金蕎麥對(duì)急性潰瘍性腸炎小鼠腸黏膜的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究

韋潤生，鄔劍楠

(湖北省婦幼保健院 急診科，湖北 武漢 430000)

1 材料與方法

1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料

1.2 建模、分組和處理方法

將小鼠飼養(yǎng)在溫度為20～25 ℃、相對(duì)濕度為55%～65%的環(huán)境中，12 h/12 h敏感交替，自由飲食和飲水。將45只小鼠分為對(duì)照組、UC組、UC+金蕎麥片組(每組15只)。根據(jù)文獻(xiàn)[8]，在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后將3%的DSS加入到飲用水中連續(xù)1周來誘導(dǎo)UC急性反應(yīng)。UC+金蕎麥片組小鼠使用金蕎麥片水溶液(32 mg·ml-1)灌胃，劑量為0.02 ml·g-1[9]，每日1次，連續(xù)7 d。

1.3 檢測指標(biāo)和方法

1.3.1 疾病活動(dòng)指數(shù) 觀察各組小鼠體質(zhì)量變化、糞便黏稠度和糞便隱血，每項(xiàng)總分4分，疾病活動(dòng)指數(shù)為3項(xiàng)得分之和，得分越高提示UC越嚴(yán)重。

1.3.2 結(jié)腸長度 小鼠頸椎脫臼后安樂死，取出整段結(jié)腸測量結(jié)腸長度。

1.3.3 HE染色 結(jié)腸組織用10%甲醛溶液固定48 h，流水沖洗。不同濃度的乙醇脫水，然后將組織浸入蠟中，并切成 5 μm 的厚度。將載玻片置于 65 ℃ 恒溫烘箱中30 min。脫蠟水化后染色。細(xì)胞核用蘇木精染色5 min，細(xì)胞質(zhì)用伊紅染色1～2 min。染色切片用純酒精脫水并在顯微鏡下觀察拍照。

1.3.5 腸黏膜通透性的測量 通過尿L和M比值評(píng)估腸黏膜通透性。將300 ml的L和 200 mg的M溶解在20 ml的蒸餾水中,在 12 h的禁食期后灌胃，劑量為1 ml。喂食后1 h，在乙醚麻醉下從海綿竇中取血，使用蜜二糖作為內(nèi)標(biāo)通過高效液相色譜測定L和M的濃度,檢測L和M的濃度,計(jì)算L/M。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 金蕎麥對(duì)UC小鼠疾病活動(dòng)指數(shù)和結(jié)腸長度的影響

UC組疾病活動(dòng)指數(shù)顯著高于對(duì)照組，結(jié)腸長度顯著短于對(duì)照組(P<0.05)。UC+金蕎麥片組疾病活動(dòng)指數(shù)顯著低于UC組，結(jié)腸長度顯著長于UC組(P<0.05)。見圖1、表1。

表1 金蕎麥對(duì)UC小鼠疾病活動(dòng)指數(shù)和結(jié)腸長度的影響

圖1 金蕎麥對(duì)UC小鼠疾結(jié)腸長度的影響

2.2 金蕎麥對(duì)UC小鼠結(jié)腸黏膜損傷的影響

對(duì)照組小鼠結(jié)腸黏膜屏障完整；UC組小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的水腫，結(jié)腸黏膜完整性受損，出現(xiàn)炎性損傷。與UC組比較，UC+金蕎麥片組小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞水腫顯著減輕，結(jié)腸黏膜屏障完整性得到修復(fù)。見圖2。

圖2 HE染色檢測金蕎麥對(duì)UC小鼠結(jié)腸黏膜損傷的影響

2.3 金蕎麥對(duì)UC小鼠結(jié)腸炎癥因子水平的影響

表2 金蕎麥對(duì)UC小鼠結(jié)腸炎癥因子水平的影響

2.4 金蕎麥對(duì)UC小鼠腸黏膜通透性的影響

UC組腸黏膜L/M為3.25±0.38，顯著高于對(duì)照組的0.64±0.07(P<0.05)；而UC+金蕎麥片組腸黏膜L/M為1.79±0.24，顯著低于UC組的3.25±0.38(P<0.05)。

2.5 金蕎麥對(duì)UC小鼠腸黏膜屏障的影響

表3 金蕎麥對(duì)UC小鼠腸黏膜緊密連接蛋白Z 1和Occludin表達(dá)水平的影響

圖3 Western blotting檢測金蕎麥對(duì)UC小鼠結(jié)腸黏膜中緊密連接蛋白Z 1和Occludin表達(dá)水平的影響

2.6 金蕎麥對(duì)UC小鼠結(jié)腸組織I 6和STAT3 mRNA表達(dá)水平的影響

UC組結(jié)腸組織IL- 6和STAT3 mRNA水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，UC+金蕎麥片組結(jié)腸組織IL- 6和STAT3 mRNA水平顯著低于UC組(P<0.05),見表4。

表4 蕎麥對(duì)UC小鼠結(jié)腸組織中I 6和STAT3 mRNA表達(dá)水平的影響

2.7 金蕎麥對(duì)UC小鼠結(jié)腸組織I 6和STAT3 蛋白表達(dá)水平的影響

UC組結(jié)腸組織IL- 6和STAT3蛋白水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，UC+金蕎麥片組結(jié)腸組織IL- 6和STAT3蛋白水平顯著低于UC組(P<0.05)，見圖4和表5。

表5 金蕎麥對(duì)UC小鼠結(jié)腸組織I 6和STAT3 蛋白表達(dá)水平的影響

圖4 Western blotting檢測金蕎麥對(duì)UC小鼠結(jié)腸組織I 6和STAT3 蛋白表達(dá)水平的影響

3 討 論

目前UC的病因和發(fā)病機(jī)制仍不確定，遺傳易感性、黏膜免疫系統(tǒng)失調(diào)、腸道微生物群失調(diào)和飲食習(xí)慣等因素是UC發(fā)展的重要因素[10]。目前UC的治療主要采取服用氨基水楊酸、皮質(zhì)類固醇、免疫抑制劑和生物制劑，重度難治UC需要手術(shù)治療[11]。由于藥物無效、藥物依賴、不良反應(yīng)，仍有一部分患者長期遭受UC困擾[12]。因此，為UC尋找新的治療方法和藥物極為重要。