老年急性冠脈綜合征患者中miR-122-5p的表達及與主要不良心血管事件的關系分析*

劉晶晶，崔璐璐△，萬 莉，程 珍

1.湖北省黃石市第五醫院心血管內科，湖北黃石 435005；2.湖北省黃石市中醫醫院急診科，湖北黃石 435000

急性冠脈綜合征(ACS)是常見的心血管疾病，主要病理基礎為動脈粥樣硬化，具有發病率高、并發癥多及病死率高的特點[1]。研究表明，經皮冠脈介入術(PCI)在ACS治療中具有一定價值，能利用植入支架解除冠狀動脈堵塞狀態，但即便如此，患者術后仍可能出現再發心肌梗死、嚴重心律失常、血運重建等不良事件[2]。盡早評估ACS患者主要不良心血管事件(MACE)的發生風險對改善患者預后至關重要。既往臨床主要通過影像學技術結合N-末端腦鈉肽前體(NT-proBNP)、心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTnI)等指標對ACS病情進行評估，雖有一定價值，但對MACE發生的預測作用非常有限[3]。近年來，研究發現微小核糖核酸(miRNA)與ACS患者的動脈粥樣硬化斑塊形成及脂質代謝紊亂存在關聯，部分miRNA在這類患者中呈特異性表達[4]。動物實驗提示缺血再灌注心律失常大鼠的心肌組織內miR-122-5p表達上調，表明其可能參與了心肌損傷[5]。施冰等[6]發現miR-122-5p與NT-proBNP存在相關性，而既往研究顯示ACS患者的血漿NT-proBNP水平升高[7]，但關于miR-122-5p與ACS之間的關系尚未完全闡釋清楚，且未能明確其與老年ACS患者MACE發生的相關性。基于此，本研究擬分析ACS患者miR-122-5p的表達水平及其與MACE的關系，旨在輔助ACS的診療及發生MACE風險的預測。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年4月至2020年12月于黃石市第五醫院收治的老年ACS患者101例作為ACS組，包括不穩定型心絞痛(UA)患者46例、急性心肌梗死(AMI)患者55例；選取同期收治的穩定型冠心病(SCAD)患者86例作為SCAD組，體檢健康者80例作為對照組。本研究經該院醫學倫理委員會批準，3組基線資料比較，差異無統計學意義，具有可比性(P>0.05)，見表1。

表1 三組基線資料比較

1.2納入與排除標準 納入標準：(1)ACS組，符合《非ST段抬高型急性冠狀動脈綜合征診斷和治療指南(2016)》[8]中的相關診斷標準，經冠狀動脈造影確診為ACS者；年齡≥60歲者；就診前2周內未使用過影響心功能的藥物者。(2)SCAD組，符合《穩定性冠心病診斷與治療指南》[9]中的診斷標準者；年齡≥60歲者；就診前1周內未使用過影響心功能的藥物者。(3)對照組：同期體檢的體檢健康者；年齡≥65歲者；體檢前2周內未使用過影響心功能的藥物者；自愿簽署同意書者。排除標準：近2周內有類固醇、阿片類等治療史者；近1個月內有重大手術史者；惡性腫瘤者；就診時存在擴張性心肌病、充血性心衰、病毒性心肌炎、心源性休克等疾病者；患自身免疫性疾病者；有急或慢性肝腎損傷者。

1.3儀器與試劑 反轉錄試劑盒、PCR試劑盒、Trizol試劑均購自美國賽默飛世爾科技公司；冷凍離心機(ST16R型)、超低溫冰箱(906-ULTS型)均購自美國賽默飛世爾科技公司；PCR儀(9700型)購自美國應用生物系統公司。

1.4方法

1.4.1血清miR-122-5p檢測 ACS與SCAD患者在就診時采集空腹肘靜脈血3 mL，體檢健康者在體檢當日采血，離心20 min(3 500 r/min)，分離血清，置于-80 ℃冰箱待測。利用實時熒光定量PCR(qPCR)檢測血清miR-122-5p相對表達水平。首先經Trizol試劑提取總RNA，檢測其純度及濃度，行反轉錄反應，合成cDNA，然后行qPCR擴增。引物序列：miR-122-5p上、下游序列分別為5′-ACACTCCAGCTGGGTGGAGTGTGACAATGG-3′、5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′；以U6為內參引物，上、下游序列分別為5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′、5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。PCR反應條件：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性15 s、60 ℃退火1 min、72 ℃延伸30 s，40個循環。以2-ΔΔCT計算血清miR-122-5p相對表達水平。

1.4.2臨床指標檢測 ACS患者就診時另外采集3 mL空腹外周靜脈血，離心20 min(3 500 r/min)，分離血漿，置于-80 ℃冰箱待測。經酶聯免疫吸附試驗測定血漿NT-proBNP、cTnI水平，試劑盒購自江西江藍純生物試劑有限公司，根據說明書操作。

1.4.3隨訪分析 隨訪時間為6個月，隨訪方式包括上門隨訪、門診隨訪、微信隨訪等，根據患者需求進行，記錄患者行PCI術后6個月MACE的發生情況，包括心源性死亡、再次血運重建、非致死性心肌梗死、心絞痛復發、充血性心衰。將發生MACE者納入預后不良組，將沒有發生MACE者納入預后良好組。

1.5評分標準 Gensini評分[10]：(1)病變部位評分，小分支計0.5分，右冠狀動脈、左前降支遠段、左回旋支中/遠段均計1.0分，左前降支/回旋支近段計2.5分，左主干計5.0分，左前降支中段計1.5分。(2)狹窄程度評分，1%～<26%、26%～<51%、51%～<76%、76%～<91%、91%～<100%、100%分別計1、2、4、8、16、32分。每個冠狀動脈狹窄評分系數與該病變分支評分系數之間的乘積即為最終該病變血管的具體評分，總分為各病變血管的分值之和，分值越高提示病變越重。

2 結 果

2.13組血清miR-122-5p表達水平比較 ACS組血清miR-122-5p相對表達水平為0.34±0.11，SCAD組為0.20±0.07，對照組為0.12±0.05，其中ACS組高于SCAD組、對照組，SCAD組高于對照組，組間比較差異有統計學意義(F=164.076，P<0.001)。

2.2血清miR-122-5p表達水平對ACS、SCAD的鑒別價值分析 血清miR-122-5p表達鑒別ACS、SCAD的曲線下面積(AUC)為0.797(SE為0.034，P<0.001，95%CI0.729～0.864)，最佳界值為0.307，靈敏度為79.40%，特異度為80.00%，見圖1。

圖1 血清miR-122-5p表達水平鑒別ACS、SCAD的ROC曲線

2.3ACS患者血清miR-122-5p的表達水平與臨床特征的關系 根據ACS患者的血清miR-122-5p相對表達水平平均值進行分組，其相對表達水平≥均值者納入高表達組(59例)，相對表達水平<均值者納入低表達組(42例)。結果提示高表達組多支病變、AMI占比分別為27.12%(16/59)、66.10%(39/59)，高于低表達組的4.76%(2/42)、38.10%(16/42)，且高表達組入院時Gensini評分及NT-proBNP、cTnI水平高于低表達組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 ACS患者血清miR-122-5p的表達水平與臨床特征的關系(n或

續表2 ACS患者血清miR-122-5p的表達與臨床特征的關系(n或

2.4ACS患者的預后分析及血清miR-122-5p表達水平、疾病特征比較 在101例患者中，有77例預后良好，有24例預后不良，其中心源性死亡3例，再次血運重建5例，非致死性心肌梗死5例，心絞痛復發8例，充血性心力衰竭3例。預后不良組血清miR-122-5p相對表達水平、Gensini評分及NT-proBNP、cTnI水平高于預后良好組，預后不良組多支病變、AMI占比分別為41.67%(10/24)、79.17%(19/24)，高于預后良好組的10.39%(8/77)、46.75%(36/77)，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同預后ACS患者血清miR-122-5p表達水平、疾病特征比較或n)

2.5ACS患者MACE發生的多因素Logistic回歸分析 采用多因素Logistic回歸模型對相關變量行量化賦值，以miR-122-5p(賦值0為<0.34，1為≥0.34)、Gensini評分(賦值0為<57.69分，1為≥57.69分)、NT-proBNP(賦值0為<102.24 ng/L，1為≥102.24 ng/L)、cTnI(賦值0為<1.75 ng/mL，1為≥1.75 ng/mL)、疾病類型(賦值0為UA，1為AMI)為自變量，以有無MACE為因變量Y(0為無，1為有)，結果提示miR-122-5p相對表達水平、Gensini評分、NT-proBNP水平、cTnI水平升高，以及多支病變、AMI是MACE發生的獨立危險因素(P<0.05)，見表4。

表4 ACS患者MACE發生的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

ACS是一種動脈硬化血栓性疾病，以老年患者居多，初期可見血管內膜、內皮細胞功能損傷，可引起血小板聚集，進一步損傷血管內膜，增加血管壁通透性，促進血管收縮，致內皮下聚集大量膽固醇，引起炎癥細胞浸潤，將膽固醇吞噬并形成泡沫細胞，促使動脈粥樣硬化斑塊形成[11]。ACS病死率較高，MACE的發生是導致預后欠佳的重要因素，對患者生活質量影響非常大，臨床需尋求可靠標志物對冠心病進行篩查，并預測預后，為提高患者生活質量提供依據。研究表明，miRNA在心血管疾病中發揮了重要作用，它能對動脈粥樣硬化后血管生成、炎癥及血栓形成有調節作用，可與靶基因形成非常復雜的調控網絡，精細化調控血小板活化、斑塊破裂等病理過程[12]。LIN等[13]發現通過抑制miR-122-5p的表達，能對心肌細胞抗凋亡機制進行誘導，miR-122-5p過表達則能降低丹酚酸酯對心肌梗死的療效，這表明miR-122-5p可能與心肌梗死的藥物治療預后有關。然而，現階段臨床尚未明確miR-122-5p與ACS患者MACE之間的關系，仍需進一步探討。

本研究通過分析發現，ACS組血清miR-122-5p表達水平高于SCAD組與對照組，且其表達水平對ACS、SCAD具有一定鑒別價值。miR-122-5p是組織特異性較強的miRNA，有學者發現miR-122-5p與腦缺血性疾病發生有關，其過表達可導致預后不良的風險增加[14]。HNNINEN等[15]研究提示miR-122-5p與心源性休克患者3個月的病死率有關，過表達的miR-122-5p能增加死亡風險，并且其表達與低灌注標志物密切相關。POFI等[16]發現miR-122-5p過表達與糖尿病患者心肌病的發生有關，它可能通過調節基質金屬蛋白酶2影響細胞外基質，增加心肌病的發生風險。miR-122-5p能通過對核轉錄因子kB的調節，在細胞凋亡、血栓形成、動脈粥樣斑塊形成等過程中發揮作用，其表達上調能促進心血管疾病進展，這可能是其在這類疾病中的作用機制[17]。這進一步提示miR-122-5p過表達可能引起心功能損傷，在心血管疾病中具有重要作用。本研究結果顯示，老年ACS患者miR-122-5p表達水平與血管病變支數、疾病類型及Gensini評分、NT-proBNP水平、cTnI水平有關。多支病變、AMI及Gensini評分、NT-proBNP水平、cTnI水平越高的ACS患者冠狀動脈病變程度、心功能損傷程度更重，在ACS的冠狀動脈病變進展過程中可能有miR-122-5p的參與，過表達的miR-122-5p可能通過某種途徑加重心功能損傷，促進心血管疾病進展。

ACS患者經PCI術治療后可能引起MACE的發生，對預后影響較大[18]。本研究結果提示預后不良組的血清miR-122-5p相對表達水平更高，且其相對表達水平升高是預后的危險因素之一，表明miR-122-5p可能與ACS預后有關。LING等[19]研究發現UA、AMI患者的miR-122-5p表達水平較健康者均升高，且其表達水平越高，患者的冠狀動脈病變狹窄程度越重。據此推測過表達的miR-122-5p可能會加重冠狀動脈病變狹窄程度，促進ACS進展，從而影響預后。但也有研究提示ACS患者的miR-122-5p相對表達水平降低[20]，與本研究結論相悖，這可能與研究過程中涉及較多的混雜因素及納入病例參考對象不同有關，但該研究經COX多因素分析，最終未提示miR-122-5p與心血管疾病風險存在關聯，表明其在該研究中可能僅為混雜因素。而本研究則發現miR-122-5p在ACS患者血清中表達上調，且進一步分析了其與ACS特征、預后的關系，能為臨床診療及預后預測提供參考價值。本研究還提示血管病變支數、疾病類型及Gensini評分、NT-proBNP水平、cTnI水平也與ACS預后有關，這些均為常規因素，與既往結論基本符合[21-22]。

綜上所述，ACS患者的血清miR-122-5p相對表達水平升高，其表達水平升高會增加MACE的發生風險。本研究局限性為隨訪觀察時間較短，未來還需延長觀察時間，分析miR-122-5p與ACS患者遠期MACE發生的關系。