LBC 聯合BRAF V600E 檢測診斷甲狀腺乳頭狀癌的價值

郭勇

菏澤市立醫院乳腺甲狀腺外科，山東菏澤 274000

作為一種甲狀腺惡性結節之中最為常見的病理類型， 甲狀腺乳頭狀癌患者在早期并沒有顯著的不適癥狀，進行初診時，無法發現其存在的異常情況[1]。目前在臨床中對甲狀腺疾病首選的診斷方式是常規超聲檢查，其具備敏感度較高、無創傷、無輻射以及簡便的優點，但也存在特異度較低等缺點[2]。 而作為常規超聲檢查的重要補充， 液基細胞學 （liquidbased cytology，LBC）檢查在對惡良性結節鑒別時，病理生理的基礎便在解剖結構和空間分布之中微血管的差異[3-4]。而在B-Raf 原癌基因（B-Rafprotooncogene，BRAF）中，最為常見的突變便是第600 位密碼子突變（V600E）。 同時BRAF V600E 基因突變同時也是甲狀腺癌的一種常見基因突變類型， 在甲狀腺乳頭狀癌中占據高達80%， 與甲狀腺癌的侵襲程度具有直接關系[5-7]?，F階段，臨床中對于甲狀腺乳頭狀癌患者采取LBC 聯合BRAF V600E 基因檢測的研究較少?；诖耍撐倪x取2017 年11 月—2019年11 月該院收治的98 例疑似甲狀腺乳頭狀癌患者為研究對象，對LBC 聯合BRAF V600E 基因檢測在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的應用效果進行分析探究?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機抽取該院98 例疑似甲狀腺乳頭狀癌患者，為研究對象均簽署知情同意書。 患者年齡20~53 歲，平均（34.1±2.12）歲；男46 例，女52 例；病灶直徑0.4~0.9 cm，平均（0.63±0.15）cm；體質量51~83 kg，平均（77.12±4.23）kg；病程1~5 個月，平均（2.28±0.15）個月。 該研究由該院醫學倫理委員會審核批準開展。

納入標準： ①患者存在甲狀腺乳頭狀癌相關癥狀； ②實施的手術方式為甲狀腺全切術以及甲狀腺次全切術。

排除標準：①診斷回聲顯示，并不是低回聲的結節；②結節的最大直徑>1 cm；③結節中存在粗大鈣化， 并且結節的成分不能顯示； ④合并有多發性結節；⑤合并有嚴重的心肺功能損傷，無法使用超聲造影檢查；⑥術后病理診斷，發現其為單純性或者結節性甲狀腺腫大等非腫塊病癥。

1.2 方法

常規超聲檢查：使用彩色多普勒超聲診斷儀，使用的探頭頻率設置為15 MHz，機械指數設定在0.08~0.14 之間。 其總增益應在88%左右，深度3 mm。 臨床醫師應引導患者完全暴露其頸部， 利用常規灰階超聲，對患者甲狀腺區域進行掃描，具體應包含結界內部回聲、結節內部、結節邊界、患者血液循環、結節的形態和大小、結節周圍組織的病變狀況等內容。

在超聲的引導之下，將細針傳入到目標結節，隨后將針芯拔出， 在結節內部沿不同方向使用穿刺針進行快速穿插， 數次后利用虹吸原理將甲狀腺結節細胞進行吸取，在囊實性結節中穿取實性部位細胞，隨后對穿刺標本立刻進行BRAF V600E 基因聯合LBC 檢測。 其中穿刺標本應使用95%無水乙醇濕法進行固定，采取蘇木精-伊紅染色法進行染色，隨后在顯微鏡下進行細胞學診斷。

LBC 檢查： 將30 mL 細胞保存液直接注入穿刺標本中，進行離心后去上清液，將膠質、黏液以及血細胞成分去除，使用自動液基細胞制片儀進行制片、封片以及HE 染色，在顯微鏡下實施細胞學診斷。

BRAF V600E 基因檢測：將含有800 μl RNA later 保存液注入穿刺標本中， 并在PRC 管之中實施BRAF V600E 基因檢測。在進行DNA 分離之后，將樣本基因組DNA 進行提取，隨后利用aRT-PCR，實現基因擴增，使用擴增阻滯突變系統法，以及BRAF V600E基因突變試劑盒，實施BRAF V600E 基因檢測。

手術病理診斷：對于活檢組織進行HE 染色，在低倍鏡下對患者的內部回聲以及病灶形態進行觀察，使用高倍鏡觀察患者的細胞和組織具體情況?；颊呷绻诘捅剁R下出現砂礫體， 應使用高倍鏡進行檢查，將砂礫體的數量進行記錄，并且觀察患者結節組織的結構、數量、邊界以及形態。

1.3 觀察指標

將患者的手術病理診斷結果作為診斷的金標準，對患者采取常規超聲和LBC 聯合BRAF V600E基因檢測的特異度、敏感度、準確度進行對比分析。其中準確度為診斷結果中真陰性和真陽性之和所占的比值； 敏感度為真陽性在真陽性與假陰性之和中所占的比值； 特異度則是真陰性在真陰性與假陽性例數中所占的比值。

1.4 統計方法

采用SPSS 20.0 統計學軟件處理數據， 符合正態分布的計量資料用（±s）表示，采用t檢驗；計數資料用[n(%)]表示，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 手術病理診斷結果

98 例患者在進行手術病理診斷后，其中甲狀腺乳頭狀癌為90 例，剩余8 例患者為其他疾病。 而常規超聲診斷檢查結果為甲狀腺乳頭狀癌患者86 例，剩余12 例患者為其他疾?。籐BC 聯合BRAF V600E基因檢測結果為甲狀腺乳頭狀癌患者88 例， 剩余10 例為其他疾病。

2.2 兩種診斷方法特異度與敏感性對比

經常規超聲檢查后， 特異度為25.00%（2/8）、敏感度為88.89%（80/90）、 準確度為83.67%（82/98）；經LBC 聯合BRAF V600E 基因檢測后， 特異度為87.50%（7/8）、 敏感度為96.67%（87/90）、 準確度為95.92%（94/98）。 相較常規超聲檢查，LBC 聯合BRAF V600E 基因檢測結果更為準確， 差異有統計學意義（χ2=4.063、4.063、8.018，P=0.044、0.044、0.005）。見表1、表2。

表1 常規超聲檢查的特異度與敏感性

表2 LBC 聯合BRAF V600E 基因檢測的特異度與敏感性

3 討論

近些年， 對甲狀腺結節患者進行超聲引導下行細針穿刺細胞學檢查樣本實施BRAF V600E 檢測進行了大量研究，但研究結果卻具有較為顯著的差異。臨床研究文獻可知， 采取BRAF V600E 基因突變檢測能夠有效提升對甲狀腺結節診斷的準確度， 且能夠在術前對病危病例進行相應篩查[8]。在對甲狀腺乳頭狀癌患者檢測時，研究文獻結果顯示，癌灶形態以及數量存在差異時， 中央區淋巴結轉移和BRAF V600E 基因并無明顯的相關性， 表示采取BRAF V600E 基因突變狀態對甲狀腺乳頭狀癌患者臨床病例特征影響并不明確[9]。

作為一種操作簡便的診斷方式， 常規超聲對于甲狀腺乳頭狀癌的診斷敏感性較低， 并且較易受到患者病灶邊界、操作者水平、血流信號以及鈣化直徑等因素的影響[10]。采取LBC 檢測，則是將穿刺標本沖洗到細胞保存液之中，在進行多次的振蕩離心后，將標本中的膠質、 血細胞以及細胞碎片等相關干擾成分取出， 利用液基自動制片設備進行制片， 在玻片13 mm 直徑范圍內黏附濃縮細胞和診斷成分， 進一步保障診斷的準確性[11-13]。 但需要注意的是，LBC 在制片時，存在離心和振蕩過程，可能會導致患者細胞簇分散，產生大量的單個細胞。并且該過程對細胞質也會產生影響，增大核質比例，產生大量裸核，對準確度造成影響[14-16]。 因此單獨使用LBC 存在一定的問題。 而在甲狀腺乳頭狀癌中BRAF V600E 基因檢測突變較為常見，BRAF V600E 基因可以將細胞外刺激信號轉導到細胞中，從而引起一系列的細胞反應，例如對細胞分化、死亡、增殖、轉移等功能的調控[17]。 所以臨床中，常會選擇聯合兩種方式實施檢測，提高檢測準確度。

該研究結果可知，LBC 聯合BRAF V600E 基因檢測后，特異度為87.50%（7/8）、敏感度為96.67%（87/90）、準確度為95.92%（94/98），優于單一檢測結果。黃建新等[14]學者在相關研究中得出，聯合檢測的敏感度為97.37%、特異度為100.00%明顯優于單一檢測，與該文所得結果相近。 因此，聯合檢測可以顯著提高甲狀腺乳頭狀癌患者的診斷準確性， 避免錯過最佳時間，彌補單純常規超聲的診斷不足[18]。

綜上所述， 對于甲狀腺乳頭狀癌患者采取LBC聯合BRAF V600E 基因檢測鑒別價值高， 能夠提高甲狀腺乳頭狀癌診斷的準確率，值得推廣。