鴨1型圓環病毒與鴨3型腺病毒共感染的診斷

顏一鳴 王夢鴿 張和陽 黃 瑜 傅光華,3＊

（1.福建省農業科學院畜牧獸醫研究所 福州 350013；2.福建省禽病重點防治實驗室 福州 350013；3.龍巖學院 福建龍巖 364012）

鴨圓環病毒（Duck circovirus，DuCV）是2003年發現的可引起鴨生長不良的病原，該病毒可感染不同日齡和品種鴨，且流行十分廣泛[1]，主要侵害并損傷鴨的免疫系統，導致患鴨免疫功能下降，易遭受其他病原體侵害[2]。鴨3型腺病毒（Duck Adenovirus type 3,DAdV-3）是2015年以來開始在我國出現的一種引起番鴨肝臟出血并死亡的新型鴨腺病毒，發病鴨表現為肝臟腫大，表面有大量出血點和不規則出血斑，腎臟腫大、出血，脾臟腫大、出血，膽囊積液[3-5]。鴨感染鴨圓環病毒表現的臨床癥狀不典型，在臨床病例診斷，尤其是出現其他病原共感染時，極易導致漏診、誤診，從而大大影響治療效果，造成不必要的經濟損失。現將2022年2月福建古田某番鴨養殖場飼養的25日齡番鴨發生DuCV-1與DAdV-3共感染的診斷報道如下。

1 發病情況

該肉鴨場飼養的3 000羽番鴨于19日齡時開始發病，鴨群個體大小不一，部分鴨體況消瘦，羽毛凌亂，發病2 d后開始陸續死亡，采食量明顯下降，排黃白色稀糞，送診時鴨群發病率約為51%，病死率約27%。

2 剖檢病變

剖檢病死雛鴨可見肝臟腫大，表面有大量出血點和不規則出血斑，肝臟呈淡紅色，腎臟腫大、出血，脾臟腫大、出血，膽囊充盈。無菌采集病死鴨肝臟、脾臟、腎臟等臟器進行實驗室檢查。

3 實驗室病原檢測及診斷

將上述采集的組織分成2份，1份用于細菌分離與鑒定，1份用于鴨常見病毒（RT-）PCR檢測。

3.1 細菌分離培養用無菌接種環自肝臟內部挑取適量樣品，劃線接種在LB培養基以及麥康凱瓊脂平板，放置于37℃溫箱內培養48 h后，未見細菌生長。

3.2 病毒檢測將無菌采集的病死鴨肝臟、脾臟及腎臟等臟器剪碎后制備成混懸液，于8 000 r/min離心5 min后取200 uL上清，按照全式金公司的病毒DNA/RNA抽提試劑盒使用說明書提取樣品中的核酸。以獲得的核酸作為模板，開展鴨甲肝病毒、禽坦布蘇病毒、鴨圓環病毒、鴨星狀病毒、水禽細小病毒、鴨3型腺病毒和番鴨呼腸孤病毒等鴨常感染的病毒病核酸檢測。（RT-）PCR擴增產物經1%瓊脂糖凝膠進行電泳觀察結果。

電泳結果發現，應用針對以上7種病毒的(RT-)PCR檢測技術從樣品中檢測到鴨圓環病毒和鴨3型腺病毒（見圖1），其余病原均呈陰性。將擴增產物送福州尚亞生物科技有限公司測序，獲得序列經NCBI blast在線比對發現，所獲得鴨圓環病毒基因片段與GenBank數據庫中鴨1型圓環病毒MH11毒株的核苷酸序列同源性高達98.7%。擴增獲得的鴨3型腺病毒基因片段與GenBank數據庫鴨3型腺病毒FJGT01毒株的核苷酸序列同源性為100%。

圖1 病毒(RT-)PCR擴增產物電泳圖

3.3 診斷 根據以上實驗室病原檢測結果，并結合發病鴨群臨床癥狀及剖檢病變，診斷該病為鴨1型圓環病毒與鴨3型腺病毒共感染。

4 討論與體會

1）鴨圓環病毒是目前已知最小的動物致病性病毒，該病毒最早于2003年在德國鴨群中發現[1]，傅光華等2008年在我國大陸地區鴨群中首次檢測到鴨圓環病毒感染[6]。DuCV已成為威脅我國養鴨業的重要免疫抑制性疫病之一，可引起鴨生長遲緩、羽毛雜亂斷裂甚至脫落，現已在歐洲、北美及亞洲等地的鴨群中廣泛流行[7]，各地陽性率高低不一，感染的鴨包括半番鴨、番鴨、櫻桃谷鴨等[1-2,6-7]。臨床上該病毒與其他病原共感染現象比較普遍，如DuCV檢測陽性病例，常伴有大腸桿菌、鴨疫里默氏菌、巴氏桿菌或鴨肝炎病毒感染[2]。DuCV包括DuCV-1和DuCV-2兩種基因型[7]，兩種基因型的病毒在臨床上都有流行，且存在不同程度的基因變異。該病例檢測到的鴨圓環病毒為基因1型，其基因序列與早期鴨1型圓環病毒分離株的核苷酸序列同源性最高，與鴨2型圓環病毒MH25毒株的核苷酸序列同源性僅為90.3%，差異較大。鴨圓環病毒臨床流行毒株的變異為該病的分子生物學診斷和疫病防控帶來較大挑戰，因此加強該病毒的分子流行病學監測將為實時掌握病毒的變異規律和制定有效的防控策略提供積極助力。

2）禽腺病毒在家禽中存在較為廣泛，對家禽的健康養殖構成了較大威脅。2014年張新衍等[3]從廣東地區發現一種感染鴨實質性臟器尤其是肝臟腫大，并出現散狀出血的疫病，該病主要在30日齡以內番鴨中流行，發病率20%~50%、病死率40%~60%[8]，經血凝試驗、理化試驗、透射電鏡觀察及基因組序列測定及分析，確定該病病原為鴨3型腺病毒。隨后萬春和[4]、程龍飛等[5]先后報道了該病在福建等地的發生和流行。該病例檢測發現，擴增獲得的鴨3型腺病毒基因片段與GenBank數據庫鴨3型腺病毒FJGT01毒株的核苷酸序列同源性為100%，與鴨2型腺病毒和1型腺病毒的核苷酸序列同源性在66%左右和40%以下。

3）近年來，鴨圓環病毒及鴨3型腺病毒在番鴨中發生愈發頻繁，盡管從檢測結果表明兩種病毒序列未出現明顯變異，但因這兩種病都還沒有商品化的疫苗進行有效防控，導致在我國番鴨群感染較普遍，尤其出現兩種病共感染時，對番鴨的危害更加突出。因此應在做好鴨場生物安全管理的同時，進一步加快這兩種病致病機理及生物學防治研究，進而研發出針對這兩種病的特異性生物防疫制劑，盡早建立針對這兩種病的有效生物防控體系。