黑龍江省規模化牧場飼料原料中霉菌毒素污染情況調查

劉彩娟，任 亮，付文國，王永信

原生態牧業公司，黑龍江齊齊哈爾 161000

0 引言

霉菌毒素（Mycotoxins）是由曲霉屬、鏈格孢屬、青霉屬、麥角屬和鐮刀菌屬等絲狀真菌在生長過程中產生的有毒次級代謝產物[1]，可造成飼料品質降低，嚴重影響反芻動物生產。尤其是黃曲霉毒素會損害奶牛肝臟功能，其代謝產物黃曲霉毒素M1會影響乳品質；玉米赤霉烯酮會造成奶牛繁殖障礙；嘔吐毒素會造成奶牛胃腸道出血，采食量下降，體細胞數上升，提高乳房炎發病率，增加圍產期奶牛代謝疾病的風險。而食用含有霉菌毒素污染的奶、肉等會影響人的健康[2]。因此，實時動態了解飼料中主要霉菌毒素的污染狀況，進行有針對性的防控，已經成為牧場重要的工作之一。因此，本文使用酶聯免疫吸附法（ELISA）對黑龍江省5 家規模化牧場飼料原料進行了6 種常見霉菌毒素的檢測，分析不同飼料原料的霉菌毒素污染情況，并為飼料原料中霉菌毒素污染的防控提出建議，為奶牛養殖業持續健康發展提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2021年1—12月黑龍江省5 家規模化牧場采購的飼料原料及庫存飼料。

1.2 樣品采集

不同飼料原料根據其飼料運輸和存貯狀態對應采樣量，采集方式及采樣點，見表1。

表1 飼料原料采樣量、采集方式及采樣點

1.3 試樣的制備

將采集的樣品，用“四分法”混合后，均分為兩份：一份為留存樣品（水分大的飼料需要進行烘干后留存）；一份為檢測樣品，粉碎后全部通過40目篩，裝于密封塑料袋中，待稱量用。

1.4 試劑及儀器

黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、赭曲霉毒素A、伏馬毒素（B1+B2）、T-2毒素ELISA檢測試劑盒，拜發分析系統銷售（北京）有限公司；甲醇（分析純），天津科密歐化學試劑有限公司；微量移液器，賽默飛世爾科技（中國）有限公司，ML204T/02十萬分之一電子分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司；FW-100高速萬能粉碎機，天津泰斯特；Bio-Tek ELX808酶標儀，美國寶特公司。

1.5 統計分析

試驗數據采用Excel軟件進行統計整理，根據霉菌毒素試劑盒檢出限為參考，通過霉菌毒素分析軟件進行數據分析統計，黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、赭曲霉毒素A、伏馬毒素（B1+B2）、T-2毒素檢測限分別為1 μg/kg、222 μg/kg、222 μg/kg、5 μg/kg、222 μg/kg、50 μg/kg，高于檢出限值視為陽性。根據《GB13078—2017飼料衛生標準》，黃曲霉毒素B1允許量≤30 μg/kg，泌乳期精料補充料黃曲霉毒素B1允許量≤10 μg/kg；玉米赤霉烯酮允許量≤500 μg/kg；嘔吐毒素允許量≤3 000 μg/kg，泌乳期精料補充料嘔吐毒素允許量≤1 000 μg/kg，赭曲霉毒素A允許量≤100 μg/kg；伏馬毒素（B1+B2）允許量≤60 000 μg/kg；T-2毒素允許量≤500 μg/kg。

2 結果

2.1 2021年規模化牧場飼料原料霉菌毒素污染情況

從表2可以看出，規模化牧場的飼料原料霉菌毒素檢出率較高的主要是嘔吐毒素和伏馬毒素，陽性檢出率分別為35%、14%。其中嘔吐毒素污染最高值超過6 000 μg/kg，伏馬毒素（B1+B2）污染最高值達2 390 μg/kg。值得注意的是，玉米赤霉烯酮雖檢出率為2%，但其污染最高值超過800 μg/kg。黃曲霉毒素B1、T-2毒素均有檢出，但相對值較低，分別為3%和2%。赭曲霉毒素A的檢出率最低，為0%。

表2 2021年規模化牧場飼料原料霉菌毒素污染情況

2.2 2021年不同規模化牧場飼料原料霉菌毒素污染情況

由表3可以得出，不同規模化牧場霉菌毒素污染情況，除赭曲霉毒素A均未檢出外，其余霉菌毒素均有檢出，但不同牧場呈現不同規律性。A牧場黃曲霉毒素B1陽性檢出率為5.62%，污染最高值為6.45 μg/kg；玉米赤霉烯酮陽性檢出率1.35%，污染最高值為659.20 μg/kg；嘔吐毒素陽性檢出率最高為44.66%，陽性平均值為1 983 μg/kg，污染最高值為2 199 μg/kg；伏馬毒素（B1+B2）陽性檢出率分別為16.33%，陽性平均值984μg/kg，污染最高值1 043.55 μg/kg；T-2毒素檢出率為1.32%，陽性平均值102.02 μg/kg，污染最高值為137.68 μg/kg。B牧場黃曲霉毒素B1陽性檢出率為0.96%，污染最高值為5.59 μg/kg；玉米赤霉烯酮陽性檢出率4.15%，污染最高值為572.40 μg/kg；嘔吐毒素陽性檢出率為35.07%，陽性平均值為1 415 μg/kg，污染最高值為6 000 μg/kg以上；伏馬毒素（B1+B2）陽性檢出率為19.72%，陽性平均值1 103.10 μg/kg，污染最高值2 390 μg/kg；T-2毒素檢出率為0.80%，污染最高值為128.60 μg/kg。C牧場黃曲霉毒素B1陽性檢出率為0%；玉米赤霉烯酮陽性檢出率0.83%，污染最高值為790 μg/kg；嘔吐毒素陽性檢出率為22.30%，陽性平均值為1 532.42 μg/kg，污染最高值為6 000 μg/kg以上；伏馬毒素（B1+B2）陽性檢出率為16.20%，污染最高值1 120 μg/kg；T-2毒素檢出率為6.30%，污染最高值為125.45 μg/kg。D牧場黃曲霉毒素B1陽性檢出率為4.72%，污染最高值為5.92 μg/kg；玉米赤霉烯酮陽性檢出率0%；嘔吐毒素陽性檢出率為28.78%，陽性平均值為1 700 μg/kg，污染最高值為3 999 μg/kg；伏馬毒素（B1+B2）陽性檢出率為3.48%，陽性平均值600 μg/kg，污染最高值714 μg/kg；T-2毒素檢出率為0%。E牧場黃曲霉毒素B1陽性檢出率為0.1%，污染最高值為1.23 μg/kg；玉米赤霉烯酮陽性檢出率2.2%，陽性平均值753 μg/kg，污染最高值為800 μg/kg以上；嘔吐毒素陽性檢出率為30.1%，陽性平均值為1 861 μg/kg，污染最高值為4280 μg/kg；伏馬毒素（B1+B2）陽性檢出率為6.2%，污染最高值733 μg/kg；T-2毒素陽性檢出率為3.1%，污染最高值為124.56 μg/kg。

表3 2021年不同規模化牧場飼料原料霉菌毒素污染情況

從整體來看，五個牧場的嘔吐毒素風險均較高，其中A牧場、B牧場陽性檢出率較高，但B牧場、C牧場污染最高值相對較高，高于《GB13078—2017 飼料衛生標準》上限3 000 μg/kg，A牧場、B牧場、C牧場、D牧場、E牧場整體均值低于《GB13078—2017 飼料衛生標準》上限3 000 μg/kg，但在泌乳牛使用中，需要特別注意嘔吐毒素的限量，不能使用檢測值高的飼料原料。玉米赤霉烯酮雖陽性檢出率較低，但C牧場、E牧場陽性平均值和污染最高限高于《 GB13078—2017 飼料衛生標準》上限值500 μg/kg，尤其是E牧場，污染最高限較高。黃曲霉毒素B1、伏馬毒素（B1+B2）、T-2各牧場陽性檢出率相對較低，風險性相對較低。五個牧場雖同在黑龍江省，但A牧場、B牧場、C牧場處于相同氣候環境，溫濕度相對D牧場較高，且采購貨物來源地不相同，這可能是導致差異較大的原因。

2.3 不同飼料原料霉菌毒素污染情況

由表4可知，24 種不同的飼料原料檢出霉菌毒素種類不同，有19 種飼料原料嘔吐毒素均有檢出，17 種飼料原料伏馬毒素均有檢出，規模化牧場奶牛飼養常用的飼料原料青貯，精補料，全棉籽，玉米面根據品種不同呈現出不同的規律性。可以根據檢出規律性進行針對性的篩查。

表4 不同飼料原料霉菌毒素污染情況

3 討論

霉菌毒素會破壞動物腸道形態結構的完整性，損傷其免疫和抗氧化系統，使腸道菌群和營養物質代謝發生紊亂，進而影響動物機體健康[3]。飼料中常見且危害較大的霉菌毒素有黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素等。這三種霉菌毒素能夠降低動物免疫力，具有致癌性、基因毒性和生殖毒性等[4～7]，而且疊加毒性遠大于單一毒素的作用[8]，因為不同的霉菌毒素都有特定的作用靶點，且霉菌毒素間的協同作用會加重免疫損傷。Luongo等[9]的研究證明了上述觀點，指出玉米赤霉烯酮（α-ZEN）和伏馬毒素B1（FB1）存在協同作用，會損害動物的抗病毒能力。

黑龍江省規模化牧場2021年的黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素整體陽性檢出率（3%、2%、35%），比王倩等[10]2020年調查主要來自山東、河南、江蘇、湖南、四川等地的原料飼料污染黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素（87.69%、92.49%、94.59%）檢出率低，有可能與所收集的飼料原料來源地區有關，也可能和不同年份的季節氣候變化有關。黑龍江省規模化牧場目前存在風險較高的霉菌毒素是嘔吐毒素，同時應注意嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮污染最高值較高的飼料原料，對該種飼料原料進行重點防控；赭曲霉毒素A均未檢出，說明該地區赭曲霉毒素A風險性較小，可以放寬該種霉菌毒素飼料原料的篩查。國內關于伏馬毒素（B1+B2）和T-2毒素相關的數據和研究報道相對較少，但因其與其他毒素具有協同作用，也應引起重視，對全棉籽、泰瑞嘉、糖蜜、燕麥青貯、羊草等飼料原料進行重點篩查。

根據5 個規模化牧場的飼料原料霉菌毒素檢出情況不同，以及不同飼料原料檢出霉菌毒素種類不同，因此針對霉菌毒素的防控要根據不同地區，不同牧場的飼料原料使用類型制定相應的防控方案，做好飼料原料入場，存貯和飼喂管理，最好做到“一場一策”。具體建議如下：一是抓好源頭控制，原料采購選擇時避開污染嚴重的原料產區，優先選擇和采購氣候環境好的地區所生產的原料，原料采購時選擇質量穩定的供應商，可要求供應商提供相關檢測報告；原料入場驗收時，要根據不同飼料原料，設立內控預警機制，進行霉菌毒素的重點篩查，加大檢測頻次，及時識別風險較高的飼料原料，杜絕進入牧場。二是做好庫存管理，對于水分較高容易滋生霉菌的的飼料原料要注意存貯環境，防潮、防雨，加強通風，建議相對濕度低于50%，溫度控制在30 ℃以下；根據牧場的飼料用量、存貯能力和儲存環境等確定購買飼料原料數量，盡量縮短飼料原料的儲存時間，同時做到“先進先出”。對庫存飼料原料加大監控檢測頻次，尤其是青貯等飼料，在使用前要重新檢測毒素指標，處于低風險時才能安排飼喂。三是加強飼喂環境衛生和消毒管理。重視奶牛舍內的環境衛生，包括飼喂道、飲水槽、糞道、臥床等；對于飼料存貯區、飼喂道等防止漏水等出現淋濕，堅持每天巡查，對被水淋濕、發霉和結塊的飼料原料及時清理；根據外界氣溫，合理安排帶牛舍內消毒的頻率和時間。