食品中鮮味肽的研究進展

賈 蓉，何 穎，王桂瑛，萬大千，孔維成，李 聰，葛長榮，廖國周,*

（1.云南農業大學食品科學技術學院，云南 昆明 650201；2.云南農業大學 云南省畜產品加工工程技術研究中心，云南 昆明 650201）

食品中的肽不僅具有生理活性，還具有降血壓、降血脂、呈味等功能性。鮮味肽可以從食物中直接提取或者由氨基酸合成，它可以增強食物鮮味，在食品加工過程中具有良好的加工特性及營養價值，符合綠色食品的發展要求，食品中的鮮味肽因能產生滋味而引起食品風味學家的廣泛關注。鮮味肽除了自身具有可口的味道，還能使甜味更甜、咸味更咸、減輕酸苦味，使食品口感更加柔和。有研究表明，鮮味是影響食品品質非常重要的因素，提高食物中鮮味物質的含量有利于提高食物的整體適口性。鮮味肽存在于許多食品中，如酒類、海鮮、肉類、醬油、菌類、豆類等。目前國際上對鮮味肽的研究集中在分離純化、參與美拉德反應及氨基酸序列鑒定等方面，我國對鮮味肽的研究尚處于起步階段，關于各種食品中鮮味肽的挖掘、鮮味肽的構效關系等深層次的問題仍需要加強研究。本文主要對目前已有的鮮味肽提取及鑒定、鮮味評價方法以及影響呈味的因素等方面進行綜述，以期為進一步研究鮮味肽的形成機理等提供依據。

1 鮮味肽的制備

鮮味肽存在于動植物性食品以及微生物發酵制品中，因其來源廣泛，鮮味肽的制備方法有很多，目前已知的制備方法有水解法、化學合成法、微生物發酵法、蛋白質降解法、提取法和生物工程法。

1.1 水解法

目前已知的鮮味肽水解法包括酸水解、堿水解及酶水解3 種水解方式。酸水解中經常使用鹽酸，堿水解中常采用氫氧化鈉，酶水解使用蛋白酶較多。酸水解雖然水解徹底、反應速度快，但是反應條件不易控制，敏感氨基酸易被破壞，而且反應過程中容易產生氯丙醇類等有毒、致癌物質。堿水解會使部分敏感氨基酸造到破壞，并且容易使氨基酸發生消旋作用。酶水解法是制備鮮味肽最常用的方法，酶解時間影響水解度，進而影響小分子肽的含量，隨著酶解時間的延長，鮮味隨之增加，但隨著水解反應時間的延長，易使微生物造成污染；若酶水解的時間不足，水解程度不夠，在產生鮮味的同時也會產生苦味等不良風味。酶反應條件溫和、有較高的專一性，在反應過程中，氨基酸遭到的破壞程度較小，為了避免不良效果的產生，應該嚴格控制水解時間、溫度、酶使用量等反應條件。對于食品中天然鮮味肽的研究，應該盡量避免酸堿水解或酶解對于肽結構或其他理化性質的影響，可以直接采用一定的溫水浸泡提取，以獲得天然的鮮味成分。

1.2 化學合成法

固相合成與液相合成是常見的化學合成法，固相合成法是將目標多肽的C端氨基酸固定在不溶樹脂上，在該樹脂上依次縮合氨基酸，接著將肽鏈不斷延長，并最終得到所需的肽，雖然容易實現純化和自動化，但固相合成容易產生副反應，實驗條件易受限，現階段往往普通實驗室不能進行固相合成。液相合成法具有合成成本低、規模大、在均相中反應等優勢，液相合成的反應條件可以選擇，液相合成中的逐步合成方式非常迅速且簡單，而片段組合方式可以合成氨基酸數量100以上的多肽。目前，在已知肽的氨基酸序列的前提下，可以通過固相合成法合成純度較高的肽，用以感官分析、毒性分析或其他后續研究。

1.3 微生物發酵法

微生物發酵法是利用微生物酶或微生物代謝作用獲得肽，進而對食物進行增鮮。菌種有酵母菌、乳酸菌、枯草芽孢桿菌等，這些菌種具有容易培養、產酶量高、生長周期短的特點。微生物發酵法具有速度快、成本低的優點，但是應用范圍不夠廣。酵母水解物在發酵法中較為常用，酵母水解物是利用現代生物技術制成的一種純天然制品，富含豐富的微量元素及維生素。Chen Ziqi等使用釀酒酵母、米曲霉2 種菌種對香菇進行選擇性發酵，結果表明，經過發酵香菇的鮮味顯著增強，隨著發酵過程延長，酸度、游離氨基酸和核苷酸含量均增加。該法在發酵食品中應用較為普遍。

1.4 蛋白質降解法

在蛋白質降解法中，最常用的是酶降解法，常用的酶有動物蛋白酶與植物蛋白酶，分別包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶。反應溫度、時間、pH值、底物濃度、酶的選擇等會影響提取率，反應過程可能會產生一定的苦味，蛋白質降解法對底物的要求是高品質的動物蛋白，該法在工業上的應用較為廣泛。蛋白質降解法與水解法中的酶降解法有一定相似之處，均用酶來制備目標肽，酶的種類不同，會得到不同的產物，今后可以研究酶的種類對于提取情況的影響。簡單來說，亦可以將蛋白質降解法與酶水解法歸于一類，因為二者在制備鮮味肽時均用到了酶。

1.5 提取法

簡單的提取法不能將鮮味肽提取出來，往往需要借助外力才能有效地提取出鮮味肽，如微波、超聲波、均質、加熱等方法。超聲波的提取率一般較高，它適用于天然鮮味肽的提取，該法具有安全、快速、方便的特點，但不易使水不溶性蛋白質水解，而造成提取率較低。Zhang Jian等通過超聲波輔助，提高了培根中游離氨基酸等鮮味物質的濃度，從而增加了鮮味。Wang Xuejiao等發現，微波處理的草魚表現出更大的鮮味強度。通過加熱輔助，往往可以應用于提取食品中的天然鮮味物質，進而避免其他提取條件對結果產生影響。

1.6 生物工程法

生物工程法是指利用DNA重組技術，用含有目的基因的DNA片段序列控制鮮味肽的生成。生物工程法所需的原料廉價、定向性強、衛生、安全、成本低，但是產率很低，不能實現規模化生產的要求。目前生物工程法往往將DNA重組技術與發酵工程技術聯用，用以獲得較高的肽產量。王金菊等利用啟動子，對牛肉風味強化肽進行表達，構建組成型畢赤酵母工程菌pGAP9-16BMP，極大提高了畢赤酵母產量。生物工程法往往涉及到相關基因的研究應用，該法目前在國內的應用普遍很少。

2 鮮味肽的分離純化與鑒定

2.1 鮮味肽的分離

通過上述方法制備的鮮味肽往往是混合物，需要進一步分離純化得到單一的鮮味肽。鮮味物質的相對分子質量主要集中在小于3 000的范圍，因此鮮味肽的初次分離往往采用超濾或納濾等膜分離技術，通過超濾對低分子質量的肽組分進行初步篩選。再使用凝膠過濾色譜法對相對分子質量小于3 000的肽進行分離，該方法是利用分子篩和凝膠網狀結構的原理，對不同分子質量肽進行分離，分子質量越大，在色譜柱中的保留時間越短。

大孔樹脂也是一種富集鮮味肽的方法，是一種新型的高分子吸附材料，由于極性的不同，對于不同的物質具有不同的選擇吸收性。單一樹脂的分離效果一般不太好，往往會將幾種樹脂混合使用，或與現代技術聯用來提高分離效果，目前已知的有超聲波輔助法、制備型高效液相色譜法等。Zhuang Mingzhu等分別研究4 種大孔樹脂SP-825、HP-20、XAD-16和HP-2MGL對醬油中鮮味肽的分離純化作用，結果發現，XAD-16富集鮮味肽的效果最好。

2.2 鮮味肽的純化

經過初次分離純化的樣品再使用反向高效液相色譜法（reversed-phase high-performance liquid chromatography，RP-HPLC）進行純化，按照譜峰將分離的各組分收集。RP-HPLC是根據分子的疏水性強弱進行物質純化的色譜技術，分子的疏水性強弱與氨基酸的性質有關，因此能對肽進行純化，該項技術往往是多肽純化的最后一步，具有操作簡單、分辨率高、速度快等優點。除了高效液相色譜法，還有毛細管電泳法、氣相色譜法、層析法及鹽析法等可以進行分離純化。

對于鮮味肽分離純化的方法，目前都較為傳統并且耗時，亦可以將經過初次分類純化后的樣品，進行感官評價，將該部分的最鮮的組分進行結構鑒定，通過氨基酸的疏水性篩選合適的肽結構。

2.3 鮮味肽一級結構的鑒定

質譜法為目前較常用的鮮味肽鑒定方法，原理是利用電磁場將樣品中的離子按質荷比進行分離，再檢測與分析。當下檢測鮮味肽的主要方法是將質譜法與液相色譜聯用，可以準確且高效鑒定氨基酸的序列和氨基酸的分子質量大小。超高液相色譜-串聯質譜（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）技術鑒定多肽序列，具有準確率高、特異性突出、速度快的優點。UPLC對樣品首先進行分離，電噴霧對分離后的樣品進行解離，解離后的樣品以帶電母離子形式進入到高分辨率質譜儀，隨后經過碰撞誘導裂解獲得二級質譜數據，形成MS/MS圖譜。

質譜法除了與液相色譜聯用以外，還能與其他技術聯用，用于鑒定鮮味肽的結構。電噴霧四極桿-飛行時間-MS/MS（electrospray quadrupole-time-of-flight MS/MS，ESI-QTOF-MS/MS）鑒定鮮味肽，即在正離子模式下采用掃描模式檢測和鑒定肽的分子質量和氨基酸序列。Deng Xiaofei等通過Nano-HPLC-MS/MS技術在鯧魚中鑒定出5 種肽，其氨基酸序列分別為APAP、ASEFFR、AEASALR、LGDVLVR和WDDMEK。Dang Yali等通過基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜（matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）對金華火腿和巴馬火腿水提液中的鮮味肽進行鑒定，鑒定出序列分別為CCNKSV和AHSVRFY的氨基酸。Zhang Jianan等利用UPLC-ESI-QTOF-MS/MS法從花生分離蛋白水解液中鑒定出6 個新肽。

2.4 鮮味肽空間結構的鑒定

肽空間結構可以通過質譜法、紅外光譜法、紫外光譜法、核磁共振、圓二色譜法及X射線晶體法鑒定。目前除了上述用于檢測多肽空間結構的方法外，生物鑒定法、場解析質譜、放射性同位素標記法等都已應用于多肽類物質的結構鑒定，也有研究采用熒光光譜法和紫外-可見光譜法研究多肽結構。對于食品中鮮味肽二級結構的鑒定目前鮮有報道，但多肽的結構鑒定已涉及到藥物合成等方面。

3 鮮味肽的呈味作用

3.1 鮮味受體

目前研究已經證實鮮味受體主要是G蛋白偶聯受體家族中的C族，包括異源二聚體T1R1/T1R3受體、代謝型谷氨酸受體mGluR1和mGluR4。其中，接受鮮味的關鍵受體是異源二聚體，T1R1對于鮮味物質具有識別作用，T1R3具有輔助功能。異源二聚體的信號介導機制主要發生在舌頭前部，主要用于接受各種型氨基酸，mGluR1和mGluR4的信號介導機制主要發生在舌頭后部，主要用于接受谷氨酸和其他一些鮮味物質所產生的鮮味。鮮味肽必須同時含有正電基團、負電基團和疏水基團，并且3 種基團要連接到受體上相應的位點或關鍵性的氨基酸殘基，才能感知到鮮味，這些活性位點基本位于N末端的捕蠅草結構域。Liu Hai等在肽段DF9、AK11和GT12的t1r1肽復合物中發現了活性位點D。

3.2 分子模擬技術

為了解釋鮮味肽與受體之間的作用模式、呈味機理以及為提高鮮味肽的鮮味強度提供某些方法，目前采用分子模擬研究鮮味受體T1R1/T1R3與鮮味物質之間的作用機理，具體包括同源建模、分子對接及分子動力學模擬，同源建模可以預測鮮味受體的三維結構，分子對接可以獲得鮮味配體與鮮味受體的復合物，分子動力學模擬過程可以分析配體與受體結合過程，目前該技術在相關食品領域中具有較大的作用，但掌握相關技術的人才較少。

分子對接在結構分子生物學和基于結構的藥物設計等領域有著廣泛應用。目前分子對接在海產品鮮味物質的研究中有部分應用。Yu Zhipeng等基于同源建模和分子對接對蝦蛄肌球蛋白肽進行研究，分子對接結果表明，氨基酸殘基Arg151、Asp147和Gln52在鮮味的產生中起關鍵作用。

目前對于鮮味肽，大多數將樣品提取純化鑒定后，會通過分子模擬技術來研究受體T1R1/T1R3與鮮味肽之間的作用機理，通過軟件來判斷受體與配體之間的相互作用，進而判斷受體與配體之間的親和性。在進行分子對接時，往往會涉及到對接盒子的判斷，大多數研究在這方面均只是通過軟件粗略篩選或者通過參考類似文獻使用相關數據，結果往往缺乏準確性。今后在這方面的研究應該視樣品不同模擬不同的對接盒子，找到適合的對接位點。對于合成的鮮味肽應該對其毒性進行預測，目前鮮有相關報道。

4 鮮味肽的鮮味評價

目前對于食品中鮮味肽的評價方法有很多，如比較法、電子舌分析等，但目前對于鮮味肽的鮮味評價方法尚無統一的標準。

4.1 比較法

已有研究證明，對鮮味評價最有效的方法是去除待評價的物質，與沒有去除該物質時的味道作對比，就能得到該物質的鮮味強度。但是該方法對實驗操作人員的技術及實驗設備的要求都很高，所以，目前該方法還沒有得到很好的實施。

4.2 感官評價

通常用醇或水作為溶劑，提取樣品中的鮮味肽進行檢測，分析其含量，配制得到復配液，通過減缺或者添加實驗，最后通過感官評價來進行評分。感官評價是目前使用最多的鮮味評價方法，也是評價食品鮮味強弱最直接的手段，但易由于個體差異而引起誤差，需要對參與人員進行培訓。對于食品中的鮮味肽采取的感官評價方法為評分法，目前研究具體應用的有定量描述分析法、三角實驗法、兩點選配法與三點選配法。食品中鮮味肽的評價方法有很多，目前尚無統一的標準。

4.3 電子舌分析

與一般的感官評價不同的是，儀器檢測不僅能測出某一種鮮味物質，還可以區分多種鮮味物質，所得結果優于人的主觀評定結果。采用電子舌對鮮味肽進行感官評價，比傳統的感官評價更加穩定、靈敏、標準。電子舌可以進行感官評價的主要原理是它可以模擬人的舌頭，對液體樣品進行分析、識別等，是一種味覺識別檢測儀器，可以客觀評價樣品的鮮味強度，實現專一性響應，電子舌由參比電極、多頻脈沖掃描儀、自動采樣器、六電極傳感器陣列和用于數據采集的計算機組成。Ag/AgCl作為參比電極用于掃描每個傳感器的響應強度。現有研究中，電子舌應用于東方鲀肌肉、大豆、甲魚肉、花生等食品中。現階段對于食品中鮮味進行評價時，往往將電子舌分析與感官評價或其他鮮味評價方法聯用。

4.4 滋味稀釋分析與滋味稀釋比較分析

將感官分析與儀器分析二者相結合，對食品中的關鍵滋味活性物質進行檢測，是一種定性及定量分析方法。例如，將滋味稀釋比較分析應用于熱處理的丙氨酸/葡萄糖溶液中，在牛肉湯中能夠識別甜味增強-(1-羧乙基)-6-(羥甲基)吡啶鎓-3-醇內鹽。該法往往應用于評價食品中鮮味物質的閾值。

4.5 滋味活性值（taste active value，TAV）

TAV=滋味物質含量/該物質的呈味閾值，TAV反映單一呈味物質的呈味效果，當TAV大于1時，表示對滋味有貢獻，TAV越大，說明該物質的滋味貢獻越大。因只能評價單一物質的滋味貢獻度，所以TAV不能用于分析鮮味物質之間的協同作用及拮抗作用等，目前在水產品中有一些應用。

4.6 等效鮮味濃度（equivalent umami concentration，EUC）

EUC簡單來說等于味精的含量，它一般是游離氨基酸與5’-核苷酸共同作用的效果，常用于對混合溶液的鮮味強度進行量化。在水產品和食用菌方面有較多應用，也被用來評價傳統食品的整體可接受性和整體滋味強度。

4.7 多技術聯用分析

Wang Wenli等提出一種多技術聯用的方法，以河豚中的鮮味肽為研究對象進行鮮味評價，提出一種基于hT1R1電化學生物傳感器、量子化學模擬等方法的鮮味肽評價方法，該研究發現，生物傳感器數據與感官評價結果吻合較好，該方法也為一種評價鮮味肽的新策略，同時也為快速篩選食物中的鮮味肽提供了合理的工具。

5 鮮味肽呈味的影響因素

影響鮮味肽呈味的因素有很多，首先是鮮味肽的自身結構，如肽鏈長度、氨基酸組成、氨基酸的序列及肽鏈的構象等，還有一些外界因素，如溫度、水分、pH值、鹽分、水解度、無機離子、鮮味成分的相乘作用及水解酶種類。

5.1 氨基酸

鮮味肽的分子質量通常被認為是小于1 000 Da，鮮味肽的氨基酸骨架結構式通常為—O—(C)—O—，=3～9，當=4～6時鮮味最強。功能基團，如—COOH為鮮味肽的定位基；親水基，如—OH與--NH為鮮味肽的助味基。氨基酸的排列順序與鮮味肽的鮮味效果有很大關系，氨基酸上酸性基團與堿性基團的相互作用引起鮮味肽呈味，根據現有的研究表明，只有這2 種基團的位置合適才會產生鮮味。也就是說，正電基團、負電基團和疏水基團同時存在于鮮味肽上，是鮮味肽產生鮮味的必須條件，負電基團的N端必須是正電基團，正電基團同時與中間帶負電的酸性基團相互作用，進而產生鮮味。

鮮味肽一般含有天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、天冬酰胺（Asn）或谷氨酰胺（Gln）殘基，含有鮮味氨基酸的肽不一定具有鮮味，反而可能會呈現苦味，不含鮮味氨基酸，同樣可能會具有鮮味。也有研究表明，谷氨酸與天冬氨酸殘基可能會對多肽的呈鮮效果與增鮮效果存在抑制效應，小分子肽的苦味可能會隨堿性氨基酸殘基比例的升高而增強。鮮味肽的鮮味主要來源于結合型谷氨酸和天冬氨酸，當鮮味肽之間的氨基酸組成相同時，氨基酸位置和構象的改變會影響呈味效果。雖然存在型和型的谷氨酸鈉型鮮味物質，但-谷氨酸和-谷氨酰胺無鮮味，目前發現只有型氨基酸才具有鮮味。

5.2 溫度、pH值、鹽分、水解度

不同鮮味物質受熱能力不同，鮮味肽的受熱能力較差，容易分解。一般來說，在過酸或過堿環境下，鮮味肽長時間受熱，鮮味會消失。隨著pH值的改變，谷氨酸鈉的呈味強度也會產生變化，進而導致風味產生變化，目前已有研究發現，鮮味氨基酸的含量隨著pH值的升高而降低。低鹽溶液對鮮味有一定的增強作用。不同蛋白酶的協同作用可引起更廣泛的酶作用，較高的水解度有助于減少苦味和增強鮮味。陳政等研究不同水解度條件下蠶蛹呈味肽對肉脯風味的影響，結果發現，當水解度為15%和25%時，蠶蛹呈味肽對肉脯的風味形成有促進作用。因此在制備鮮味肽時要尤其注意加熱的溫度與時間，并控制好樣品液的pH值與水解度，避免造成制備失敗或結果產生誤差。同樣，在菜肴的制作中，使用鮮味調料時也應當控制相應的條件。

5.3 無機離子

無機離子Na和Cl也可以增強鮮味，Na和Cl可以顯著增強食物的鮮味，但Na攝入過多會導致一些慢性病的產生，往往會采用酵母提取物、氯化鉀（KCl）和氯化鈣（CaCl）等無機鹽來代替。Vidal等在咸肉中減少了NaCl的使用，并使用酵母提取物替代，結果發現，酵母提取物的使用可以最大限度減少添加CaCl帶來的負面感官影響，制作咸肉時使用天然成分可以顯著降低鈉含量，同時使產品的感官接受度更好。Na雖然可以增加鮮味，但不宜攝入過多。

5.4 協同作用

與酸、甜、苦等基本味覺不同的是，2 種或2 種以上的鮮味物質聯合起來可以有效增強鮮味強度，即鮮味物質之間存在協同作用。鮮味肽對谷氨酸鈉有協同性，可以使鮮味增強。肽的串聯有利于增強鮮味肽的鮮味效果，但增加單一肽的串聯拷貝數不一定會有增強鮮味的效果，而將多種肽進行串聯將鮮味物質的種類和數量均增加，可以達到增強鮮味的效果。

5.5 美拉德反應

鮮味肽與還原糖發生美拉德反應之后，對于鮮味肽的鮮味有一定的提升作用，在使用微生物發酵法制備鮮味肽時，酵母發酵物除了具有賦予食品濃厚感的調味效果，也可以通過美拉德反應產生內酯、呋喃、吡嗪和含硫化合物等呈味物質，因此，添加酵母發酵物的樣品具有柔和的鮮味和濃厚感。美拉德反應被認為可以較好提升多肽鮮味。

5.6 酶

酶具有專一性，使用不同的酶對底物進行催化時會產生不同的多肽，引起呈味特性的不同，復合酶提取鮮味肽所得到的酶解液鮮味比單一酶提取所得到的酶解液顯著提高，不同酶的水解產物鮮味強度不同，風味蛋白酶水解產物鮮味較強，木瓜蛋白酶與中性蛋白酶水解產物鮮味較差，復合蛋白酶與堿性蛋白酶水解產物鮮味最強。

5.7 包埋與氨基酸加入法

可以通過包埋與氨基酸加入法對鮮味肽的鮮味進行人工調控，氨基酸加入法即反向調控鮮味氨基酸的組成，使用單體氨基酸，得到的鮮味肽可以與其他鮮味物質發生協同作用，進而提高食品中鮮味肽的鮮味。包埋法是利用微膠囊技術，將揮發性物質、鮮味物質保護起來，同時使鮮味肽具有固態的特征，常用的有噴霧干燥、冷凍干燥等方法。

5.8 其他

食材不同，可以品嘗到不同的滋味。食材的生長環境及加工方法都會影響食材的鮮味。Zhou Zheng等分析不同季節馬尼拉蛤中5’-核苷酸的變化發現，由于富含氨基酸和脂質，2月份捕獲的蛤蜊最為美味、鮮味最強。王德華等以姜母鴨為對象，研究加工方法對鴨肉滋味的影響，實驗發現，相比于烤制和鹵制，炒制的鴨肉鮮味最強。

6 鮮味肽的應用

鮮味肽具有較高的營養價值，在賦予食品美味口感時還可以減弱苦味，對食物的風味具有補充作用，具有顯著的增香及增鮮作用。鮮味肽安全、營養、天然無毒，能夠滿足特殊人群的低鈉攝入需求，如高血壓病人，食用后對人體健康可以提供許多益處，因而鮮味肽廣泛應用在食品添加劑與補充增強劑中。鮮味通常與其他味感、鮮味物質具有協同作用，所以目前已有利用酶水解法等制作的復合型鮮味肽基料，將其直接應用為食品的鮮味調味料，而不是簡單地從食品中提取單一的鮮味肽。目前對于食品中鮮味肽的提取制備更多地是從海鮮產品中得到，進而對提取到的鮮味成分進行加工，大多數都是制備成鮮味增強劑，用于改善食品鮮味，以滿足人們對于鮮味的追求。

7 結 語

鮮味肽作為新型鮮味劑具有廣闊的開發和應用前景。目前，鮮味肽的分離純化及鑒定技術已較為成熟，各種食品中發掘的鮮味肽已有較多報道。由于鮮味強度難以進行定量描述，缺乏相關標準，在鮮味肽的進一步研究上可以開發一些新的鮮味肽快速評價方法。各種食品因其來源與加工工藝的差異，鮮味肽的形成機理不同，鮮味物質之間協同作用的機理不同，可以進一步研究鮮味肽與食品體系中其他物質的協同作用及呈鮮機理、影響因素等。