梅毒螺旋體實驗室檢測技術研究進展

王超

濟寧市中醫院檢驗科，山東濟寧 272000

梅毒約在19 世紀傳入我國，曾在建國初期消失，但20 世紀70 年代在我國重新出現且發病率快速上升。梅毒是由梅毒螺旋體感染人體引起的一種性傳播疾病，主要通過性接觸、母嬰以及血液傳播，人體遭受梅毒螺旋體感染后約有1～2 周的潛伏期，之后梅毒螺旋體侵入部位發生炎癥反應，再經過6～8 周，所有的組織及器官均會被梅毒螺旋體感染，此時為二期梅毒。患者若不及時治療，可引發梅毒性腦膜炎、腦膜塑膠樣腫等癥狀，盡早檢查阻斷梅毒傳播途徑，盡早治療改善患者的預后。而梅毒螺旋體實驗室檢測結果是診斷梅毒最直接的證據，本研究對近年來梅毒螺旋體實驗室檢測技術的發展以及臨床應用情況進行了回顧性分析，現報道如下。

1 梅毒螺旋體血清學檢測技術

從臨床上看，如患者伴有紅斑狼瘡等免疫系統疾病，甲苯胺紅不加熱血清試驗可出現假陽性的情況。有研究指出，在沒有報道梅毒感染史的正常人群中應用甲苯胺紅不加熱等試驗約有0.1%的假陽性率[1]。因此，這一種檢測技術現階段已經較少應用于實踐中，更多的是采用靈敏度及特異性更高的梅毒螺旋體實驗室檢測技術。

因為梅毒螺旋體培養周期較長且培養難度大，所以梅毒螺旋體血清學檢測被廣泛地應用于國內基層實驗室中，是國內篩查與診斷梅毒最常用的檢測技術，目前國內常用的梅毒螺旋體血清學檢測技術主要有以下幾種。

1.1 酶聯免疫吸附試驗

酶聯免疫吸附試驗經過十余年的發展，目前大多采用基因工程的方法，提高了試劑的特異性以及檢測結果的準確性。從時間來看，國內許多醫療機構采用雙抗夾心法檢測梅毒螺旋體特異性抗體，利用酶放大效應可以更好地檢出梅毒各期感染情況，而且這種檢測方法檢查費用低，自動化操作也可以減少人為因素對結果的影響[2]。在酶聯免疫吸附試驗中用于檢測梅毒螺旋體的IgG 與IgM 抗體與梅毒特異性抗體有較強的相關性，因此是基層醫療機構梅毒血清學診斷最常用的技術。然而，在酶聯免疫吸附試驗中也會受標本中部分類過氧化物酶物質的影響出現假陽性的結果，而且許多梅毒患者在治愈后會終身攜帶梅毒IgG 抗體，因此這一血清學檢測技術陽性結果只能反映受檢者正在被感染或者是曾經感染過梅毒螺旋體[3]。近年來一種基于TpN17 和TpN47 抗原表位序列融合成的人工基因片段的新型酶聯免疫吸附試驗方法被研制出來并被應用于臨床中，發現這一種新型酶聯免疫吸附試驗方法與梅毒螺旋體明膠凝集試驗有相似的檢出率，為酶聯免疫吸附試驗在梅毒螺旋體實驗室檢測及梅毒診斷中的應用提供了新的方向[4]。

1.2 梅毒螺旋體血球凝集試驗

這一種血清學檢測技術是以梅毒螺旋體作為抗原的間接血細胞凝集試驗，再通過致敏紅細胞與人血清的梅毒螺旋體抗體結合產生的凝集反應進行診斷的一種技術，是一種特異性的血清學檢測技術，具有靈敏度高與操作簡便等特點。梅毒螺旋體血球凝集試驗除早期梅毒外對其他梅毒患者的靈敏度與梅毒診斷“金標準”—熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗類似，而且因為其容易操作的特點已經成為國內實驗室常用的梅毒螺旋體確證試驗方法[5]。然而，梅毒螺旋體血球凝集試驗目前尚未實現自動化檢測，而且也因為紅細胞具有生物活性，所以在檢測過程中可能產生自凝現象[6]。除此之外，國內普遍使用的商品化梅毒螺旋體血球凝集試驗試劑盒均未通過國家的批檢，目前這一種血清學檢測技術已經被梅毒螺旋體顆粒凝集試驗所替代。

1.3 梅毒螺旋體顆粒凝集試驗

梅毒螺旋體顆粒凝集試驗是以人工合成的惰性凝膠顆粒替代紅細胞作為載體的一種血清學檢測技術，其試驗原理與梅毒螺旋體血球凝集試驗相近。梅毒螺旋體顆粒凝集試驗早在本世紀初就被美國疾病預防控制中心推薦用于梅毒確診實驗，其檢測試劑盒也通過了國家的批檢。在國內多項研究中，梅毒螺旋體顆粒凝集試驗敏感性與特異性顯著高于甲苯胺紅不加熱等檢測技術[7-8]。

1.4 免疫膠體金試驗

這一種梅毒螺旋體抗體檢測技術主要是采用純化的梅毒重組抗原，以膠體金作為指示標記，快速檢測梅毒特異性抗體。免疫膠體金試驗方法操作便捷、價格低廉，所以被廣泛地應用于基層醫療機構篩查與診斷梅毒的實驗室檢測中，測試時主要是將患者血清標本滴入試劑和加樣孔內血標本中的梅毒抗體與預包被在膜上的膠體金結合物發生反應，所產生的混合物會在毛細效應下向上層析[9-10]。倘若受檢者血清中含有抗梅毒抗體，在測試區內可見一條紫紅色條帶，無抗梅毒抗體的則不會出現紫紅色條帶。在等待紫紅色條帶出現過程中需要檢測人員注意背景清晰，尤其是對于含有滴滴度的抗梅毒抗體的檢測標本，且要在15 min 內讀取測試結果，保證讀取結果的準確性。雖然免疫膠體金試驗之后呈現的紫紅色條帶會因樣本中抗梅毒抗體滴度的不同顏色有較大的差異，但這一結果并不能作為判定樣本中抗體滴度高低的依據[11]。近年來，國內外許多醫藥企業加大了對高靈敏度與特異性的免疫膠體金試驗技術與產品的研發，國內一家企業自主研發的梅毒螺旋體抗體膠體金檢測試紙條具有較高的靈敏度與特異性，可作為基層醫療機構緊急開展梅毒傳染病篩查的首選。

1.5 梅毒螺旋體免疫印跡試驗

這一項檢測技術在20 世紀80 年代得到了發展，主要是借助轉移硝酸纖維膜條上含有的梅毒螺旋體各種成分，在其與待測血清與酶標抗體孵育以及底物顯色后，如果出現顯色條帶，則可判定送檢的血清中存在梅毒特異性抗體[12]。國外有部分學者認為，梅毒螺旋體免疫印跡實驗診斷梅毒的效果優于梅毒螺旋體血球凝集試驗，在早期潛伏梅毒以及神經梅毒的篩查與診斷中均有良好的效果，在對非梅毒螺旋體標本的檢測中也未出現假陽性的結果[13]。與梅毒螺旋體顆粒凝集試驗相比，這一項檢測技術結果更容易判定。但梅毒螺旋體免疫印跡試驗也有檢測費用較高的缺點，這也限制了這一項技術的廣泛應用。

1.6 化學發光免疫測定

這一項檢測技術是免疫分析法與化學發光法結合的一種新型檢測技術，其線性范圍寬，檢測的靈敏度也會高于酶聯免疫吸附試驗，是繼酶聯免疫吸附實驗后梅毒螺旋體實驗室檢測技術中的新主流技術。因為化學發光免疫測定的自動化程度高、檢測速度快，所以檢測的靈敏度、特異性與梅毒螺旋體顆粒凝集試驗的靈敏度與特異性持平或更高。現階段，國際上有名的生物醫藥公司先后研制了化學發光檢測儀以及化學發光免疫測定試劑盒，如瑞士羅氏公司等，國內也有多家企業自主研制了化學發光儀以及相應的試劑盒，為化學發光免疫測定技術在梅毒螺旋體檢查中的應用提供了技術支撐[14-15]。

2 梅毒螺旋體病原學檢測技術

國內外多個國家的指南中推薦梅毒螺旋體血清學檢測與病原學檢測，這兩種實驗室檢測方法用于梅毒鑒別診斷中，梅毒螺旋體病原學檢測主要方法有暗視野顯微鏡檢查、直接免疫熒光法以及近年來快速發展的梅毒螺旋體核酸擴增檢測技術[16-18]。

2.1 暗視野顯微鏡檢查

這一項檢測技術是國內基層醫療機構常用的梅毒病原學診斷方法，主要借助暗視野顯微鏡，直接觀察病灶分泌物中運動活潑的梅毒螺旋體，并結合患者的臨床癥狀直接診斷梅毒，適用于一期梅毒以及二期梅毒早期的篩查與診斷中，大多是從硬下疳、宮頸、陰道等部位取材。然而，陰道、肛門等部位有大齒密螺旋體以及其他條件致病螺旋體存在，在檢測過程中容易將這些病原體與梅毒螺旋體混合進而影響診斷。

2.2 直接免疫熒光法

這一種梅毒螺旋體病原學檢測技術是現階段國外應用較多的一種檢測技術，是由專業的檢測人員將特異性的抗梅毒螺旋體單克隆抗體使用熒光素標記后在熒光顯微鏡下觀察其是否會與抗原特異性結合后產生蘋果綠色的梅毒螺旋體。從臨床應用情況來看，直接免疫熒光法的特異性以及靈敏度均明顯高于暗視野顯微鏡檢查。

2.3 梅毒螺旋體核酸擴增檢測技術

梅毒螺旋體核酸擴增檢測技術是一種新型的梅毒螺旋體病原學檢測技術，近年來國內外學者加大了對這一項技術的研究，目前仍處于研發階段，國內外均未有批準核酸檢測的試劑盒上市，但從研發階段的實驗結果來看，該項技術具有廣闊的應用前景[16]。目前國內外正在研發的梅毒螺旋體核酸擴增檢測技術包括定時熒光定量PCR、多重PCR、反轉錄PCR 等檢測技術。

3 結語

梅毒螺旋體感染引起的梅毒對輸血安全以及母嬰安全構成了嚴重威脅，加強對梅毒螺旋體的檢測對于鑒別診斷梅毒具有重要的意義。目前梅毒螺旋體時驗視檢測技術包括血清學檢測以及病原學檢測，血清學檢測的方法較多，常用的有酶聯免疫吸附試驗、梅毒螺旋體顆粒凝集實驗等，具有較高的靈敏度與特異性，在梅毒篩查與診斷中發揮著重要的作用。暗視野顯微鏡檢查、直接免疫熒光法是國內外常見的梅毒螺旋體病原學檢測技術，隨著國內外在這一領域研究的不斷深入，梅毒螺旋體核酸擴增檢測技術被研發出來且在臨床試驗中取得了良好的效果，在梅毒螺旋體實驗室檢測中具有廣闊的應用前景。