鴨1型圓環(huán)病毒與鴨3型腺病毒共感染的診斷

顏一鳴 王夢鴿 張和陽 黃 瑜 傅光華,3＊

（1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 福州 350013；2.福建省禽病重點防治實驗室 福州 350013；3.龍巖學(xué)院 福建龍巖 364012）

鴨圓環(huán)病毒（Duck circovirus，DuCV）是2003年發(fā)現(xiàn)的可引起鴨生長不良的病原，該病毒可感染不同日齡和品種鴨，且流行十分廣泛[1]，主要侵害并損傷鴨的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致患鴨免疫功能下降，易遭受其他病原體侵害[2]。鴨3型腺病毒（Duck Adenovirus type 3,DAdV-3）是2015年以來開始在我國出現(xiàn)的一種引起番鴨肝臟出血并死亡的新型鴨腺病毒，發(fā)病鴨表現(xiàn)為肝臟腫大，表面有大量出血點和不規(guī)則出血斑，腎臟腫大、出血，脾臟腫大、出血，膽囊積液[3-5]。鴨感染鴨圓環(huán)病毒表現(xiàn)的臨床癥狀不典型，在臨床病例診斷，尤其是出現(xiàn)其他病原共感染時，極易導(dǎo)致漏診、誤診，從而大大影響治療效果，造成不必要的經(jīng)濟損失。現(xiàn)將2022年2月福建古田某番鴨養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的25日齡番鴨發(fā)生DuCV-1與DAdV-3共感染的診斷報道如下。

1 發(fā)病情況

該肉鴨場飼養(yǎng)的3 000羽番鴨于19日齡時開始發(fā)病，鴨群個體大小不一，部分鴨體況消瘦，羽毛凌亂，發(fā)病2 d后開始陸續(xù)死亡，采食量明顯下降，排黃白色稀糞，送診時鴨群發(fā)病率約為51%，病死率約27%。

2 剖檢病變

剖檢病死雛鴨可見肝臟腫大，表面有大量出血點和不規(guī)則出血斑，肝臟呈淡紅色，腎臟腫大、出血，脾臟腫大、出血，膽囊充盈。無菌采集病死鴨肝臟、脾臟、腎臟等臟器進行實驗室檢查。

3 實驗室病原檢測及診斷

將上述采集的組織分成2份，1份用于細(xì)菌分離與鑒定，1份用于鴨常見病毒（RT-）PCR檢測。

3.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)用無菌接種環(huán)自肝臟內(nèi)部挑取適量樣品，劃線接種在LB培養(yǎng)基以及麥康凱瓊脂平板，放置于37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后，未見細(xì)菌生長。

3.2 病毒檢測將無菌采集的病死鴨肝臟、脾臟及腎臟等臟器剪碎后制備成混懸液，于8 000 r/min離心5 min后取200 uL上清，按照全式金公司的病毒DNA/RNA抽提試劑盒使用說明書提取樣品中的核酸。以獲得的核酸作為模板，開展鴨甲肝病毒、禽坦布蘇病毒、鴨圓環(huán)病毒、鴨星狀病毒、水禽細(xì)小病毒、鴨3型腺病毒和番鴨呼腸孤病毒等鴨常感染的病毒病核酸檢測。（RT-）PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠進行電泳觀察結(jié)果。

電泳結(jié)果發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用針對以上7種病毒的(RT-)PCR檢測技術(shù)從樣品中檢測到鴨圓環(huán)病毒和鴨3型腺病毒（見圖1），其余病原均呈陰性。將擴增產(chǎn)物送福州尚亞生物科技有限公司測序，獲得序列經(jīng)NCBI blast在線比對發(fā)現(xiàn)，所獲得鴨圓環(huán)病毒基因片段與GenBank數(shù)據(jù)庫中鴨1型圓環(huán)病毒MH11毒株的核苷酸序列同源性高達98.7%。擴增獲得的鴨3型腺病毒基因片段與GenBank數(shù)據(jù)庫鴨3型腺病毒FJGT01毒株的核苷酸序列同源性為100%。

圖1 病毒(RT-)PCR擴增產(chǎn)物電泳圖

3.3 診斷 根據(jù)以上實驗室病原檢測結(jié)果，并結(jié)合發(fā)病鴨群臨床癥狀及剖檢病變，診斷該病為鴨1型圓環(huán)病毒與鴨3型腺病毒共感染。

4 討論與體會

1）鴨圓環(huán)病毒是目前已知最小的動物致病性病毒，該病毒最早于2003年在德國鴨群中發(fā)現(xiàn)[1]，傅光華等2008年在我國大陸地區(qū)鴨群中首次檢測到鴨圓環(huán)病毒感染[6]。DuCV已成為威脅我國養(yǎng)鴨業(yè)的重要免疫抑制性疫病之一，可引起鴨生長遲緩、羽毛雜亂斷裂甚至脫落，現(xiàn)已在歐洲、北美及亞洲等地的鴨群中廣泛流行[7]，各地陽性率高低不一，感染的鴨包括半番鴨、番鴨、櫻桃谷鴨等[1-2,6-7]。臨床上該病毒與其他病原共感染現(xiàn)象比較普遍，如DuCV檢測陽性病例，常伴有大腸桿菌、鴨疫里默氏菌、巴氏桿菌或鴨肝炎病毒感染[2]。DuCV包括DuCV-1和DuCV-2兩種基因型[7]，兩種基因型的病毒在臨床上都有流行，且存在不同程度的基因變異。該病例檢測到的鴨圓環(huán)病毒為基因1型，其基因序列與早期鴨1型圓環(huán)病毒分離株的核苷酸序列同源性最高，與鴨2型圓環(huán)病毒MH25毒株的核苷酸序列同源性僅為90.3%，差異較大。鴨圓環(huán)病毒臨床流行毒株的變異為該病的分子生物學(xué)診斷和疫病防控帶來較大挑戰(zhàn)，因此加強該病毒的分子流行病學(xué)監(jiān)測將為實時掌握病毒的變異規(guī)律和制定有效的防控策略提供積極助力。

2）禽腺病毒在家禽中存在較為廣泛，對家禽的健康養(yǎng)殖構(gòu)成了較大威脅。2014年張新衍等[3]從廣東地區(qū)發(fā)現(xiàn)一種感染鴨實質(zhì)性臟器尤其是肝臟腫大，并出現(xiàn)散狀出血的疫病，該病主要在30日齡以內(nèi)番鴨中流行，發(fā)病率20%~50%、病死率40%~60%[8]，經(jīng)血凝試驗、理化試驗、透射電鏡觀察及基因組序列測定及分析，確定該病病原為鴨3型腺病毒。隨后萬春和[4]、程龍飛等[5]先后報道了該病在福建等地的發(fā)生和流行。該病例檢測發(fā)現(xiàn)，擴增獲得的鴨3型腺病毒基因片段與GenBank數(shù)據(jù)庫鴨3型腺病毒FJGT01毒株的核苷酸序列同源性為100%，與鴨2型腺病毒和1型腺病毒的核苷酸序列同源性在66%左右和40%以下。

3）近年來，鴨圓環(huán)病毒及鴨3型腺病毒在番鴨中發(fā)生愈發(fā)頻繁，盡管從檢測結(jié)果表明兩種病毒序列未出現(xiàn)明顯變異，但因這兩種病都還沒有商品化的疫苗進行有效防控，導(dǎo)致在我國番鴨群感染較普遍，尤其出現(xiàn)兩種病共感染時，對番鴨的危害更加突出。因此應(yīng)在做好鴨場生物安全管理的同時，進一步加快這兩種病致病機理及生物學(xué)防治研究，進而研發(fā)出針對這兩種病的特異性生物防疫制劑，盡早建立針對這兩種病的有效生物防控體系。