和田羊（多胎型）胚胎移植報(bào)告

文│陳童 董紅 田月珍（新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所）

瑪哈巴·肉孜 霍飛（新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站）

阿布力克木·阿地力 張萬超（新疆維吾爾自治區(qū)和田地區(qū)畜牧技術(shù)推廣站）

和田羊是新疆維吾爾自治區(qū)和田地區(qū)畜牧養(yǎng)殖的主要畜種，為短脂尾異質(zhì)半粗毛羊。以能適應(yīng)荒漠生態(tài)環(huán)境、肉質(zhì)鮮美、生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)地毯毛而著稱，是新疆的一個(gè)優(yōu)良地方品種，具有耐熱、耐干旱、耐粗飼等優(yōu)點(diǎn)。和田羊飼養(yǎng)業(yè)的發(fā)展速度關(guān)系到和田地區(qū)畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的高低，直接關(guān)聯(lián)著產(chǎn)業(yè)鏈的形成，更是農(nóng)牧民增收的重要途徑，在和田地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。2006年，和田羊被列入國家級(jí)畜禽遺傳資源保護(hù)名錄；2008年，國家將和田地區(qū)列入國家級(jí)和田羊保護(hù)區(qū)。和田羊肉特別是羔羊肉具有極好的適口性，凡品嘗過和田羊肉的區(qū)內(nèi)外人士一致認(rèn)為和田羊肉鮮嫩可口、膻味極小，不管以何種方式烹調(diào)，口味都極為鮮美，是其他品種綿羊肉無法比擬的。而用和田羊毛織制的“和田地毯”更是以優(yōu)美的圖案、精細(xì)的工藝和經(jīng)久耐用的質(zhì)地譽(yù)滿國內(nèi)外。近年來，和田羊通過產(chǎn)羔情況進(jìn)行表型篩選和分子檢測(cè)，逐步組建了和田羊（多胎型）群，為快速擴(kuò)大該群體數(shù)量，使用胚胎移植技術(shù)增加其數(shù)量，冷凍胚胎作為遺傳資源保存，現(xiàn)就此次胚胎移植情況總結(jié)如下。

一、材料與方法

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。供體羊?yàn)楹吞镅颍ǘ嗵バ停挲g2～4歲（均有產(chǎn)羔史），平均體重50千克，受體羊?yàn)榻?jīng)產(chǎn)湖羊和和田羊，無疫病、膘情中上等。種公羊選擇個(gè)體發(fā)育健壯、性欲旺盛，年齡2～4歲。供體母羊、公羊提前一個(gè)月進(jìn)行補(bǔ)飼，于2021年11月24日～12月16日開展超數(shù)排卵、沖胚、移植工作。

2.激素及藥品。處理過程中所使用的促卵泡素（FSH）、促黃體素（LH）和前列腺素（PG）、促排卵素3號(hào)（A3）、黃體酮均由寧波三生生物科技股份有限公司生產(chǎn)；并準(zhǔn)備沖胚液、胚胎保存液、胚胎冷凍液、酒精、碘酒、新潔爾滅、靜松靈、抗生素、生理鹽水等。

3.儀器。沈陽沈大內(nèi)窺鏡有限公司生產(chǎn)的內(nèi)窺鏡系統(tǒng)，體視顯微鏡，程序降溫儀CryoLogic CL8800。

4.超排與同期發(fā)情方法。供體羊處理方法：供體羊全部注射前列腺素，9天后再次注射前列腺素，按照發(fā)情羊情況進(jìn)行分組。第11～13天（發(fā)情計(jì)為第0天）開始分3天6次進(jìn)行FSH劑量遞減超排，藥物總劑量為450國際單位/只，第5次注射FSH時(shí)注射PG0.1毫克/只，24小時(shí)后全部發(fā)情。受體羊處理方法：受體羊全部注射前列腺素，9天后再次注射前列腺素，同組受體羊與供體羊發(fā)情時(shí)間盡量保持一致，不要相差超過12小時(shí)。

5.發(fā)情鑒定與配種。每日用試情公羊早、晚試情兩次，每次試情時(shí)間1小時(shí)左右。配種前對(duì)公羊精液品質(zhì)進(jìn)行嚴(yán)格檢驗(yàn)，供體羊發(fā)情后12小時(shí)第一次自然交配并注射促排卵素3號(hào)，之后每間隔8～12小時(shí)配種1次，累計(jì)自然交配2～3次，如果使用人工授精的方法，應(yīng)保證3次。

6.胚胎的收集和移植。供體羊在確定發(fā)情后的第七天開始沖胚，手術(shù)間溫度控制在20℃以上。手術(shù)法將子宮從創(chuàng)口牽引出暴露在表面后，記錄排卵黃體數(shù)，用帶有軟化膠管的腸鉗夾在子宮角分叉位置，注射器抽取沖卵液20～30毫升，沖卵注射針頭在子宮角尖端位置緩慢插入，當(dāng)確認(rèn)針頭在管腔內(nèi)進(jìn)退通暢時(shí)，將輸液針連接在注射器上，緩慢推注沖卵液。當(dāng)子宮角膨脹時(shí)，避開血管把回收針頭從腸鉗基部扎入，調(diào)整針頭保持沖卵液流暢的進(jìn)入集卵皿內(nèi)，最后用手指夾住子宮將子宮捋一遍。另一側(cè)子宮角使用相同的方法沖胚。注意推注沖卵液時(shí)力量和注射速度不宜過快。胚胎移植能否成功的關(guān)鍵因素取決于胚胎質(zhì)量的好壞。通過在體式顯微鏡上對(duì)回收液中的胚胎進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，選擇形態(tài)結(jié)構(gòu)完整、緊湊、輪廓清楚、卵裂球大小均勻、呈球形、透明度適中且無附著的細(xì)胞和液泡的一級(jí)（A級(jí)）、或二級(jí)（B級(jí)）胚胎進(jìn)行移植。確定胚胎所處時(shí)期，在對(duì)胚胎質(zhì)量鑒定時(shí)要同時(shí)考慮胚胎日齡，結(jié)合其發(fā)育情況判斷好壞，然后確定胚胎用于移植或保存。冷凍胚胎一般選擇一級(jí)（A級(jí)）進(jìn)行冷凍。受體羊采用內(nèi)窺鏡微創(chuàng)手術(shù)，檢查卵巢排卵情況，牽引出子宮角并將胚胎移植于子宮體內(nèi)后注射黃體酮。

二、結(jié)果

1.超排與沖胚結(jié)果。由表1可知，19只和田羊（多胎型）供體共清點(diǎn)黃體（白體）數(shù)量237個(gè)，回收胚胎197枚，胚胎回收率為83.1%，只均胚胎回收數(shù)達(dá)10.4枚，B級(jí)以上可用胚胎153枚，胚胎可用率77.7%，只均胚胎可用數(shù)達(dá)8.1枚。

表1 沖胚結(jié)果

2.胚胎移植結(jié)果。由表2可知，由于此次胚胎移植超排效果顯著，受體數(shù)量不足，共移植61只受體，其中25只受體移植雙胚（A級(jí)+B級(jí)），36只受體單胚（A級(jí)）移植，使用鮮胚86枚；剩余67枚胚胎進(jìn)行冷凍。移植后36天（2022年1月16號(hào)）進(jìn)行B超孕檢，共懷孕35只，受胎率達(dá)到57.4%。

表2 受體移植結(jié)果

三、討論與小結(jié)

1.本次胚胎移植超排時(shí)FSH總劑量為450國際單位/只，從獲得胚胎數(shù)量上看，結(jié)果比較理想。但個(gè)別供體羊出現(xiàn)黃體退化（白體）情況，可能與個(gè)別供體在超排中FSH劑量過高引起黃體過早發(fā)生退化有關(guān)。

2.科學(xué)的飼養(yǎng)管理在胚胎移植前期和后期非常重要。供體羊、受體羊需要均衡的營養(yǎng)，保持良好的體況，防止飼喂劣質(zhì)飼草料。在胚胎移植進(jìn)入準(zhǔn)備階段后（從開始藥物處理到胚胎移植手術(shù)開始前），禁止使用藥物或發(fā)生外界刺激，防止藥物或應(yīng)激對(duì)胚胎產(chǎn)生和發(fā)育帶來不良影響。舍飼環(huán)境下應(yīng)滿足階段性營養(yǎng)需要，防止擠壓碰撞。放牧條件下應(yīng)對(duì)受體羊適度補(bǔ)飼，防止遠(yuǎn)牧。因此，科學(xué)的飼養(yǎng)管理是受體羊獲得理想受胎率的重要措施。

3.母羊生殖器官的內(nèi)分泌環(huán)境、生化水平和組織學(xué)特性對(duì)處于不同發(fā)育階段的胚胎有不同的影響。因此，供體提供的胚胎應(yīng)移植給和供體處于相應(yīng)生理階段的受體才能繼續(xù)發(fā)育。受體羊和供體羊的發(fā)情同步差控制在12小時(shí)以內(nèi)。

4.在胚胎移植過程中，撿胚操作時(shí)室溫應(yīng)保持在22～25℃，手術(shù)室和撿胚操作室的溫度應(yīng)盡可能保持一致，避免溫度差異過大影響胚胎質(zhì)量，從而影響受胎率。

5.在鮮胚移植時(shí)，為降低外部環(huán)境的不良影響，提高移植受胎率，體外保存胚胎的時(shí)間要盡可能縮短。如果胚胎需要在外界保存較長時(shí)間，建議間隔2小時(shí)更換一次胚胎保存液，且溫度保持在20～25℃，保存溫度不宜過高。

6.胚胎移植成功與否在實(shí)際操作過程中受技術(shù)和熟練程度約束，每個(gè)環(huán)節(jié)都直接決定胚胎移植的效果。特別是手術(shù)過程要求操作人穩(wěn)重、熟練、輕巧、速度適中；在子宮腔注入胚胎時(shí)不能用力過猛，避免把胚胎送入到輸卵管而發(fā)生異位妊娠；但速度太慢，輸卵管、子宮等裸露在外部時(shí)間太久，會(huì)增加被污染的概率，同時(shí)也增加了胚胎受損風(fēng)險(xiǎn)；術(shù)者手、臂、手術(shù)器械等對(duì)子宮會(huì)有強(qiáng)烈刺激，對(duì)輸卵管進(jìn)行拉扯也會(huì)帶來一定的不良影響。

7.為保證供體能重復(fù)使用，要求從事胚胎移植的技術(shù)人員要有較為熟練的外科手術(shù)經(jīng)驗(yàn)，細(xì)致的操作和各環(huán)節(jié)相互配合，為提高供體利用率，最好是沖胚結(jié)束后自然繁殖1次。