究顯示：⑴抗-HCV 陽性標本有8 份，試驗組陽性檢出率為87.50%，常規組為25.00%；抗-HCV 陰性標本有72份，試驗組陰性檢出率為97.22%，常規組為83.33%；這表明雙抗原夾心ELISA法可盡早檢出抗-HCV陽性，為后期疾病治療提供參考，對改善患者預后效果有積極作用［30］；⑵與常規組比較，試驗組靈敏度、特異度、陽性預測值及陰性預測值更高（均P＜0.05），表明雙抗原夾心ELISA 法具有較高的特異度、靈敏度，可提高診斷效能、縮短疾病確診時間。

綜上所述，采用雙抗原夾心ELISA 法檢測丙肝抗體具有較高的靈敏度、特異度，可盡早明確疾病，對改善患者預后有積極作用，可為疾病治療提供重要的參考數據，值得推廣應用。

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