三聚氰胺前處理優(yōu)化的檢測(cè)方法

錢(qián)成林 吳思 鄭旭濤 董成虎 陳權(quán)翠

摘 要：本文主要闡述了乳及乳制品中三聚氰胺前處理的方法，在《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測(cè)方法》（GB/T 22388—2008）的基礎(chǔ)之上進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)，優(yōu)化前處理步驟，將先過(guò)濾再定容改變?yōu)橄榷ㄈ菰龠^(guò)濾，加標(biāo)回收率得到提高，準(zhǔn)確性更強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：乳及乳制品;優(yōu)化;回收率

An Optimized Detection Method for Melamine Pretreatment

QIAN Chenglin1， WU Si2， ZHENG Xutao2， DONG Chenghu1， CHEN Quancui2*

（1.New Hope Dairy Co.， Ltd.， Food Safety Supervision Department， Chengdu 610000， China; 2.Centre Testing International Group Co.， Ltd.， Yunnan Hua Ce Testing International Co.， Ltd.， Kunming 650000， China）

Abstract： The pretreatment method of melamine in milk and dairy products was introduced. Based on the method of detection of melamine in raw milk and dairy products of GB/T 22388—2008， the pretreatment steps were optimized. The rate of recovery is improved and the accuracy is stronger by changing the first filtration and then the fixed volume into the first fixed volume and then filtering.

Keywords： milk and dairy products; optimize; percent recovery

三聚氰胺（C3H6N6），俗稱(chēng)密胺、蛋白精，IUPAC命名為1，3，5-三嗪-2，4，6-三氨基，是一種三嗪類(lèi)含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，被用作化工原料。它是白色單斜晶體，幾乎無(wú)味，微溶于水（3.1 g/L常溫），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油及吡啶等，不溶于丙酮、醚類(lèi)，對(duì)身體有害，不可用于食品加工或食品添加物。臨床研究發(fā)現(xiàn)，三聚氰胺可能會(huì)在人體泌尿系統(tǒng)如膀胱和腎臟形成泥沙樣結(jié)晶或結(jié)石[1]。

中國(guó)國(guó)家食品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)中心在2008年9月13日指出，三聚氰胺屬于化工原料，不允許添加到食品中，故暫未設(shè)定像農(nóng)藥般的殘留標(biāo)準(zhǔn)限制。除了人為添加外，三聚氰胺類(lèi)物質(zhì)還可能從環(huán)境、食品包裝材料等途徑進(jìn)入到食品，且其含量極低。由于動(dòng)物源食品基質(zhì)背景復(fù)雜、所需前處理過(guò)程煩瑣費(fèi)時(shí)，因此開(kāi)發(fā)復(fù)雜食品基質(zhì)中痕量三聚氰胺類(lèi)物質(zhì)快速、高靈敏分析檢測(cè)方法對(duì)保障我國(guó)食品安全具有重要的意義[2]。2008年10月8日，原衛(wèi)生部、工業(yè)和信息化部、農(nóng)業(yè)部、國(guó)家工商行政管理總局和國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局聯(lián)合發(fā)布公告，制定三聚氰胺在乳與乳制品中的臨時(shí)管理值。

嬰幼兒配方乳粉中三聚氰胺的限量值為1 mg/kg，高于1 mg/kg的產(chǎn)品一律不得銷(xiāo)售。液態(tài)奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值為2.5 mg/kg，高于2.5 mg/kg的產(chǎn)品一律不得銷(xiāo)售。目前使用的檢測(cè)方法有GB/T 22388—2008原料乳及乳制品中三聚氰胺檢測(cè)第一法高效液相色譜法[3]和GB/T 22400—2008原料乳中三聚氰胺檢測(cè)方法[4]，按照檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果有所偏低，方法檢出限為2.0 mg/kg，加標(biāo)濃度為2～10 mg/kg，回收率在80%～110%，不能滿(mǎn)足《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和認(rèn)證指南》（GB/T 27417—2017）關(guān)于加標(biāo)回收率的要求，在目前的方法上進(jìn)行改進(jìn)，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。加標(biāo)回收率都在90%～110%，滿(mǎn)足要求[5]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

牛奶樣品，工廠奶罐檢測(cè)合格牛奶;乙腈（色譜純，生產(chǎn)批號(hào)：148405，德國(guó)默克）;檸檬酸（分析純，生產(chǎn)批號(hào)：20140201，重慶川東化工有限公司）;辛烷磺酸鈉（分析純，生產(chǎn)批號(hào)：20160602，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;三氯乙酸（分析純，生產(chǎn)批號(hào)：20130124，廣東光華科技股份有限公司）;甲醇（色譜純，生產(chǎn)批號(hào)：1847607，德國(guó)默克）;超純水，實(shí)驗(yàn)室自制。

離子對(duì)緩沖試劑：使用ME204E電子天平準(zhǔn)確稱(chēng)取2.10 g檸檬酸和2.16 g辛烷磺酸鈉，加入約980 mL超純水，調(diào)節(jié)pH值至3.0，用水定容至1 000 mL。使用0.45 μm水相濾膜過(guò)濾后進(jìn)行使用。

1.2 儀器與設(shè)備

安捷倫高效液相色譜儀1260（美國(guó)Aligent，紫外檢測(cè)器VWD，檢測(cè)波長(zhǎng)240 nm，檢測(cè)溫度40 ℃）;ME204E電子天平，精確度0.000 1 g，梅特勒托利多。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 操作步驟

使用1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行加標(biāo)至1.25 mg/L、2.50 mg/L、10.00 mg/L。分別18次準(zhǔn)確稱(chēng)取（2.000±0.010）g制備好的加標(biāo)樣品至50 mL離心管中，準(zhǔn)確移取18 mL濃度為2%的三氯乙酸溶液和5 mL乙腈溶液至每只離心管中，渦旋混勻1 min，超聲提取10 min，振蕩提10 min，6 000 r/min離心10 min。

用濾紙進(jìn)行過(guò)濾后作為凈化液，過(guò)濾溶液時(shí)間從30 min，縮短到5 min左右。再用3 mL甲醇和5 mL水先后過(guò)活化好的陽(yáng)離子交換柱，將凈化液5 mL加5 mL水混勻后過(guò)柱，繼續(xù)用3 mL水和3 mL甲醇先后過(guò)柱，加入6 mL 5%氨化甲醇溶液洗脫，將洗脫液置于50 ℃氮吹至干，取出比色管加入1 mL流動(dòng)相溶液用0.45 μm濾膜過(guò)濾到進(jìn)樣瓶中。沒(méi)有加標(biāo)的樣品依據(jù)上述方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 進(jìn)樣條件

色譜柱C18（150 mm×4.6 mm×5 μm）;波長(zhǎng)：紫外240 nm;柱溫：40 ℃;進(jìn)樣體積：20 μL;流速：1 mL/min;洗脫方式：等度洗脫。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度及峰面積結(jié)果，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性關(guān)系y=ax+b，其中a=82.355，b=-3.195 7，

線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999 7，可以滿(mǎn)足≥0.999以上的要求，具體見(jiàn)圖1。

2.2 加標(biāo)回收率

依據(jù)回收率標(biāo)準(zhǔn)要求（表1），分別加標(biāo)至

1.25 mg/L、2.50 mg/L、10.00 mg/L，并進(jìn)行平行測(cè)定6次，加標(biāo)回收率在95.1%～108.4%，其中加標(biāo)至1.25 mg/L的樣品加標(biāo)回收率在98.5%～108.4%，加標(biāo)濃度至2.50 mg/L的樣品加標(biāo)回收率為98.8%～100.9%，加標(biāo)濃度至10.00 mg/L的樣品加標(biāo)回收率在95.1%～98.5%，都能滿(mǎn)足加標(biāo)回收率在90%～110%的要求。加標(biāo)回收率見(jiàn)表2。

2.3 精密度

計(jì)算1.25 mg/L、2.50 mg/L、10.00 mg/L的加標(biāo)檢測(cè)結(jié)果，RSD值都低于5%，滿(mǎn)足RSD的要求，見(jiàn)表3。

2.4 方法檢出限和定量限

按照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，查看安捷倫1260高效液相色譜儀18次檢測(cè)結(jié)果的信噪比，3倍的信噪比作為方法檢出限，10倍的信噪比作為方法定量限。由于檢測(cè)18個(gè)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算的方法檢出限和定量限都不一致，采用18次計(jì)算結(jié)果的平均值作為方法檢出限和定量限。方法檢出限為0.08 mg/L，方法定量限為0.28 mg/L，見(jiàn)表4。

2.5 優(yōu)化方法與國(guó)標(biāo)方法對(duì)比

優(yōu)化方法與國(guó)標(biāo)方法對(duì)比結(jié)果見(jiàn)表5，優(yōu)化方法檢出限更低，定容時(shí)間短，加標(biāo)回收率符合要求。

3 結(jié)論

結(jié)果表明，更改前處理方法后，過(guò)濾定容時(shí)間從原來(lái)30 min縮短至5 min，定容時(shí)間縮短至原來(lái)的1/6;加標(biāo)回收率有明顯改善，從80%～110%上升至95.1%～108.4%，改善比較明顯，檢測(cè)準(zhǔn)確性提高;精密度實(shí)驗(yàn)方面，加標(biāo)樣品檢測(cè)偏差RSD值在5%以?xún)?nèi);方法檢出限為0.08 mg/kg，方法定量限為0.28 mg/kg，與原有標(biāo)準(zhǔn)的定量限2.0 mg/kg相比降低顯著，低濃度樣品更加容易檢出。所以更改定容方式后檢測(cè)結(jié)果更加高效、準(zhǔn)確、可靠。

參考文獻(xiàn)

[1]楊光，丁飛.三聚氰胺的檢測(cè)方法探討[J].河南科技，2010（11）：71-72.

[2]李雪剛.動(dòng)物源食品中三聚氰胺類(lèi)物質(zhì)高靈敏檢測(cè)方法研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[3]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測(cè)方法：GB/T 22388—2008[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[4]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).原料乳中三聚氰胺快速檢測(cè) 液相色譜法：GB/T 22400—2008[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[5]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南：GB/T 27417—2017[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

基金項(xiàng)目：乳制品及牛肉制品精深加工關(guān)鍵技術(shù)研究與產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用示范（2020YFN0153）。

通信作者：陳權(quán)翠（1992—），女，云南曲靖人，本科，助理工程師。研究方向：食品安全。E-mail：1249785957@qq.com。