葡萄糖調節蛋白78、可溶性血管內皮生長因子受體1、STOX1在子癇前期患者血清中表達及相關性研究

黃莉莉，黃秀敏，杜 瑜，馬玉平

廈門大學附屬中山醫院1.婦產科；2.藥學部，福建 廈門 361004

子癇作為孕婦在圍產期的特發性疾病，常會伴隨水腫、頭痛、惡心、嘔吐等臨床癥狀。子癇前期(preeclampsia，PE)會對孕婦器官功能甚至大腦功能造成損傷，同時威脅孕婦以及胎兒的生命健康[1]。有研究顯示，我國PE發病率高達10%左右，且呈不斷升高趨勢[2]。目前，PE的發病機制尚不清楚，臨床預防及治療難度較大[3]。有研究指出，血清中細胞因子水平變化與PE發生、發展密切相關[4]。葡萄糖調節蛋白78(glucose regulated protein 78，GRP78)能夠與蛋白質進行折疊甚至組裝，從而維持機體內環境穩定[5]。可溶性血管內皮生長因子受體1(soluble fms-like tyrosine kinase-1，sFlt-1)水平出現異常時，能夠間接影響到滋養層細胞的增殖，促進疾病的發展[6]。STOX1作為易感基因，能夠隨著孕周的增長而增長，進而參與到PE的發生、發展之中[7]。本研究旨在探討GRP78、sFlt-1、STOX1在PE患者血清中的表達及相關性。現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取廈門大學附屬中山醫院自2020年4月至2021年4月收治的77例PE患者為研究對象。納入標準：符合《婦產科學》[8]中PE診斷標準；孕周≥20周；單胎妊娠；存在高血壓、尿蛋白癥狀；經血壓、心電圖、24 h尿蛋白等檢查確診；妊娠前無高血壓病史。排除標準：惡性腫瘤；合并其他妊娠相關疾病；心腎功能障礙；凝血功能障礙、免疫功能障礙；妊娠前存在糖尿病、高血壓史；合并肝炎、結核等傳染疾病。根據《婦產科學》[8]中病情嚴重程度將其分為輕度PE組(n=42)與重度PE組(n=35)。另選取50例同期于我院孕檢的健康妊娠女性為健康組。本研究經醫院倫理委員會批準。所有孕婦均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 收集3組研究對象24 h尿液，準確量取后送檢，采用全自動生化分析儀及配套試劑盒(利德曼生化股份有限公司)測定24 h尿蛋白定量。嚴格遵循試劑說明書進行操作。計算并比較3組研究對象的平均動脈壓。體檢當天，分別采集3組空腹外周靜脈血5 ml。常溫靜置，以3 000 r/min離心10 min，分離上清。采用雙抗體酶聯免疫吸附法測定血清GRP78、sFlt-1、STOX1水平。設置酶標板為空白孔、標準孔、待測樣品孔，每孔內均加入50 μl稀釋液，空白孔、標準孔、待測樣品孔內依次加入樣品稀釋液、標準品、待測樣片各50 μl，輕晃均勻，酶標板覆膜，室溫孵育2 h。棄孔內液體，甩干，清洗反應板。分別加入GRP78、sFlt-1、STOX1檢測液，100 μl/孔，覆膜，常溫孵育1.0 h，棄液體，甩干、洗滌反應板，加入100 μl/孔底物溶液，遮光顯色0.5 h，加入終止液，輕彈酶標板終止反應。酶標儀(型號iMark，Bio-RAD公司)450 nm處測定吸光值。嚴格遵循試劑說明書進行操作。

2 結果

2.1 3組研究對象一般資料比較 3組研究對象年齡、孕次、孕周、體質量指數(body mass index，BMI)比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。輕度PE組、重度PE組24 h尿蛋白定量、平均動脈壓均高于健康組，差異均有統計學意義(P<0.05)；重度PE組24h尿蛋白定量、平均動脈壓均高于輕度PE組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組研究對象一般資料比較

2.2 3組研究對象血清GRP78、sFlt-1、STOX1水平比較 輕度PE組、重度PE組患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于健康組，差異均有統計學意義(P<0.05)。重度PE組患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于輕度PE組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組研究對象血清GRP78、sFlt-1、STOX1水平比較

2.3 血清GRP78、sFlt-1、STOX1與PE發生相關性分析 血清GRP78、sFlt-1、STOX1與PE發生呈正相關性(r=0.671、0.594、0.714，P<0.05)。

2.4 GRP78、sFlt-1、STOX1對PE的診斷價值 與GRP78、sFlt-1、STOX1單項診斷相比，三項聯合對PE的診斷價值較高(P<0.05)。見表3。血清GRP78、sFlt-1、STOX1診斷PE的ROC曲線見圖1。

圖1 血清GRP78、sFlt-1、STOX1診斷PE的ROC曲線

表3 GRP78、sFlt-1、STOX1對PE診斷指標比較

3 討論

有學者指出，PE的發生發展與免疫調節功能、血管內皮損傷、遺傳等因素密切相關[9]。以上原因雖然與PE的發生發展密切相關，但單獨任一因素均不能夠導致PE的發生，所以,PE的發生發展受多因素共同影響[10-11]。因此，及早有效地對PE病情作出判斷，能夠為PE的預防以及治療起到積極作用。有研究發現，GRP78在真核生物內質網膜上以非共價鍵形式短暫的結合新生多肽，從而促進蛋白質的正確折疊以及裝配，并且協助其運送[12-13]。有研究顯示，對PE胎盤滋養細胞進行檢測，GRP78蛋白在各種子癇中均呈現高表達[14]。GRP78與PE密切相關，可能參與了PE的發生發展。sFlt-1可抑制胎盤生長因子，對滋養層細胞增殖及血管生成產生影響，進而引發妊娠期高血壓[15-16]。sFlt-1在機體中能夠與血管內皮生長因子相結合，進而阻斷血管內皮生長因子的生物學反應，促使胎盤局部出現缺氧的狀態，加重PE發展[17]。當STOX1出現異常上升時，會導致細胞間的α-T-鏈接蛋白表達上調，對滋養細胞進行負性的調節，進而導致胎盤的前置、早剝等情況發生，嚴重威脅孕婦以及胎兒的身心健康[18-19]。有研究顯示，當STOX1蛋白呈現出異常表達時，會在一定程度上抑制細胞的增殖，促進PE進展[20]。

本研究結果顯示，輕度PE組、重度PE組患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于健康組，差異均有統計學意義(P<0.05)。重度PE組患者GRP78、sFlt-1、STOX1水平均高于輕度PE組，差異均有統計學意義(P<0.05)。這表明，GRP78、sFlt-1、STOX1均與PE病情嚴重程度相關，推測可能通過影響子宮螺旋動脈重鑄，滋養細胞的增殖與分化等機制參與PE病情的發生與發展。本研究結果顯示，血清GRP78、sFlt-1、STOX1與PE發生呈正相關性(r=0.671、0.594、0.714，P<0.05)。這表明，GRP78、sFlt-1、STOX1的高水平表達可能嚴重影響滋養細胞的侵襲，導致螺旋動脈重鑄障礙，從而在PE的發生發展中起到作用。此外，與GRP78、sFlt-1、STOX1單項診斷相比，三項聯合對PE的預測價值較高(P<0.05)。這表明，PE的發生發展為多因素共同影響，GRP78、sFlt-1、STOX1的高水平表達，通過多方面的機制導致胎盤供血困難，從而引發PE。因此，3個指標聯合檢測能夠避免單個指標檢測診斷PE的不足，有望對PE病因學研究及早期干預提供一個全新的平臺。

綜上所述，血清GRP78、sFlt-1、STOX1在PE中異常表達，并與病情嚴重程度相關，測定GRP78、sFlt-1、STOX1表達水平可輔助診斷孕婦PE及病情嚴重程度。