急性髓系白血病患者外周血CD8+T淋巴細(xì)胞中MagT1水平監(jiān)測(cè)的臨床價(jià)值

王晶 向健 胡淑芳 朱艷坤 鐘玉釵

武漢市漢口醫(yī)院1檢驗(yàn)科，3內(nèi)分泌科（武漢 430012）；2天門(mén)市第一人民醫(yī)院輸血科（湖北天門(mén) 431700）；4南方醫(yī)科大學(xué)附屬東莞醫(yī)院檢驗(yàn)科（廣東東莞 523039）

急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）是最常見(jiàn)的成人急性白血病，其特征是不成熟髓系前體細(xì)胞異常增殖和積聚，導(dǎo)致造血系統(tǒng)破壞［1］。如今，臨床治療AML 的手段有較大改善，包括化療、造血干細(xì)胞移植、分子靶向治療、輸血支持等［2-4］。然而，AML 患者的無(wú)事件生存期（EFS）和總生存期（OS）仍難令人滿意［5］。因此，發(fā)現(xiàn)能夠預(yù)測(cè)AML 患者預(yù)后和有效指導(dǎo)AML 治療的潛在生物標(biāo)志物至關(guān)重要。Mg2+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（MagT1）是Mg2+選擇性轉(zhuǎn)運(yùn)體，可調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)游離Mg2+水平，并介導(dǎo)Mg2+作為第二信使在胞內(nèi)進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)。研究發(fā)現(xiàn)，MagT1 是Mg2+內(nèi)流刺激T 細(xì)胞激活過(guò)程中所必須的，為此瞬時(shí)提高游離Mg2+濃度，能暫時(shí)調(diào)控T 細(xì)胞活化［6］。LI 等［7］研究顯示MagT1可通過(guò)調(diào)控circ_0002755/miR?628?5p/MAGT1 軸介導(dǎo)七氟醚對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的抑制作用。另外，MagT1 基因功能缺失突變能引起X?連鎖免疫缺陷和EB 病毒感染及腫瘤（XMEN）病，且容易發(fā)展為EB 病毒相關(guān)淋巴瘤［8-9］。以上研究表明，MagT1 可參與膠質(zhì)瘤以及淋巴瘤等腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。但MagT1 是否參與調(diào)控血液系統(tǒng)惡性腫瘤仍不清楚。CD8+T 細(xì)胞作為具有抗原特異性的殺傷效應(yīng)細(xì)胞，對(duì)自身免疫和抗腫瘤免疫有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，MagT1 介導(dǎo)的Mg2+內(nèi)流障礙能導(dǎo)致CD8+T細(xì)胞功能耗竭［10-11］。因此，本研究首次通過(guò)檢測(cè)AML 患者外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 的表達(dá)水平，探討MagT1 誘導(dǎo)的CD8+T 細(xì)胞功能耗竭與AML 患者的風(fēng)險(xiǎn)分層及預(yù)后的相關(guān)性，為后續(xù)MagT1在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的研究提供臨床基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 病例資料 回顧性分析2014年3月至2018年12月武漢市漢口醫(yī)院和天門(mén)市第一人民醫(yī)院收治的新發(fā)AML 患者。AML 患者的納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）根據(jù)形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、免疫表型等診斷為AML 的患者［12］；（2）18 歲以上且低于80 歲的患者；（3）無(wú)放化療或干細(xì)胞移植等系統(tǒng)治療史的患者；（4）定期隨訪且資料完整的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）急性早幼粒細(xì)胞白血病；（2）合并其他血液系統(tǒng)疾病；（3）合并其他器官和系統(tǒng)嚴(yán)重疾病或惡性腫瘤者；（4）人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）陽(yáng)性患者；（5）精神障礙者、懷孕或哺乳期婦女。最終納入197 例AML 患者為AML 組，其中男108 例，女89 例，年齡23 ～ 76 歲。另選60 例同期在我院進(jìn)行體檢的健康者為健康體檢組，男34 例，女26 例，年齡25 ～ 71 歲。兩組的性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)武漢市漢口醫(yī)院和天門(mén)市第一人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有參與者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 儀器與試劑 人淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)自北京索萊寶；PE?anti?human CD279（PD?1）、PE/CF594?Anti?Human Tim?3 均購(gòu)自美國(guó)BD 公司；TRIzol 試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen 公司；兔抗人MagT1 多克隆抗體和兔抗人GAPDH 單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；全自動(dòng)生化分析儀購(gòu)自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。PrimeScriptTMRT Reagent Kit及TB Green?Premix Ex TaqTMⅡ購(gòu)自日本TaKaRa公司；流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD 公司；凝膠成像儀購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific 公司。

1.3 危險(xiǎn)分層 根據(jù)美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（Na?tional Comprehensive Cancer Network，NCCN）AML指南［13］，通過(guò)細(xì)胞遺傳學(xué)和分子異常兩方面對(duì)風(fēng)險(xiǎn)分層進(jìn)行評(píng)估。低風(fēng)險(xiǎn)分層：細(xì)胞遺傳學(xué)［inv（16）或t（16；16），或t（8；21），t（15；17）］；分子異常［正常細(xì)胞遺傳學(xué)，缺乏FLT3?ITD 的NPM1 突變或分離的雙等位基因CEBPA 突變］。中風(fēng)險(xiǎn)分層：細(xì)胞遺傳學(xué)［正常細(xì)胞遺傳學(xué)，僅+8，t（9；11）］；分子異常［t（8；21），inv（16），t（16；16）：伴有c?KIT突變］。高風(fēng)險(xiǎn)分層：細(xì)胞遺傳學(xué)［≥3 克隆染色體異常，MK，-5，5q?，-7，7q?，11q23?非t（9；11）inv（3），t（3；3），t（6；9），t（9；22）］；分子異常［正常細(xì)胞遺傳學(xué)，伴有FLT3?ITD 突變］。

1.4 臨床樣本采集及細(xì)胞分離 AML 患者在開(kāi)始治療前收集血液樣本。空腹抽血，取10 mL 外周血備用。將2 mL 外周血和2 mL PBS 加入10 mL 經(jīng)肝素處理后的離心管中混勻，再將混合液加入含4 mL 人淋巴細(xì)胞分離液的離心管中，5 000 r/min離心10 min。吸取淋巴細(xì)胞層至10 mL 離心管中，5 000 r/min 離心10 min，棄去上清，PBS 洗滌3 次。加入1 mL RPMI?1640 完全培養(yǎng)基重懸，獲得PBMCs，通過(guò)免疫磁珠法從PBMCs 中分離初始CD8+T 細(xì)胞。加入RPMI?1640 培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)1 × 106/mL，加入激活抗體CD3 和CD28，將細(xì)胞置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.5 外周血Mg2+濃度檢測(cè) 取3 mL 外周血，室溫2 000 r/min 離心10 min 分離血清，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中Mg2+濃度。

1.6 RT?qPCR 檢測(cè) 使用TRIzol 試劑從PBMCs和CD8+T 細(xì)胞中提取總RNA，然后使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScriptTMRT Reagent Kit 將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用熒光定量試劑盒進(jìn)行qPCR 檢測(cè)MagT1 mRNA 表達(dá)水平。擴(kuò)增程序：94 ℃1 min；94 ℃1 min，60 ℃55 s，72 ℃1 min，進(jìn)行40 個(gè)PCR循 環(huán)。以GAPDH 作為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算mRNA 相對(duì)表達(dá)量。引物如下：MagT1 上游引物：5′?ACCTAGCCGGAGCAAAGTTTC?3′，下游引物：5′?CGTCGCAAACGATGAGC AG?3′；GAPDH 上游引物：5′?GAGTCACTGGCGTCTTCAC?3′，下游引物：5′?ATCT TGAGCTGTTCATCTCT?3′。

1.7 Western blot 檢測(cè) 取備用的CD8+T 細(xì)胞，加入RIPA 裂解液提取細(xì)胞蛋白，采用BCA 法定量蛋白。將20 μg 蛋白質(zhì)加入8% SDS?PAGE 凝膠孔中進(jìn)行電泳，完成電泳后轉(zhuǎn)移到PVDF 膜上。利用5 %BSA 封閉液室溫封閉1 h，然后將膜與一級(jí)抗體MagT1（稀釋1∶500）和GAPDH（稀釋1∶2 500）于4 ℃孵育過(guò)夜。取出膜，用PBST 洗滌3 次，每次5 min。將膜與辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗（稀釋1∶1 000）置于37 ℃孵育60 min。使用ECL 超敏發(fā)光液均勻滴加至PVDF 膜上，使用凝膠成像儀曝光并保存目的蛋白條帶圖像。MagT1 蛋白表達(dá)量為目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參GAPDH 蛋白條帶灰度值比值。

1.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD8+T細(xì)胞中PD?1和Tim?3表達(dá)水平 取備用的CD8+T 細(xì)胞，分別混合加入5 μL FITC?CD8、PE?PD?1、PE?Tim?3 等抗體。置于4 ℃冰箱避光孵育120 min，加入2 mL PBS 洗滌2 次后，1 000 r/min 離心5 min。加入300 μL PBS 重懸，流式細(xì)胞儀分析AML 患者外周血CD8+T 細(xì)胞的PD?1 和Tim?3 表達(dá)情況。目標(biāo)細(xì)胞表面分子表達(dá)水平=該表面分子陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.9 隨訪 隨訪期間，記錄患者治療失敗、復(fù)發(fā)或死亡時(shí)間，最后一次隨訪日期為2021年8月20日。無(wú)事件生存期（EFS）定義為從開(kāi)始治療之日到治療失敗之日的持續(xù)時(shí)間，時(shí)間不詳?shù)幕颊呓刂沟阶詈笠淮螜z查的時(shí)間。總生存期（OS）定義為從開(kāi)始治療之日到死亡之日的持續(xù)時(shí)間，死亡時(shí)間不詳?shù)幕颊呓刂沟阶詈笠淮坞S訪中知道患者生存之日的時(shí)間。無(wú)事件生存率是指從入組開(kāi)始到發(fā)生任何事件的時(shí)間，包括死亡、疾病進(jìn)展、改換化療方案、改為化療、加用其他治療、發(fā)生致死性或不能耐受的副作用等種種事件。主要用于病程較長(zhǎng)的惡性腫瘤或該實(shí)驗(yàn)方案危險(xiǎn)性高等情況下。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS 22.0進(jìn)行。采用Shaprio?Wilk 法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，若符合正態(tài)分布，則用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用t 檢驗(yàn)；若不符合正態(tài)分布，則用M（P25，P75）表示，多組間比較采用非參數(shù)獨(dú)立樣本Kruskal?Wallis H 檢驗(yàn)，兩兩比較采用Sidaks multiple（SM）檢驗(yàn)。采用Spearman 相關(guān)性分析比較MagT1 與PD?1 和Tim?3的相關(guān)性。通過(guò)受試者工作特征（ROC）曲線分析MagT1 蛋白表達(dá)水平對(duì)AML 患者風(fēng)險(xiǎn)分層及預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。采用Kaplan?Meier 曲線分析MagT1表達(dá)水平與AML 患者EFS 和OS 的關(guān)系。P ＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組外周血Mg2+濃度及PBMCs 中MagT1 mRNA 水平比較 與健康體檢組比較，AML 組患者外周血中Mg2+濃度顯著降低，同時(shí)PBMCs 中MagT1 mRNA 相對(duì)表達(dá)水平也顯著下調(diào)（均P ＜0.001）。見(jiàn)表1。

表1 各組外周血Mg2+濃度和PBMCs 中MagT1 mRNA 表達(dá)水平比較Tab.1 Comparison of Mg2+concentration in peripheral blood and expression level of MagT1 mRNA in PBMCs in each group

2.2 不同風(fēng)險(xiǎn)分層AML患者CD8+T細(xì)胞中MagT1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平比較 不同風(fēng)險(xiǎn)分層AML患者中低風(fēng)險(xiǎn)患者CD8+T 細(xì)胞中MagT1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平最高，其次是中風(fēng)險(xiǎn)患者，最后是高風(fēng)險(xiǎn)患者，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.001）。與低風(fēng)險(xiǎn)組比較，中、高風(fēng)險(xiǎn)組患者CD8+T 細(xì)胞中MagT1 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低（P ＜0.01）。與中風(fēng)險(xiǎn)組比較，高風(fēng)險(xiǎn)組患者CD8+T 細(xì)胞中MagT1 mRNA和蛋白表達(dá)水平也顯著降低（P＜0.01）。提示，外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 表達(dá)水平的高低可能與AML 患者風(fēng)險(xiǎn)分層有關(guān)。見(jiàn)表2。

表2 不同風(fēng)險(xiǎn)分層AML 患者CD8+T 細(xì)胞MagT1 mRNA和蛋白表達(dá)水平比較Tab.2 Comparison of MagT1 mRNA and protein expression of CD8+T cells in AML patients with different risk stratification M（P25，P75）

2.3 不同風(fēng)險(xiǎn)分層AML 患者CD8+T 細(xì)胞中PD?1和Tim?3 表達(dá)水平比較 不同風(fēng)險(xiǎn)分層AML 患者CD8+T 細(xì)胞中PD?1 和Tim?3 表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。與低風(fēng)險(xiǎn)組比較，中、高風(fēng)險(xiǎn)組患者CD8+T 細(xì)胞中PD?1 和Tim?3 表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）。與中風(fēng)險(xiǎn)組比較，高風(fēng)險(xiǎn)組患者CD8+T 細(xì)胞中PD?1 和Tim?3 表達(dá)水平也顯著升高（P＜0.01）。見(jiàn)表3。

表3 AML 患者CD8+T 細(xì)胞PD?1 和Tim?3 表達(dá)水平比較Tab.3 Comparison of PD?1 and Tim?3 expression levels of CD8+T cells in patients with AML M（P25，P75）

2.4 AML 患者CD8+T 細(xì)胞中MagT1 蛋白表達(dá)水平與PD?1 和Tim?3 表達(dá)水平的相關(guān)性分析 根據(jù)AML 患者外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量的中值，將高于中值的分為高表達(dá)組，且將高表達(dá)組賦值為1，低于中值的分為低表達(dá)組，且將低表達(dá)組賦值為2。采用Spearman 相關(guān)性分析方法分析MagT1 蛋白表達(dá)量與PD?1 和Tim?3 表達(dá)水平的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AML 患者外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 蛋白表達(dá)水平與PD?1 和Tim?3 表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（均P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 AML 患者CD8+T 細(xì)胞中MagT1 蛋白表達(dá)水平與PD?1和Tim?3 表達(dá)水平的相關(guān)性分析Tab.4 Correlation between MagT1 protein expression on CD8+T cells and PD?1 and Tim?3 levels in patients with AML

2.5 外周血CD8+T細(xì)胞中MagT1表達(dá)水平與AML患者EFS 和OS 的關(guān)系 根據(jù)AML 患者外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量的中值，將高于中值的AML 患者分為MagT1 高表達(dá)組，低于中值的AML 患者分為MagT1 低表達(dá)組。通過(guò)Kaplan?Meier 曲線分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MagT1 蛋白高表達(dá)的AML 患者EFS 和OS 較MagT1 蛋白低表達(dá)患者升高（均P＜0.05），說(shuō)明MagT1 蛋白高表達(dá)的AML 患者預(yù)后更佳。見(jiàn)圖1。

圖1 MagT1 高表達(dá)和低表達(dá)AML 患者EFS 和OS 的比較Fig.1 Comparison of EFS and OS in AML patients with high and low expression of MagT1

2.6 外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 蛋白表達(dá)水平對(duì)AML 患者風(fēng)險(xiǎn)分層及預(yù)后的評(píng)估價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果（表5）顯示，外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 表達(dá)水平對(duì)AML 患者風(fēng)險(xiǎn)分層的AUC 為0.724，95%CI為0.642 ～ 0.806，敏感度為0.523，特異度為0.804，最佳閾值為0.683；預(yù)后評(píng)估的AUC為0.866，95%CI為0.817 ～ 0.915，敏感度為0.973，特異度為0.605，最佳閾值為0.459，說(shuō)明MagT1 表達(dá)水平對(duì)AML 患者風(fēng)險(xiǎn)分層及預(yù)后均具有一定的評(píng)估價(jià)值。

表5 ROC 曲線分析MagT1 蛋白表達(dá)水平對(duì)AML 患者風(fēng)險(xiǎn)分層及預(yù)后評(píng)估的價(jià)值Tab.5 The appraisal value of MagT1 protein expression level for risk stratification and prognosis in patients with AML was analyzed by ROC curve

3 討論

Mg2+作為二價(jià)金屬陽(yáng)離子，在細(xì)胞發(fā)生生物行為過(guò)程中起著重要作用。在真核細(xì)胞中，95%的細(xì)胞內(nèi)Mg2+被結(jié)合，剩下的未結(jié)合的游離Mg2+受到機(jī)體的嚴(yán)格調(diào)控［14-16］，但其特定的分子功能尚不清楚。MagT1 能選擇性地通過(guò)質(zhì)膜傳導(dǎo)Mg2+，且MagT1 基因缺失突變能引起原發(fā)性免疫缺陷。基于MagT1 介導(dǎo)的病理特征，本研究探討了MagT1異常表達(dá)與AML 疾病發(fā)展的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AML 患者外周血中Mg2+濃度降低，同時(shí)，PBMCs 中MagT1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量下調(diào)。提示MagT1 介導(dǎo)的胞內(nèi)Mg2+傳導(dǎo)同樣參與血液相關(guān)惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，MagT1 mRNA 和蛋白相對(duì)表達(dá)量在AML 低風(fēng)險(xiǎn)患者中最高，其次是中風(fēng)險(xiǎn)患者，而高風(fēng)險(xiǎn)患者的MagT1 mRNA 和蛋白表達(dá)量最低，且ROC 曲線分析結(jié)果提示外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 表達(dá)水平對(duì)AML 患者風(fēng)險(xiǎn)分層有一定的評(píng)估價(jià)值。進(jìn)一步通過(guò)隨訪觀察AML患者的EFS 和OS，發(fā)現(xiàn)MagT1 蛋白表達(dá)水平對(duì)AML 患者預(yù)后評(píng)估有良好的診斷價(jià)值，即MagT1蛋白低表達(dá)的AML 患者預(yù)后不良。說(shuō)明外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 表達(dá)水平不僅對(duì)AML 患者風(fēng)險(xiǎn)分層有預(yù)測(cè)價(jià)值，對(duì)其預(yù)后評(píng)估也具有一定價(jià)值。關(guān)于MagT1 與預(yù)后的相關(guān)性，有研究報(bào)道，MAGT1 在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)水平可能是該癌診斷和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物［17］。這些結(jié)果說(shuō)明，外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 的表達(dá)水平與AML 的發(fā)展，乃至治療效果以及預(yù)后情況密切相關(guān)，但相關(guān)的作用機(jī)制尚不清楚。

PD?1 是一種重要的免疫抑制分子，以PD?1 為靶點(diǎn)的免疫調(diào)節(jié)對(duì)抗腫瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病及器官移植存活等均有重要的意義。Tim?3是一類(lèi)T 細(xì)胞表面抑制性分子，能夠引起癌癥與慢性病毒感染過(guò)程中T 細(xì)胞的衰竭。研究［18-19］顯示，PD?1、Tim?3 等抑制分子的高表達(dá)可導(dǎo)致T 細(xì)胞功能耗竭。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)AML 患者CD8+T 細(xì)胞中PD?1 和Tim?3 的表達(dá)，探討其與AML患者危險(xiǎn)分層和MagT1 表達(dá)水平的關(guān)系，以闡述MagT1 表達(dá)水平、T 淋巴細(xì)胞功能耗竭及AML 患者風(fēng)險(xiǎn)分層之間的關(guān)系。研究［20］發(fā)現(xiàn)，初診AML患者CD4+和CD8+T 細(xì)胞PD?1 和TIM?3 表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，首次誘導(dǎo)化療后高危患者T 細(xì)胞PD?1和Tim?3 表達(dá)水平顯著升高。本研究發(fā)現(xiàn)，PD?1和Tim?3 在高風(fēng)險(xiǎn)分層的AML 患者中高表達(dá)，且MagT1 與PD?1 和Tim?3 均呈負(fù)相關(guān)。結(jié)合上述其他研究報(bào)道結(jié)果，說(shuō)明AML 患者外周血CD8+T 細(xì)胞存在功能耗竭，而這種功能耗竭可能與AML 外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 表達(dá)下調(diào)有關(guān)。

綜上所述，AML 患者外周血CD8+T 細(xì)胞中MagT1 表達(dá)下調(diào)與患者風(fēng)險(xiǎn)分層、CD8+T 淋巴細(xì)胞耗竭和不利的生存狀況相關(guān)，據(jù)此判斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分層及預(yù)測(cè)預(yù)后評(píng)估效果，改善AML 患者生存質(zhì)量。但本研究仍然存在一些局限性：（1）健康獻(xiàn)血者的樣本量相對(duì)較小，這可能導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)顯著性相對(duì)較低。（2）盡管研究表明MagT1可能通過(guò)調(diào)節(jié)抗腫瘤基因來(lái)影響細(xì)胞活性、凋亡及轉(zhuǎn)移，但MagT1 在AML 中的潛在機(jī)制仍需要進(jìn)一步的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)來(lái)探索。（3）本研究具有區(qū)域選擇性，因此需要來(lái)自更多其他區(qū)域的患者進(jìn)行驗(yàn)證。后續(xù)將從分子機(jī)制方面深入探討哪些信號(hào)通路參與MagT1 異常表達(dá)對(duì)AML 危險(xiǎn)分層、T 淋巴細(xì)胞功能耗竭以及預(yù)后評(píng)估的作用。總之，MagT1高表達(dá)可能對(duì)指導(dǎo)AML 的治療具有重要意義，有效改善AML 患者生存質(zhì)量。