PD-L1在乳腺癌中表達及臨床意義

張梅芳 吳東恩 胡蕾蕾 陳芷菲

【摘要】目的：探究乳腺癌患者PD-L1表達及臨床意義。方法：選擇在我院進行乳腺癌篩查的女性患者作為研究對象（時間2017年1月—2019年6月），原位癌15例、浸潤癌35例、良性病變15例，對患者進行免疫組織化學染色，比較患者PD-L1陽性表達情況。結果：35例浸潤癌患者PD-L1陽性表達率57.14%（20/35），高于15例原位癌患者PD-L1陽性表達率26.67%（4/15），差異顯著（P<0.05）。15例良性病變者PD-L1陽性表達率為0.00%，與原位癌、浸潤癌患者PD-L1陽性表達率相比較，差異均顯著（P<0.05）。原位癌患者3內生存率86.67%（13/15）高于浸潤癌患者57.14%（20/35），差異顯著（P<0.05）。結論：PD-L1在不同類型乳腺癌中具有差異性的陽性表達，浸潤型乳腺癌中陽性表達率較高，可以反映出癌細胞浸潤程度，并且對乳腺癌患者治療、預后起到輔助作用。

【關鍵詞】乳腺癌；PD-L1；陽性表達率

PD-L1 expression in breast cancer and its clinical significance

ZHANG Meifang， WU Dongen， HU Leilei， CHEN Zhifei

Department of Pathology，Maternal and Child Health Hospital of Heyuan City， Heyuan， Guangdong 517000， China

【Abstract】Objective：To explore the expression and clinical significance of PD-L1 in breast cancer patients.Methods：Selected female patients undergoing breast cancer screening in our hospital as the research object （time from January 2017 to June 2019），15 cases of carcinoma in situ，35 cases of invasive carcinoma，and 15 cases of benign lesions.The patients were examined by immunohistochemical staining to compare the positive expression of PD-L1 in patients.Results：The positive expression rate of PD-L1 in 35 patients with invasive carcinoma was 57.14%（20/35），which was higher than 26.67%（4/15）in 15 patients with carcinoma in situ，the difference was significant（P<0.05）.The positive expression rate of PD-L1 in 15 patients with benign lesions was 0.00%，which was significantly different from that in patients with carcinoma in situ and invasive carcinoma，the difference was significant，P<0.05.The survival rate within 3-year in patients with carcinoma in situ was 86.67%（13/15），which was significantly higher than 57.14%（20/35） in patients with invasive carcinoma，the difference was significant（P<0.05）. Conclusion：PD-L1 has differential positive expression in different types of breast cancer.The positive expression rate is higher in invasive breast cancer，which can reflect the degree of cancer cell invasion and play an auxiliary role in the treatment and prognosis of breast cancer patients.

【Key Words】Breast cancer； PD-L1； Positive expression rate

“乳腺癌”多發于外上象限乳房，是由于乳腺上皮細胞增殖失控引起的惡變，在女性惡性腫瘤中發病率最高，病因尚未完全清楚，存在遺傳風險。乳腺癌早期癥狀一般不明顯，通常表現為乳房皮膚異常，如橘皮征、酒窩征等，伴隨乳頭溢液、乳房腫塊等，非常容易被患者忽視，耽誤疾病治療[1]。有研究指出[2]，目前臨床上在對乳腺癌患者進行治療時，治療方案的選擇以及預后評估主要依靠乳腺癌分子分型，例如HER-2表達等。原位乳腺癌指的是癌細胞局限在上皮層內，沒有對基底膜形成破壞，也沒有侵入間質組織、真皮組織，未發生浸潤或者遠處轉移。原位乳腺癌經過手術切除后可獲得良好療效，浸潤型乳腺癌多見于40歲以上女性，通常是非特殊型浸潤型導管癌，占比70%～80%，其余為浸潤型小葉癌[3]。特殊性浸潤型乳腺癌包括單純小管癌、浸潤型篩狀癌、髓樣癌、黏液癌。乳腺癌病因發病機制較為復雜，目前沒有發現明確的致病因素，普遍認為遺傳、生活方式、環境等因素共同作用是引起乳腺癌的主要原因[4]。浸潤型乳腺癌由于癌細胞擴散并向其他部位形成浸潤，治療難度大，治療效果往往不理想，預后較差。 HER-2等對乳腺癌的分型表達不夠準確，在一定程度上會影響乳腺癌臨床治療效果。為此，為了提高乳腺癌整體治療效果，需要找到一種可以準確分型與鑒別診斷的預測標志物，為乳腺癌臨床治療與預后評估提供更多幫助。PD-L1是一種腫瘤常見分子標志物，與TMB、MMR、MSI-H等有關系，需要在檢查點進行免疫反應設計，對殺傷性T細胞進行抑制等，進行免疫反應調節。乳腺癌患者的癌細胞表明會出現PD-L1高表達，在遇到細胞毒性T淋巴細胞表面的PD-1接觸時，由于免疫檢查點抑制劑的使用解除了免疫系統抑制，對PD-L1進行準確識別，對于乳腺癌鑒別診斷有重要意義。本研究對2017年1月—2019年6月我院進行乳腺癌篩查的女性患者65例進行研究分析，均通過臨床綜合診斷確診，探究乳腺癌患者PD-L1表達及臨床意義，報道如下。

1.1 一般資料

選擇2017年1月—2019年6月期間在我院進行乳腺癌篩查檢查的女性患者作為研究對象，病例數65例，患者年齡26～64歲，平均年齡（46.35±2.12）歲。通過綜合診斷后確診：原位癌15例、浸潤癌35例、良性病變15例。受檢者臨床資料完整，精神狀況良好，未接受過靶向藥物治療。患者對本次研究知情并自愿參加，積極配合檢查，病情穩定。排除妊娠期、哺乳期女性，精神疾病或認知障礙患者。

1.2 方法

對65例乳腺癌篩查檢查患者進行PD-L1檢測，使用Ventana Bench Mark XT型全自動免疫組化機（瑞士，羅氏）。所用試劑PD-L1（clone sp263）所用試劑PD-L1（clone sp263）。免疫組化染色試劑盒Ultra View Universal DAB Detection Kit（Ventana）購自羅氏診斷產品（上海）有限公司。檢測方法為：嚴格參照全自動免疫組化機操作流程：（1）制作石蠟切片，厚度4～5μm，置于65℃烤片機中60min，粘貼標簽后置于機器切片盤上；（2）DAB試劑盒、蘇木精、返藍液、一抗等試劑瓶依次放上檢測試劑架前準備運行；（3）進行消化、抗體孵育、復染等染色處理，約4h完成；（4）使用含溫和清潔劑的清水對切片進行沖洗，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹脂膠封固。

PD-L1陽性表達標準：在顯微鏡下對切片樣本進行多個視野觀察，觀察顯色細胞的比例以及染色深淺。其中顯色細胞比例：5%占比以下記為0分，5%～25%占比記為1分，26%～50%占比記為2分，51%～75%占比記為3分，75%以上占比記為4分。染色深淺：未顯色記為0分，淺黃色記為1分，棕色記為2分，深褐色記為3分。顯色細胞占比得分×染色深淺得分>1，為陽性，反之，為陰性。

1.3 觀察指標

比較原位乳腺癌、浸潤型乳腺癌、良性病變PD-L1陽性表達率。

1.4 統計學處理

采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據分析。計數資料采用（%）表示，進行χ2檢驗，計量資料采用（χ±s）表示，進行t檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

浸潤型乳腺癌患者PD-L1陽性表達率57.14%，高于原位乳腺癌PD-L1陽性表達率26.67%和良性病變PD-L1陽性表達率0.00%，差異顯著（P<0.05）；浸潤型乳腺癌與原位乳腺癌PD-L1陽性表達率差異顯著（P<0.05），見表1。

3.1 乳腺癌分型及臨床治療

乳腺癌作為女性癌癥中發病率第一位的癌癥類型，對女性身心健康均造成嚴重影響，且病死率高，危害大，早期診斷并接受規范治療，對于病情發展控制以及預后改善有至關重要作用。原位癌與浸潤癌均為乳腺癌的常見類型，但是兩者的惡性程度不同，治療方式也存在較大差異，對于原位癌而言，手術切除是目前比較理想的治療方案，可以根治病灶，延長患者生存時間。而浸潤癌由于對其他組織形成浸潤，或者發生遠端轉移，手術切除乳腺的治療效果有限，容易復發，整體療效不理想，需要配合放化療，或者靶向治療，提高臨床治療效果。所以，對乳腺癌的具體分型與惡性程度進行準確鑒別診斷，對于疾病治療與評估預后起到很大作用，需要找到一種有效、準確的方法，實現腫瘤標志物檢測。

3.2 乳腺癌分型依據及PD-L1陽性表達意義

以往臨床上廣泛應用HER-2過表達型、LuminalA、LuminalB等進行乳腺癌分子分型，為乳腺癌治療方案的選擇提供依據，并有效評估預后效果。臨床實踐表明，原位癌患者經過手術切除或者其他聯合治療方案后，普遍可獲得理想的治療效果，但是對于浸潤型乳腺癌的臨床治療，整體效果不夠理想，且分型較為困難，容易出錯。有研究指出，PD-L1作為免疫檢查點抑制劑生物標志物，腫瘤細胞表明通常會出現高表達，對腫瘤細胞進行“偽裝”，使得免疫系統無法準確識別并殺死腫瘤細胞，從而影響了腫瘤診療效果。而浸潤型乳腺癌由于發生浸潤情況，PD-L1陽性表達率高，為了提高治療效果，需要使用PD-L1抑制劑，在乳腺癌免疫治療中具有重要應用，可以將腫瘤細胞對免疫系統的抑制解除，使得免疫系統可以再識別腫瘤細胞，并將其殺死。

3.3 PD-L1在乳腺癌中表達及臨床意義既往研究

趙戈昱[5]研究中指出，PD-1、PD-L1和CD47在非特殊型浸潤性乳腺癌中具有明顯的陽性表達，且有一定相關性。PD-1、PD-L1和CD47在非特殊型浸潤性乳腺癌患者的癌組織及癌旁正常組織中出現陽性表達，與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、組織學分級以及乳腺癌癌癥TNM分期具有相關性，不同類型乳腺癌與病程分期患者，患者PD-1、PD-L1和CD47陽性表達會有所差異。張寧寧[6]研究中表明，乳腺癌的PD-L1陽性表達率高，高于非三陰性乳腺癌，表明PD-L1在不同乳腺癌分型以及病理特征中陽性表達率有差異性，與本研究結果相近。

3.4 PD-L1意義及乳腺癌表達作用

PD-L1陽性表達率高與患者腫瘤細胞分子分型、陽性淋巴結個數與癌癥分期具有相關性，可以為浸潤性乳腺癌的治療方案制定與調整，評估預后提供可靠預測標志物。PD-L1生物學意義為：PD-L1與PD-1之間具有相互作用，并利用對抗原呈遞的陽性信號傳導進行阻斷，制定人體免疫監測。在對乳腺癌患者進行PD-L1檢測時，需要將制動解除后獲得正確表達。PD-L1的病理學意義為：在不同腫瘤類型中PD-L1的表達作用不確定，一般情況下可以對免疫檢查點的抑制劑有效提示陽性表達，但是PD-L1陰性表達結果也不會完全將免疫檢查點的抑制劑可能進行排除。而乳腺癌患者的臨床治療中，免疫治療的作用很大，且臨床應用廣泛，特別是PD-L1單抗，取得理想的成效。一般情況下，對乳腺癌患者進行PD-L1檢測，陽性患者可以在阿替利珠單抗與白蛋白紫杉醇聯合治療中獲取好的臨床療效。而PD-L1檢測結果陰性患者則無法獲益。為此，對乳腺癌患者進行PD-L1檢測時，不僅可以對患者的疾病患病情況以及病情進展情況進行評估與預測，作為診斷乳腺癌的一項依據與參考標準。而且可以為乳腺癌患者的治療提供新的方向，陽性表達者進行免疫治療的效果好于陰性表達者。所以，PD-L1檢測在乳腺癌患者的疾病診斷與治療方案設計中均有一定作用，需要引起重視與注意，應用價值高。

3.5 研究結果

本研究中浸潤型乳腺癌PD-L1陽性表達率明顯高于原位乳腺癌與良性病變者，原位乳腺癌PD-L1陽性表達率明顯高于良性病變者，差異均顯著。分析原因為：PD-L1在乳腺癌患者的腫瘤細胞膜中出現陽性表達，也會在淋巴細胞中出現陽性表達、在單核細胞胞質與胞膜中出現陽性表達，可以看到明顯的棕黃色顆粒。浸潤型乳腺癌的PD-L1的陽性表達率高于原位乳腺癌與良性病變，說明PD-L1的陽性表達率會隨著乳腺癌病灶的轉移、病情進展而提高。PD-L1的表達可以在腫瘤細胞中和腫瘤浸潤的淋巴細胞中，使得乳腺癌患者淋巴細胞免疫功能下降，并影響分泌功能，是乳腺癌疾病進展的重要促進因素之一，參與乳腺癌的發展過程。PD-L1的陽性表達受到乳腺癌的臨床分期與組織學分級影響，會出現不同的陽性表達概率。PD-L1可以在淋巴細胞表面與淋巴PD-1進行互相影響，發生作用后對人體腫瘤細胞免疫應答進行削弱，使得腫瘤細胞出現免疫逃逸，從而發生乳腺癌疾病進展，不容易被診斷出來。乳腺癌患者在腫瘤出現后，以及腫瘤進展過程中，均會出現免疫失調問題，普遍存在。而PD-L1作為一種免疫卡控的重要點位，通過與T淋巴細胞表面受體進行結合，對腫瘤患者的免疫抑制應答翻譯起到直接誘導，介導了腫瘤細胞的逃逸，引起腫瘤侵襲與轉移，并提示乳腺癌患者復發風險級別高，需要引起足夠重視。

本研究結果顯示：浸潤型乳腺癌患者PD-L1陽性表達率57.14%，高于原位乳腺癌PD-L1陽性表達率26.67%和良性病變PD-L1陽性表達率0.00%，差異顯著（P<0.05）；浸潤型乳腺癌與原位乳腺癌PD-L1陽性表達率差異顯著（P<0.05）。說明PD-L1在乳腺癌患者中具有良好表達，較高表達，癌癥進展與分級會影響PD-L1陽性表達率，可以作為乳腺癌臨床診斷與評估病情進展的重要標準。

綜上所述，PD-L1在乳腺癌不同類型與病理特征中表達差異性顯著，對于乳腺癌治療與預后評估有很好的輔助與預測作用。

參考文獻

[1] 張佳琪.錯配修復缺陷、PD-1和PD-L1在乳腺癌組織中的表達及相關性研究[D].太原：山西醫科大學，2021.

[2] 曾道林.乳腺癌原發灶與術后復發轉移灶PD-L1表達差異及對預后影響[D].南昌：南昌大學，2020.

[3] 金才權.PD-L1表達和外周血NLR與乳腺癌預后相關性研究[D].延吉：延邊大學，2020.

[4] 王心然，張寧寧，呂菲，等.乳腺癌原發灶與轉移灶間質浸潤免疫細胞PD-L1的表達異質性分析[J].中華病理學雜志，2020，49（5）：430-434.

[5] 趙戈昱.PD-1、PD-L1和CD47在非特殊型浸潤性乳腺癌中的表達及相關性研究[D].呼和浩特：內蒙古醫科大學，2020.

[6] 張寧寧.乳腺癌間質浸潤免疫細胞PD-L1（Ventana SP142）表達的臨床病理研究[D].石家莊：河北醫科大學，2020.