穿心蓮對斑點叉尾鮰非特異性免疫機能的影響研究

麻艷群，覃志彪，陳 晶，曲照球

(廣西大學動物科學技術學院，廣西 南寧 530005)

隨著全國各地集約化養殖范圍的不斷擴大，斑點叉尾鮰病害發生情況日趨嚴重。因此，尋找開發天然、環保、安全有效的藥物對斑點叉尾鮰的養殖具有重要的意義。穿心蓮(Andrographis paniculata)含有多種生物活性成分，具有抗炎、抗菌、抗病毒等作用。目前，已有研究報道了黃芪、黃連、大黃、黃柏、杜仲、五倍子、蓖麻等傳統中草藥對斑點叉尾鮰生長和免疫性能的影響(王慶奎等，2011；簡少卿等，2011；郭永軍等，2012；陶莎，2020)，但穿心蓮對斑點叉尾鮰免疫方面的研究還未見報道。本試驗以斑點叉尾鮰為研究對象，探討在飼料中添加不同水平的穿心蓮粉對其免疫性能方面的影響。

一、材料與方法

1.試驗材料

試驗魚購買自橫縣石塘鎮良種場。試驗期投喂的各組飼料是在基礎飼料配方中分別按0、0.38%、0.75%、1.13%、1.50%、1.88%、2.25%、2.63%、3.00%的量添加穿心蓮粉?；A日糧組成見表1。

表1 基礎日糧組成

2.試驗設計

馴養7天后選擇健康、無病害、規格基本一致的斑點叉尾鮰［初始體重為(5.92±0.63)克，初始體長為(7.32±0.33)厘米］270 尾，隨機分成9 組(G0、G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8 組)，每組設3 個重復，每個重復10 尾，放養于循環水式水族箱里，分別投喂對應編號的復方飼料。其中，G0組為對照組。

3.飼養管理

每天分別于9:30 和17:30 定時投喂，日均投餌率為3%。試驗期間水溫為24～27℃。每天觀察記錄各組魚的活動及采食情況。

4.測定指標及方法

(1)樣品采集。養殖試驗結束后，試驗魚停飼24 小時。每組隨機抽取15 尾魚，測量體長、體重等形態參數，隨后將其解剖，取肝臟和肌肉。

(2)非特異性免疫相關酶的測定。采用試劑盒(購自南京建成生物工程研究所)測定肝臟和肌肉中的溶菌酶(LSZ)含量、肌肉中的超氧化物歧化酶(SOD)活性以及肝臟中乙酰膽堿酯酶(AChE)活性，嚴格按照試劑盒說明書提供的操作步驟和計算公式進行測定并計算出各指標的含量。

5.數據統計與分析

試驗數據采用SPSS 20.0 軟件進行單因素方差分析，采用Duncan's法進行多重比較，結果以“平均值±標準差”表示，P＜0.05 表示差異顯著。

二、結果與分析

1.穿心蓮對斑點叉尾鮰肝臟和肌肉中LSZ含量的影響(表2)

由表2 可知，G8 組肝臟中的LSZ 含量最高，G7、G8 組肝臟中的LSZ 含量顯著高于其他各組(P＜0.05)。G8 組肌肉中的LSZ 含量最高，顯著高于其他各組(P＜0.05)。

表2 穿心蓮對斑點叉尾鮰肝臟和肌肉中LSZ的影響 微克/毫克

2.穿心蓮對斑點叉尾鮰肌肉中SOD 活性的影響(表3)

由表3可知，G2組肌肉中的SOD活性最高，顯著 高 于G1、G3、G5 和G6 組(P＜0.05)，與G0、G4、G7和G8組差異不顯著(P＞0.05)。

表3 穿心蓮對斑點叉尾鮰肌肉中SOD活性的影響 單位/毫克

3.穿心蓮對斑點叉尾鮰肝臟中AChE 活性的影響(表4)

由表4 可知，G5 組肝臟中的AChE 活性最高，其次為G3組，G3、G5組肝臟中的AChE活性顯著高于G0、G1、G7和G8組(P＜0.05)。

表4 穿心蓮對斑點叉尾鮰肝臟中AChE活性的影響 單位/毫克

三、討論

溶菌酶是魚類免疫應答中的一類酶，它除了能夠通過水解細菌細胞壁黏性多肽中的乙酰氨基多糖成分，使細菌因滲透壓不平衡導致破裂死亡外(汪多等，2017)，還能誘導和調節其他免疫因子的合成與分泌(向梟等，2011)。機體內溶菌酶的活性可以間接反映機體抗病毒、抗感染和免疫能力的強弱(王颯爽等，2020；譚娟等，2015)。穿心蓮主要含有穿心蓮內酯、生物堿、黃酮類化合物、甾醇皂苷、糖類等成分(吳海洋等，2020)，其中的二萜內酯類具有較強的抗菌活性，對枯草桿菌、大腸埃希菌、黑曲霉、青霉都有明顯的抑菌效果(張曉等，2018)。陳孝煊等(2003)用含1%穿心蓮的餌料投喂異育銀鯽，結果發現1%穿心蓮可顯著提高異育銀鯽體表黏液和血清中的溶菌酶活性。在本試驗中，添加2.63%～3.00%穿心蓮的試驗組魚肌肉和肝臟中溶菌酶活性最高，且顯著高于其他各組，說明在飼料中添加2.63%～3.00%的穿心蓮能有效提高斑點叉尾鮰肌肉和肝臟中的溶菌酶活性。

超氧化物歧化酶是廣泛存在于生物體內的一種抗氧化酶，主要起到防止生物分子損傷、清除超氧自由基等作用，其活性可以反映機體抗氧化能力的強弱(陳福艷等，2019)，且與病原菌生物的入侵及生物的免疫水平密切相關(Holmblad T等，1999)。艾春漢等(2009)在羅非魚飼料中添加穿心蓮浸膏粉，發現試驗血清中的SOD活力顯著提高。但也有不同的報道，葛婧等(2016)用不同濃度的穿心蓮浸膏粉飼喂半滑舌鰨7、14、21 天后，發現5、10 克/千克濃度的穿心蓮可以有效提升半滑舌鰨的血清SOD活性；7、15克/千克濃度的穿心蓮會使SOD活性低于對照組；相同濃度的穿心蓮投喂半滑舌鰨21 天，魚血清SOD 活性低于飼喂14 天的，說明穿心蓮對半滑舌鰨血清SOD活性的影響受到穿心蓮濃度、飼喂天數的共同作用。在本試驗里，添加穿心蓮對魚肌肉中的SOD活性未表現出明顯規律，添加0.75%穿心蓮的試驗組魚肌肉中的SOD 活性最高，但與對照組差異不顯著；添加0.38%、1.13%、1.88%、2.25%穿心蓮的試驗組其肌肉中的SOD活性低于對照組，推測造成這樣結果的原因與中草藥的種類及投喂時間長短有關。

乙酰膽堿酯酶是水解乙酰膽堿的特異性膽堿酯酶，能快速水解膽堿并促使神經末梢釋放乙酰膽堿，可作為中樞和外周神經遞質調控免疫功能，間接反映魚體免疫應答能力的強弱(李宗寶，2018)。史曉委(2012)發現AChE能通過本身活性的改變來調節櫛孔扇貝機體的免疫應答水平，對扇貝的免疫調節起重要作用。在本試驗里，添加0.75%～2.25%穿心蓮的試驗組魚肝臟中的AChE 活性顯著高于對照組，說明適宜添加水平的穿心蓮在提高斑點叉尾鮰免疫應答方面有積極作用。