市售和自摘銀杏葉中黃酮類化合物含量對比研究

周晴 呂虹霞 代靖

【摘要】目的：研究市售和自摘銀杏葉中黃酮類化合物的含量對比。方法：主要采用超聲波輔助法，使用不同濃度乙醇溶液提取銀杏葉中黃酮類化合物，另外采用紫外可見分光光度計測定銀杏葉中黃酮類化合物含量。結果：市售的銀杏葉中黃酮類化合物含量最多。結論：超聲提取法省時、高效、節能、環保，適用于銀杏葉中黃酮類化合物的提取，且在該條件下陜西省西安市市售的銀杏葉中黃酮類化合物含量比自摘銀杏葉高。

【關鍵詞】銀杏葉;黃酮;超聲提取法;紫外可見分光光度法

【DOI 編碼】10.3969/j.issn. 1674-4977.2022.02.012

Comparative Study on Flavonoid Content in Commercial and Self-picked Ginkgo Biloba Leaf

ZHOU Qing，Lu Hong-xia，DAI-Jing

（Xi'an International University，Xi'an 710077，China）

Abstract：Objective：To study the content comparison of flavonoids in commercial and self-picked Ginkgo biloba leaf. Methods：Flavonoids in Ginkgo biloba leaf were extracted with different concentrations of ethanol by ultrasonic-assisted method，and the content of flavonoids in ginkgo biloba leaf was determined by UV-visible spectrophotometer. Results：The commercial Ginkgo biloba leaf contained the most flavonoids. Conclusion：Ultrasonic extraction is time-saving，high efficiency，energy saving，environmental protection，suitable for the extraction of flavonoids in Ginkgo biloba leaf，and under the conditions of Xi'an city，Shaanxi Province，the content of flavonoids in Ginkgo biloba leaf is higher than that of self-picked Ginkgo biloba leaf.

Key words：Ginkgo biloba leaf;flavonoids;ultrasonic extraction;UV-visible spectrophotometry

銀杏葉除了含有黃酮類化合物以外，同時還含有蛋白質、鞣質、糖類、多酚類等水溶性物質，大量應用于防治心腦血管疾病、神經性疾病、哮喘、癌癥等疾病[1]。臨床使用的干燥銀杏葉藥材一般為人工栽培，市面上買到的干燥銀杏葉也都是人工栽培的藥用銀杏葉[2]。除了栽培銀杏樹，中國很多地區野生銀杏樹的數量也不少。西安有銀杏樹的地區就很多，如古觀音禪寺、杜陵遺址公園、漢陽陵、唐大慈恩寺遺址公園、大唐芙蓉園等。

黃酮類化合物作為銀杏葉的主要成分之一，具有抗氧化、抗炎、抗衰老、抗癌、保肝護肝、抑菌、治療心血管疾病等作用，對高血壓、癌癥、冠心病等疾病有顯著的療效[3]。姜曉旭等人[4]的研究證明，銀杏葉中黃酮類化合物是治療心血管疾病的主要有效成分。穆楠[5]的研究證明，銀杏葉中黃酮類化合物在抗腫瘤方面具有很大潛力。

近年來，隨著科學技術的發展，銀杏葉除了作為中藥材使用，還被廣泛地應用于飲料、化妝品等領域。陳桂光等人[6]的研究表明，以銀杏葉和芒果為原料，可以研制出一種新型的營養保健天然飲品，為銀杏葉飲料市場的開發提供了一定的依據。劉燕等人[7]在介紹銀杏潔面膏和銀杏護膚爽的研制方法時簡述了銀杏在防衰老化妝品中的應用，表明它在化妝品領域也有很大潛力。

提取銀杏葉黃酮類化合物主要可以采用浸取方法、超聲提取方法、微波技術提取方法、生物酶解提取方法、先進的超臨界流體萃取方法[8]。房磊[9]采用超聲輔助法的最佳工藝為提取功率80 W、提取時間40 min、提取溫度70℃、料液比1：25 （g/mL），此條件下提取出黃酮為27.32 mg/g。杜若源等[10]提取銀杏葉中總黃酮采用超聲波輔助方法的最優提取條件為：乙醇濃度60%，固液比1：50（m：v），提取時間30 min，浸提物總黃酮含量達到8.075 mg/g，提取率達到80.75%。在張育新等人[11]的研究表明，按照國內的設備和成本現狀，銀杏葉中黃酮類化合物提取主要采用的是水-乙醇提取法。所以，在乙醇回流的過程中，影響銀杏葉中黃酮類化合物提取的重要成因有提取溶劑的濃度（乙醇）、提取溶劑的具體用量、提取次數和提取時間。在本次研究主要采用超聲輔助提取法提取銀杏葉中黃酮類化合物，在乙醇回流的過程中分析乙醇濃度對銀杏葉中黃酮類化合物提取率的影響，同時對比市售和自摘銀杏葉中黃酮類化合物的含量，為后期開發利用銀杏葉提供廣泛發展思路。

1儀器與試藥

1.1儀器

電子天平（FA004，寧波市鄞州華豐電子儀器廠）;電熱鼓風干燥箱（DHG-9053型，上海一恒科學儀器有限公司）;超聲波清洗器（SB-25-12DTDB型，寧波新芝生物科技股份有限公司）;紫外分光光度計（UV754PC型，上海佑科儀器儀表有限公司）。

1.2試藥與試劑

所有銀杏葉經西安外事學院醫學院呂虹霞副教授鑒定為正品。市售銀杏葉（產地：陜西，購于西安中藥材市場）;自摘銀杏葉（產地：陜西，摘自西安外事學院校區主路，新鮮，無病蟲害）;蒸餾水;蘆丁標準品（中國藥品生物制品檢定所），無水乙醇（分析純，天津市天力化學試劑有限公司生產，批號：20210302）;硝酸鈉，硝酸鋁（分析純，中國上海振欣試劑廠生產，批號：20080402）;氫氧化鈉（片）（分析純，天津奧普升化工有限公司，批號：20201015）。

2實驗方法

2.1黃酮類化合物含量測定

2.1.1蘆丁標準溶液的制備

準確稱取蘆丁標準品5.0 mg，使用濃度為60%的乙醇溶液將其溶解，定量轉移到50 mL容量瓶中，將溶液稀釋至刻度值后搖勻，配置成為質量濃度為0.1 mg/mL的蘆丁標準溶液。

2.1.2標準曲線的繪制

吸取上述配制的標準溶液0.0 mL，1.0 mL，2.0 mL，3.0 mL，4.0 mL，5.0 mL分別置于6個10 mL的具塞試管中搖勻。分別在6個試管中，先加入5%硝酸鈉0.5 mL，搖勻后靜置6 min，再加入10%硝酸溶液0.3 mL，搖勻后靜置6 min，最后加入4% 氫氧化鈉溶液4.0 mL，使用60%乙醇溶液，定容至10 mL，放置15 min。將加入0.0 mL蘆丁的溶液設置為空白對照組。采用紫外可見分光光度計，在波長為516 nm處測定這六組標準溶液的吸光度。用Microsoft Excel軟件來繪制標準曲線，縱坐標為吸光度，橫坐標為濃度，得出線性回歸方程。

2.2測量市售銀杏葉黃酮類化合物含量

2.2.1提取市售銀杏葉中黃酮類化合物的方法

稱取干燥的銀杏葉粉末（過80目篩）3 g，精密稱定，各取平行3份，置于250 mL玻璃具塞三角瓶中，按料液比（1：7）[12]加入21 mL無水乙醇，在超聲功率為500 W的條件下提取60 min后過濾，濾液備用。

2.2.2不同濃度乙醇溶液提取市售銀杏葉黃酮類化合物

改變乙醇濃度為50%、60%和70%，按照2.2.1方法提取市售銀杏葉黃酮類化合物。

2.2.3測量市售銀杏葉黃酮類化合物含量

分別吸取2.2.1和2.2.2的濾液，按2.1.2中的步驟操作，然后測定在510 nm條件下提取液的吸光值，記錄數據并計算其產率，選擇提取率最高的方案。

2.3測量自摘銀杏葉黃酮類化合物含量

采用超聲輔助乙醇法提取自摘銀杏葉黃酮類化合物，操作方法同2.2。

3實驗結果與分析

3.1蘆丁標樣測定數據分析

根據2.1.2方法測定蘆丁標準樣品的吸光度，得到表1的數據。

由Microsoft Excel繪制的標準曲線（見圖1），其回歸方程為：y=1.1571x+0.0154，R²=0.9935。

3.2黃酮類化合物含量測定結果

3.2.1不同乙醇濃度提取市售銀杏葉黃酮類化合物的結果

根據2.2.3方法測定市售銀杏葉黃酮類化合物的含量，得到表2的數據。

結果：70%濃度水平的乙醇溶液提取量最強，提取率可達0.340%。

3.2.270%乙醇提取市售銀杏葉與自摘銀杏葉黃酮類化合物的結果

根據3.2.1的結論，采用2.3實驗方式進行市售銀杏葉與自摘銀杏葉黃酮類化合物含量測定。得到表3的數據。

結果：由表3可知，用溶劑為70%乙醇分別提取兩種銀杏葉，市售銀杏葉比自摘銀杏葉的黃酮類化合物含量高，其最高提取率為0.345%。

4結論

由上述實驗結果知，在1：7的料液比、500 w的超聲功率、60 min超聲時間情況下，70%的乙醇溶液提取陜西省西安市市售的銀杏葉得到的黃酮類化合物含量較高。自摘銀杏葉的黃酮含量低可能與其生長環境和采摘時間等因素有關，我們采摘銀杏葉的時間為九月，采摘的銀杏葉已經有部分發黃，雖然在打粉前將發黃葉片剪去，但是與市售的銀杏葉對比，自摘的銀杏葉黃酮類化合物含量少。

【參考文獻】

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫藥科技出版社，2020：329-330.

[2]周昊，王成章.銀杏資源加工利用產業發展現狀[J].生物質化學工程，2021，55（1）：10-14.

[3]杜崢，劉文潔，明璞，等.銀杏葉中黃酮類化合物提取研究[J].廣東化工，2017，44（4）：32-33.

[4]姜曉旭，孫世曉.銀杏葉提取物與心腦血管疾病關系的研究進展[J].黑龍江中醫藥，2016，45（2）：69-70.

[5]穆楠.杏花雨注射液的體外抗腫瘤作用及其作用機制研究[D].石家莊：河北醫科大學，2007.

[6]陳桂光，龐宗文，黃時海，等.天然芒果銀杏汁的研制[J].食品工業，1998（2）：8-9.

[7]劉燕，陳京華.銀杏在防衰老化妝品中的應用研究[J].日用化學工業，2002（4）：79-81.

[8]曹利慧，范業剛.植物中黃酮類化合物提取方法研究進展

[J].安徽化工，2020，46（6）：6-9.

[9]房磊.超聲波輔助提取銀杏葉黃酮及體外抗運動氧化作用研究[J].食品研究與開發，2016，37（17）：153-157.

[10]杜若源，謝晶，王婷，等.超聲波輔助提取銀杏葉中總黃酮的工藝優化[J].食品與機械，2015，31（1）：167-170.

[11]張育新，劉偉毅，楊駿，等.銀杏葉提取物的制備工藝優化及質量控制[J].中國藥師，2021，24（1）：75-80.

[12]朱平華.銀杏葉中黃酮類化合物的提取工藝研究[J].化工生產與技術，2006，13（6）：25-27.