芪歸紫草油干預大鼠Ⅳ期壓力性損傷的實驗研究?

程 紅， 馬希佳， 任 娟， 邵 帥， 陳夢利， 馬純政△

(1.河南省中醫院， 鄭州 450002；2.河南中醫藥大學， 鄭州 450000)

壓力性損傷是典型的慢性難愈性傷口，其診療、康復、預防、護理及基礎研究等是國際傷口修復領域研究的熱點和難點[1]。尤其是Ⅳ期壓力性損傷愈合困難，嚴重影響患者生命安全及生活質量。前期臨床研究發現，芪歸紫草油治療深度壓力性損傷能達到加速創面愈合、減輕疼痛的作用[2]。為深入探討其作用機制，更有效地解決臨床問題，筆者通過構建大鼠Ⅳ期壓力性損傷模型觀察芪歸紫草油對模型大鼠創面愈合率及血清中C-反應蛋白(c-reactive protein,CRP)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor，TNF-α)含量的變化,現報道如下。本研究通過河南省中醫院實驗動物倫理委員會批準(批號20180315WZ)。

1 材料與方法

1.1 動物

選用SPF級Wistar健康雄性大鼠 60只，12～14周，體質量200～300 g，由河南省中醫院中心實驗室，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物許可證號SCXK(京)2016-0006。大鼠分籠飼養，自由飲水和進食。在室內溫度22～30 ℃、相對濕度 50%～70%、明暗周期 12 h 的環境中適應性喂養1周。

1.2 主要試劑

CRP及TNF-α ELISA試劑盒購自R&D公司,貨號分別為EIA05976及0807168。

1.3 造模材料

圓片形鐵片，直徑12 mm、厚1 mm、重1 g，磁通量1750 Gs(磁鐵表面磁通量經過檢測)，購置于東莞市眾城磁性材料有限公司。

1.4 藥物制備方法

芪歸紫草油制備方法為取黃芪60 g、當歸30 g、新疆紫草60 g、大黃30 g(以上中藥均購置于河南省中醫院中藥房)，均勻切碎加入1 kg的芝麻油浸泡1周后，置鍋中用武火加熱至油沸，油溫計測量油溫穩定在170 ℃后改用文火加熱，油溫穩定在100 ℃，不斷攪動將藥物炸枯至表面色黑、內部色深褐色時關火，待油溫降至60 ℃左右時過濾去渣，加入凡士林30 g、珍珠粉60 g、冰片60 g攪勻成膏狀，置于潔凈容器中高壓滅菌密封保存，綿白糖100 g碾粉裝瓶備用即可[3]。龍珠軟膏購自馬應龍藥業集團股份有限公司，國藥準字Z10950017，規格：每支10 g。

1.5 Ⅳ期壓力性損傷大鼠模型的構建

將適應性喂養1周的大鼠于實驗前8 h禁食水，用10%水合氯醛(300 mg/kg)腹腔注射麻醉后，在其背部正中線做一深至筋膜的切口鈍性分離，將高壓滅菌的圓片形磁鐵植入大鼠背部皮下，體外采用圓環形磁片間歇性施加壓力造成皮膚缺血，每次缺血2 h后將磁片拿下，讓局部血流恢復30 min，如此進行1個循環。每只大鼠每日進行3個循環，連續進行4 d即可得Ⅳ期壓力性損傷大鼠模型。

1.6 建模成功判斷標準

顏色：借助無色透明玻璃按壓3 s，皮膚顏色未改變[3]。外觀：鐵片邊緣紅腫糜爛有滲液或滲血。可伴有壞死，針刺皮膚無痛感，鐵片暴露或滑脫，皮膚會變硬或變成黑色焦痂，伴有骨骼、肌腱或肌肉的暴露[4]。

1.7 分組與治療方法

連續造模4 d后共有55只大鼠造模成功，淘汰1只，其余54只大鼠隨機分為模型組、龍珠軟膏組和治療組(芪歸紫草油組)每組各18只。第5天開始清創治療。模型組先用 0.9% 氯化鈉溶液清洗創面，再用碘伏消毒液進行3次消毒創面，用無菌剪祛除壞死組織或痂皮后進行紗布填塞或覆蓋，保證紗布與創面充分接觸，用透氣低敏膠布固定。龍珠軟膏組外科清創及換藥同模型組，再將龍珠軟膏紗布填塞或覆蓋在皮膚損傷處，保證紗布與創面充分接觸，用透氣低敏膠布固定。治療組(芪歸紫草油組)外科清創及換藥同模型對照組，再將芪歸紫草油紗布層灑上粉碎后的白糖粉加壓包扎，用透氣低敏膠布固定。所有大鼠均隔天換藥1次，直到創面愈合或實驗結束。

1.8 觀察指標及檢測方法

1.8.1 創面愈合率測定 創傷后第3、7、15、21天，用創面照相結合透明方格紙描記法測量創面大小，計算創面愈合率[5]。創面愈合率=(原創面面積-現創面面積)/原創面面積×100%。

1.8.2 血清CRP和TNF-α檢測 于治療后2 h、3 d、15 d、21 d晨取大鼠尾靜脈血0.5 mL，分別用ELISA試劑盒檢測血清CRP和TNF-α值。

1.9 統計學方法

2 結果

2.1 各組大鼠創面愈合率比較

表1示，在觀察終點第21天，治療組與龍珠軟膏組創面愈合率均明顯高于模型組(P<0.05，P<0.01)，其中治療組創面愈合率較龍珠軟膏組更高(P<0.05)。

表1 各組不同時間點大鼠創面愈合率比較(%)

2.2 各組大鼠血清CRP與TNF-α含量比較

表2、3示，第15天和第21天時治療組與龍珠軟膏組血清CRP與TNF-α含量均明顯低于模型組(P<0.05，P<0.01)，其中治療組CRP與TNF-α含量較龍珠軟膏組更低(P<0.05)。

表2 各組不同時間點大鼠血清C-反應蛋白(C-reactive protein,CRP)含量

表3 各組不同時間點大鼠血清腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF -α)含量比較

3 討論

現代醫學認為，壓力性損傷發生的最重要原因為局部組織長期受壓引起血液循環障礙伴神經營養功能紊亂。局部組織持續缺氧缺血最終導致軟組織壞死和皮膚損傷，同時伴有血清炎癥指標升高[6]。在療效方面，損傷部位的創面愈合率是最重要的評價標準，血清CRP與TNF-α則是反映機體炎癥水平的重要指標[4]。本實驗數據顯示，治療組無論在降低創面愈合率還是在血清炎癥指標方面都明顯優于龍珠軟膏組，說明芪歸紫草油換藥具有更佳的抗菌消炎、斂瘡生肌作用。該方為經驗方，方中黃芪為君藥，具有托毒排膿、斂瘡生肌之功效[7]；當歸為臣藥，具有補血活血、化瘀止痛之作用；黃芪、當歸兩者相伍既能托毒外出又能補氣生血，促進新肉生長；佐使藥為大黃、紫草、珍珠粉，其中大黃對炎性滲出物引起的腫脹有明顯的抑制作用[8]；紫草應用于創面后可明顯抑制毛細血管通透性，加速上皮修復進程[9]，減少瘢痕組織的形成；珍珠粉解毒生肌，具有疏通微循環功能[10]；麻油具有極強的親脂性，可使創面內的環境呈油潤狀態，能有效避免干燥損傷的刺激，減輕換藥造成的疼痛；油化后的紫草、大黃等藥物其抗菌、去腐作用加速壞死組織的脫落，控制或減少由創面感染引起敗血癥的機會，全方共奏益氣養血、化瘀止痛、斂瘡托毒之功效。此外，用麻油紗布貼敷創面可在創面組織表面結合成一層保護屏障，有利于創面上皮細胞的生長[11]，具有一舉三得的功效；采用食用白糖作為芪歸紫草油的基質，主要是考慮到食用白糖溶化后可在創面形成高滲狀態，導致炎癥細胞脫水變性壞死，使創面內的pH 值下降形成酸性環境，促進炎癥吸收和創面收斂[12]，協同芪歸紫草油共同達到促進創面愈合的目的。

總之，實驗證明芪歸紫草油對大鼠Ⅳ期壓力性損傷具有比龍珠軟膏更強的修復作用，結合前期臨床研究結果，建議將此方法在臨床中推廣應用，讓更多的患者受益。