同位素內標法檢測海參中的甲氰菊酯和撲草凈

馬瑞欣 王曉靜 李雪萍 張鵬燕 周凡

摘 要：建立了液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質譜（LC-MS/MS）同位素內標法同時檢測海參中的甲氰菊酯和撲草凈。樣品經(jīng)乙腈提取，濃縮后LC-MS/MS分析，同位素內標法標準曲線定量。結果表明，甲氰菊酯在0～100 ng/mL、撲草凈在0～50 ng/mL范圍內線性良好，相關系數(shù)均在0.999以上。方法定量限：甲氰菊酯5.0 μg/kg，撲草凈1.0 μg/kg。在5.0～50 μg/kg添加水平下，甲氰菊酯平均回收率在82.4%～102%之間，RSD小于6%;在1.0～50 μg/kg添加水平下，撲草凈平均回收率在104%～115%之間，RSD小于3%。其中甲氰菊酯的回收率明顯優(yōu)于外標法，甲氰菊酯和撲草凈的精密度均優(yōu)于外標法。

關鍵詞：同位素內標法;液相色譜-串聯(lián)質譜（LC-MS/MS）;海參;甲氰菊酯;撲草凈

內標法是在分析測定樣品中某組分含量時，將一個已知質量且樣品中不含有的純物質加入至待測樣品中，以此純物質的量為標準，對比測定待測組分的含量。加入的純物質稱為內標物。內標物的種類較多，其中的同位素內標物因與待測組分具有相似的結構和化學性質，可以降低質譜檢測的基質效應，校正待測組分在樣品前處理中的損失，因而成為液相色譜-串聯(lián)質譜分析中內標物的首選。本文建立了液相色譜-串聯(lián)質譜同位素內標法檢測海參中的甲氰菊酯和撲草凈。

1 實驗部分

1.1 儀器、試劑與材料

LC-20AD液相色譜儀（日本島津）、QTRAP 4500 三重四極桿質譜儀（美國AB SCIEX）、百分之一電子天平（賽多利斯）、平行蒸發(fā)儀（瑞士BUQI）、TDZ5-WS離心機（湖南湘儀）、MS3渦旋混合器（IKA）、JYS-A8000絞肉機（九陽）。

甲氰菊酯1 000 μg/mL（丙酮）、撲草凈1 000 μg/mL（丙酮）、甲氰菊酯-D5：均為FirstStandard;撲草凈-D6 100 μg/mL（丙酮）：DR。

標準儲備液：取適量甲氰菊酯和撲草凈的標準溶液，氮氣吹干溶劑后，用乙腈定容成100 μg/mL的儲備溶液。

混合標準溶液：取適量標準儲備液，用乙腈稀釋成1 000 ng/mL的混合標準溶液。

甲氰菊酯-D5儲備液：用乙腈配制成100 μg/mL的儲備液。

撲草凈-D6儲備液：取適量撲草凈-D6標準溶液，氮氣吹干溶劑后，用乙腈定容成100 μg/mL的儲備液。

混合內標標準溶液：取適量甲氰菊酯-D5儲備液和撲草凈-D6儲備液，用乙腈稀釋成1 000 ng/mL的混合內標標準溶液。

乙腈和甲醇（HPLC Grade，Merck）、甲酸（HPLC Grade，DIKMA）、0.2 μm濾膜（PALL），實驗所用水為超純水。

定容溶液：乙腈和水體積比1∶1混合。

1.2 試樣制備

海參去內臟后切成小塊后混勻，絞肉機絞碎，裝入潔凈容器中，密封，-20 ℃保存。

1.3 樣品前處理

稱取5.00 g樣品（精確到0.01 g）于50 mL離心管中，加入混合內標標準溶液100 μL，渦旋混勻1 min，室溫靜置不少于30 min。加入10 mL乙腈，3 000 r/min渦旋混勻2 min，4 000 r/min離心5 min，上清液移入25 mL比色管中;殘渣中再加入10 mL乙腈，3 000 r/min渦旋混勻2 min，超聲5 min，4 000 r/min離心5 min，上清液合并至25 mL比色管中，乙腈定容至25.0 mL，混勻備用。

準確移取5.00 mL提取液45 ℃ 蒸發(fā)至干。準確加入2.00 mL定容溶液溶解殘渣，溶液經(jīng)0.2 μm濾膜過濾后供液相色譜-串聯(lián)質譜分析。

1.4 液相色譜-串聯(lián)質譜條件

液相色譜條件：色譜柱 AccucoreTM? aQ（100 mm×2.1 mm，2.6 μm），柱溫40 ℃，流速0.5 mL/min，進樣量5 μL，流動相A為 0.005 mol/L 乙酸銨溶液（含0.3% 甲酸），B為甲醇;梯度洗脫程序：0～1 min，10%B;1～3 min，10%B～90%B;3～5 min，90%B;5～5.1 min，90%B～10%B;5.1～7 min，10%B。

質譜條件：電噴霧離子源（ESI），多反應掃描（MRM）正離子模式，噴霧電壓5 500 V，氣簾氣30 PSi， 碰撞氣Medium;溫度550 ℃;霧化氣：55 PSi;輔助加熱氣：55 PSi。質譜條件及參數(shù)見表1。

1.5 標準系列配制

取混合標準溶液和混合內標標準溶液用定容溶液稀釋成0.5、1.0、2.0、5.0、10、25、50、100 ng/mL的標準系列，其中內標含量為10.0 ng/mL。

2 結果與討論

2.1 質譜條件的確定

分別取1 μg/mL的標準溶液通過蠕動泵注入質譜中，尋找母離子、子離子和碰撞能，并優(yōu)化去簇電壓和碰撞池出口電壓。甲氰菊酯和甲氰菊酯-D5的母離子選擇加NH+4離子m/z 367.1和m/z 372.2，因為加NH+4母離子產(chǎn)生的子離子m/z 125.1產(chǎn)生的信號強且干擾少。

2.2 前處理條件的確定

實驗發(fā)現(xiàn)中性氧化鋁柱對甲氰菊酯和撲草凈的凈化作用不明顯，故省去中性氧化鋁柱的凈化步驟[1]。

2.3 線性范圍

以濃度為橫坐標，定量離子與內標物子離子的峰面積比為縱坐標繪制標準曲線。甲氰菊酯在0～100 ng/mL、撲草凈在0～50 ng/mL范圍內均呈現(xiàn)良好線性關系，線性系數(shù)r>0.999，見表2。四種物質的多反應掃描質量色譜圖見圖2。

2.4 回收率和精密度

通過空白樣品添加標準物質的方式進行回收率和精密度測試，添加梯度為1.0、5.0、10、50 μg·kg-1，回收率和精密度見表3和表4。由表中數(shù)據(jù)可知，在5.0～50 μg·kg-1添加范圍內，甲氰菊酯平均回收率在82.4%～102%之間，RSD在1.89%～5.26%之間;在1.0～50? μg·kg-1添加范圍內，撲草凈平均回收率在104%～115%之間，RSD在1.28%～2.71%之間。

2.5 定量限

通過分析表3和表4中的回收率和RSD值，甲氰菊酯的定量限可定為5.0 μg·kg-1，撲草凈的定量限可定為1.0 μg·kg-1。

2.6 實際樣品檢測

檢測實際樣品38份，檢測結果與外標法[1]和氣-質聯(lián)用法[2-3]一致。

3 結論

本方法建立了液相色譜-串聯(lián)質譜同位素內標法同時檢測海參中的甲氰菊酯和撲草凈。前處理操作更加簡單[2-3]，甲氰菊酯的回收率優(yōu)于外標法[1]，甲氰菊酯和撲草凈的精密度均優(yōu)于外標法[1]。

參考文獻：

[1] 馬瑞欣，周凡，李雪萍，等.液相色譜-串聯(lián)質譜法測定海參中的甲氰菊酯和撲草凈含量[J].河北漁業(yè)，2021（7）：22-24.

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部中國國家標準化管理委員.動物性食品中有機氯農(nóng)藥和擬除蟲菊酯農(nóng)藥多組分殘留量的測定：GB/T 5009.162-2008[S].北京：中國標準出版社，2009：1-16.

[3] 中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局.進出口食品中撲草凈殘留量檢測方法 氣相色譜-質譜法： SN/T 1968-2007[S].北京：中國標準出版社，2008：1-6.

（收稿日期：2022-02-17）