黑曲霉拮抗細(xì)菌的篩選、鑒定和生防條件優(yōu)化

徐曉裕，李 甜，史學(xué)偉，王 斌

（石河子大學(xué)食品學(xué)院，新疆石河子 832000）

霉菌侵染是引起葡萄采后霉變腐爛的主要原因[1?2]。作為世界范圍內(nèi)的果蔬生產(chǎn)大國(guó)，我國(guó)每年有近8500 萬(wàn)噸果蔬因保鮮技術(shù)和設(shè)備的落后而腐爛變質(zhì)，腐爛率高達(dá)20%～30%，給我國(guó)果蔬產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3?4]。因此，在果蔬儲(chǔ)存運(yùn)輸過(guò)程中采取一些有效的防治手段來(lái)延緩腐敗變質(zhì)就顯得尤為重要。葡萄在運(yùn)輸、貯藏等過(guò)程中的擠壓及機(jī)械傷口就極易引起黑曲霉（Aspergillus niger）的感染，即黑粉病，導(dǎo)致葡萄果實(shí)失去食用和商品價(jià)值[5?6]。長(zhǎng)期以來(lái)，使用化學(xué)殺菌劑來(lái)防止果蔬的腐敗變質(zhì)一直被認(rèn)為是最有效的方法，但是該方法存在著農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染和病原菌抗藥性等諸多弊端，迫切需要新的安全方法來(lái)取而代之。因此，生物防治應(yīng)運(yùn)而生。生物防治是指選擇對(duì)產(chǎn)品及人體不造成危害的微生物，利用微生物之間的拮抗作用來(lái)抑制病原菌生長(zhǎng)的一種有效防治采后病害的新途徑。

在微生物生命活動(dòng)過(guò)程中，通過(guò)產(chǎn)生某種拮抗物質(zhì)或改變自身的生長(zhǎng)環(huán)境，達(dá)到阻礙其他微生物增殖的目的，人們將這類微生物統(tǒng)稱為拮抗微生物[7?8]。目前，有研究發(fā)現(xiàn)勞倫隱球菌（Cryptococcus laurenii）對(duì)蘋(píng)果采后灰霉病、梨的灰霉病和青霉病具有顯著的防治效果[9?10]。高抗甜瓜品種內(nèi)分離的枯草芽胞桿（Bacillus subtilis）Mg15 對(duì)甜瓜白粉病具有顯著防治效果[11]。葡萄園篩選的枯草芽孢桿菌對(duì)釀酒葡萄灰霉病具有良好抑制作用[12]。尋找到有效的拮抗菌株是防治果蔬采后病害的一種高效、環(huán)保、經(jīng)濟(jì)的方法，用生物防治技術(shù)取代傳統(tǒng)的化學(xué)藥物防治也是目前果蔬病害防治的研究熱點(diǎn)[6,13?14]。雖然有研究表明黑粉病是葡萄貯藏過(guò)程中產(chǎn)生的主要病害[15]，但目前關(guān)于生物防治黑粉病的報(bào)道還很少。本文旨在通過(guò)從新疆葡萄土壤中分離篩選獲得對(duì)黑曲霉具有抑制作用的拮抗細(xì)菌，明確拮抗菌株產(chǎn)抑菌活性物質(zhì)的最佳培養(yǎng)條件，以期為由黑曲霉引起采后病害的生物防治提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

黑曲霉（Aspergillus niger）從瑪納斯中信國(guó)安葡萄園中的葡萄表皮分離，現(xiàn)保存于石河子大學(xué)食品學(xué)院葡萄與葡萄酒工程中心實(shí)驗(yàn)室；馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基 北京陸橋生物技術(shù)有限公司；酵母膏胨葡萄糖（YPD）、瓊脂培養(yǎng)基（葡萄糖20 g/L、酵母膏10 g/L、蛋白胨20 g/L、瓊脂20g/L）、LB 培養(yǎng)基（胰蛋白胨10 g/L、酵母浸粉5 g/L、氯化鈉10 g/L）北京奧博星責(zé)任有限公司。

MLS-3750 型高壓滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠；FX-2000FO 電子天平 濟(jì)南歐萊博科學(xué)儀器有限公司；FE20 基礎(chǔ)型 pH 計(jì) 上海一恒科學(xué)儀器有限公司；SW-CJ 超凈工作臺(tái) 美國(guó)伯騰儀器有限公司；CX41RF 光學(xué)顯微鏡 深圳市華顯光學(xué)儀器有限公司；DNP-9272 型恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集 用五點(diǎn)取樣法在瑪納斯中信國(guó)安的葡萄園中采取土壤樣品，裝入50 mL 無(wú)菌離心管中，儲(chǔ)存于4 ℃冰箱備用。

1.2.2 拮抗菌的分離及篩選 采用平板稀釋涂布法在LB 固體培養(yǎng)基上對(duì)土壤樣品中的細(xì)菌進(jìn)行分離，30 ℃培養(yǎng)2 d，并挑取不同形態(tài)的單菌落采用平板劃線法純化并編號(hào)保存?zhèn)溆谩?/p>

以黑曲霉為指示菌，采用平板對(duì)峙法篩選拮抗細(xì)菌。抑菌直徑（mm）=測(cè)量菌落直徑（mm）-菌餅直徑（mm），每個(gè)處理做三個(gè)平行[16]。

1.2.3 拮抗菌活體抑菌實(shí)驗(yàn) 選取新鮮無(wú)病害九成熟的鮮食葡萄，用體積分?jǐn)?shù)為75%乙醇噴灑表面，并用無(wú)菌水清洗3 次后取出、晾干后用作反接實(shí)驗(yàn)。用滅菌牙簽挑取純化好的黑曲霉菌絲在葡萄果實(shí)腰部穿刺，并同時(shí)接入濃度為107CFU/mL 濃度的拮抗菌懸液，僅接入黑曲霉菌絲的葡萄果實(shí)作為對(duì)照，常溫保存5 d，觀察防治效果[17]。

1.2.4 拮抗菌的鑒定 形態(tài)學(xué)和生理生化實(shí)驗(yàn)：將拮抗菌株接種于LB 固體培養(yǎng)基上，30 ℃培養(yǎng)2 d 后觀察菌落的大小、顏色和質(zhì)地，表面及邊緣的形狀等菌落特征；再采用革蘭氏染色法對(duì)其進(jìn)行染色，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)一步觀察其染色情況和形態(tài)。依據(jù)《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》中芽孢桿菌屬內(nèi)特征進(jìn)行生理生化鑒定[18?19]。

分子生物學(xué)：使用OMEGA 細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒對(duì)菌株的DNA 進(jìn)行提取，利用細(xì)菌通用引物27F（5′-AGAGTTTGA TCA TGGCTCAG-3′）和1492F（5′-AAGGAGGTGA TCCAACCGCA-3′）進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。將所有提取的DNA 樣品發(fā)送到Sangon Biotech 公司（中國(guó)上海）進(jìn)行PCR 的擴(kuò)增和產(chǎn)物測(cè)序。然后將測(cè)序所得的16S rDNA 測(cè)序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST 序列比對(duì)分析以明確該菌株的種屬關(guān)系，并使用MEGA-X 軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)[20]。

1.2.5 菌株生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 用接種環(huán)刮取活化好的單菌落接種于裝有60 mL LB 液體培養(yǎng)基的250 mL錐形瓶中，培養(yǎng)溫度為30 ℃，160 r/min 的搖床培養(yǎng)，每隔2 h 取樣并在OD600nm下測(cè)定吸光度值。

1.2.6 發(fā)酵條件的優(yōu)化

1.2.6.1 裝液量對(duì)拮抗菌株發(fā)酵液抑菌活性的影響將拮抗菌的種子液以3%的接種量接種于含有40、60、80、100、120 mL LB 液體培養(yǎng)基的250 mL錐形瓶中，pH 為7，轉(zhuǎn)速設(shè)置為160 r/min，置于30 ℃的條件下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)30 h 后，取樣并測(cè)定發(fā)酵液的抑菌活性（方法同1.2.2），每個(gè)處理做三個(gè)平行。

1.2.6.2 接種量對(duì)拮抗菌株發(fā)酵液抑菌活性的影響將拮抗菌的種子液分別以1%、2%、3%、4%、5%的接種量接種于含有60 mL LB 液體培養(yǎng)基的250 mL 錐形瓶中，pH 為7，轉(zhuǎn)速設(shè)置為160 r/min，置于30 ℃的條件下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)30 h 后，取樣并測(cè)定發(fā)酵液的抑菌活性，每個(gè)處理做三個(gè)平行。

1.2.6.3 培養(yǎng)溫度對(duì)拮抗菌株發(fā)酵液抑菌活性的影響 將拮抗菌的種子液以3%的接種量接種于含有60 mL LB 液體培養(yǎng)基的250 mL 錐形瓶中，pH 為7，轉(zhuǎn)速設(shè)置為160 r/min，分別置于20、25、30、35、40 ℃的條件下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)30 h 后，取樣并測(cè)定發(fā)酵液的抑菌活性，每個(gè)處理做三個(gè)平行。

1.2.6.4 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)拮抗菌株發(fā)酵液抑菌活性的影響 將拮抗菌的種子液以3%的接種量接種于含有60 mL LB 液體培養(yǎng)基的250 mL 錐形瓶中，pH 為7，轉(zhuǎn)速設(shè)置為160 r/min，置于30 ℃的條件下進(jìn)行恒溫振蕩，分別培養(yǎng)20、25、30、35、40、45、50 h后，取樣并測(cè)定發(fā)酵液的抑菌活性，每個(gè)處理做三個(gè)平行。

1.2.6.5 初始pH 對(duì)拮抗菌株發(fā)酵液抑菌活性的影響將拮抗菌的種子液以3%的接種量接種于含有60 mL LB 液體培養(yǎng)基的250 mL 錐形瓶中，pH 分別設(shè)定為5、6、7、8、9，轉(zhuǎn)速設(shè)置為160 r/min，置于30 ℃的條件下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)30 h 后，取樣并測(cè)定發(fā)酵液的抑菌活性，每個(gè)處理做三個(gè)平行。

1.2.6.6 轉(zhuǎn)速對(duì)拮抗菌株發(fā)酵液抑菌活性的影響將拮抗菌的種子液以3%的接種量接種于含有60 mL LB 液體培養(yǎng)基的250 mL 錐形瓶中，pH 為7，轉(zhuǎn)速分別設(shè)置為100、120、140、160、180、200、220 r/min，置于30 ℃的條件下進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)30 h 后，取樣并測(cè)定發(fā)酵液的抑菌活性，每個(gè)處理做三個(gè)平行。

1.2.7 正交試驗(yàn) 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取三個(gè)對(duì)抑菌效果影響顯著的因素設(shè)計(jì)L9（34）正交試驗(yàn)（表1），確定最佳的培養(yǎng)條件。

表1 L9（34）正交試驗(yàn)因素及水平Table 1 L9 (33) orthogonal experiment factors and levels

1.2.8 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 采用確定的最佳培養(yǎng)條件對(duì)菌株的抑菌直徑進(jìn)行測(cè)量，驗(yàn)證其抑菌效果。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和差異顯著性檢驗(yàn)（P＜0.05），采用Minitab 14.0 進(jìn)行單因素和正交試驗(yàn)方差分析，利用origin 2021 軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 拮抗細(xì)菌的分離

從采集到的土壤上共分離獲得60 株細(xì)菌，14 株細(xì)菌對(duì)黑曲霉具有拮抗作用（表2），其中，G8 的抑菌直徑最大，達(dá)28.19 mm（圖1）。

圖1 G8 對(duì)黑曲霉的拮抗效果Fig.1 The antagonistic effect of G8 on Aspergillus niger

表2 葡萄園土壤拮抗細(xì)菌的篩選Table 2 Screening of antagonistic bacteria in vineyard soil

拮抗菌株對(duì)黑曲霉的防治效果如圖2 所示。未接入拮抗菌株的葡萄果實(shí)發(fā)生腐爛及褐變，接入拮抗菌株的G8 對(duì)于黑曲霉有明顯的抑菌效果。接種該菌株的葡萄果實(shí)均沒(méi)有發(fā)生明顯的黑粉病癥狀。這可能是由于接種的拮抗細(xì)菌迅速繁殖，同時(shí)與黑曲霉競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)與生存空間，導(dǎo)致病原菌失去營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生存空間，無(wú)法生長(zhǎng)繁殖以及產(chǎn)生有毒物質(zhì)，從而抑制了病害的發(fā)生[21]。

圖2 拮抗菌G8 對(duì)黑曲霉的活體拮抗效果Fig.2 The antagonistic effect of antagonistic antibacterial G8 on Aspergillus niger in vivo

2.2 拮抗細(xì)菌的鑒定

2.2.1 形態(tài)特征 菌株G8 在LB 固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落呈現(xiàn)乳白色，表面稍微隆起，較為粗糙，不透明；經(jīng)革蘭氏染色后呈紫色，桿狀（圖3）。

圖3 菌株G8 形態(tài)學(xué)特征Fig.3 Morphological characteristics of strain G8

2.2.2 生理生化特征測(cè)定 菌株G8 的生理生化特征顯示，該菌株可以利用葡萄糖、木聚糖、山梨醇、果糖、麥芽糖、淀粉、甘露醇等碳源進(jìn)行生長(zhǎng)，并能水解淀粉和明膠，還原硝酸鹽。接觸酶實(shí)驗(yàn)、葡萄糖產(chǎn)氣實(shí)驗(yàn)、甲基紅實(shí)驗(yàn)和脲酶實(shí)驗(yàn)均呈陽(yáng)性，能夠利用丙二酸鹽（表3）。結(jié)合形態(tài)特征和生理生化特征[22]，菌株G8 符合暹羅芽孢桿菌的特性。

表3 菌株G8 的生理生化特征Table 3 Physiological and biochemical characteristics of strain G8

2.2.3 分子生物學(xué)鑒定 將G8 菌株16S rDNA 擴(kuò)增產(chǎn)物送至生工（上海）有限公司測(cè)序，將測(cè)序獲得的序列與Genbank 中序列進(jìn)行比對(duì)，并用Neighbor-Joining 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。基于16S rDNA 系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果顯示（如圖4），菌株G8 與暹羅芽孢桿菌的親緣關(guān)系最近，處于系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的同一分枝。結(jié)合形態(tài)學(xué)與生理生化特征，確定菌株G8 為暹羅芽孢桿菌（Bacillus siamensis）。

圖4 G8 菌株基于16S rDNA 的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.4 Phylogenetic tree of G8 strain based on 16S rDNA

2.3 拮抗菌G8 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

菌株G8 的生長(zhǎng)曲線如圖5 所示。菌株G8 延緩期為4 h，在4～22 h 處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，菌體代謝旺盛，繁殖速度快，24 h 后菌株的生物量逐漸趨于穩(wěn)定。但隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，菌株在40 h 之后進(jìn)入衰亡期。

圖5 菌株G8 的生長(zhǎng)曲線Fig.5 Growth curve of strain G8

2.4 菌株G8 發(fā)酵條件的優(yōu)化

2.4.1 裝液量的影響 由圖6 可知，不同裝液量對(duì)抑菌效果的影響很小。當(dāng)裝液量為60 mL/250 mL 時(shí)菌株G8 有較大的抑菌直徑，為28.26 mm。方差結(jié)果顯示，不同裝液量對(duì)抑菌效果的影響并不顯著（P＞0.05），故不選擇裝液量作為后續(xù)影響抑菌效果的考察因素。

圖6 不同裝液量對(duì)抑菌效果的影響Fig.6 The influence of different liquid volume on theantibacterial effect

2.4.2 接種量的影響 由圖7 可知，不同的接種量對(duì)菌株的抑菌效果的影響很小。當(dāng)接種量為3%時(shí)，抑菌直徑較高，但方差結(jié)果顯示不同接種量對(duì)抑菌效果的影響不顯著（P＞0.05），這可能是由于抗菌物質(zhì)是菌體生長(zhǎng)到一定階段，為適應(yīng)環(huán)境變化而產(chǎn)生的，它的合成是受菌體細(xì)胞群體感應(yīng)調(diào)節(jié)的[23]。雖然試驗(yàn)最開(kāi)始采用了不同的接種量，但是在發(fā)酵24 h 后，各處理菌體生物量基本一致，抗菌肽的活性差異不大，抑菌效果也基本一致。鑒于此，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中固定接種量為3%。

圖7 不同接種量對(duì)抑菌效果的影響Fig.7 The effect of different inoculum on the antibacterial effect

2.4.3 培養(yǎng)溫度的影響 由圖8 可知，不同溫度對(duì)菌株的抑菌效果差異顯著（P＜0.05）。隨著溫度的上升，抑菌直徑呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)。培養(yǎng)溫度對(duì)菌體細(xì)胞中的酶、蛋白質(zhì)、DNA 等大分子的合成與活性會(huì)產(chǎn)生一定的影響，培養(yǎng)溫度較最適溫度高或低，生長(zhǎng)速率都會(huì)隨之下降[24]。當(dāng)培養(yǎng)溫度為30 ℃時(shí)，菌株G8 有最大的抑菌直徑（28.62 mm）。因此，確定菌株最適生長(zhǎng)溫度為30 ℃，并選擇其作為下一步正交試驗(yàn)的中心試驗(yàn)點(diǎn)。

圖8 不同培養(yǎng)溫度對(duì)抑菌效果的影響Fig.8 The influence of different culture temperatures on the antibacterial effect

2.4.4 培養(yǎng)時(shí)間的影響 由圖9 可知，菌株在20 h已經(jīng)開(kāi)始產(chǎn)生了抑菌物質(zhì)，并隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，抗菌活性物質(zhì)的產(chǎn)量逐漸增大。當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間達(dá)到30 h 時(shí)，菌株G8 的抑菌直徑最大（28.64 mm）。但當(dāng)菌株生長(zhǎng)到一定時(shí)間時(shí)，抗菌活性物質(zhì)的產(chǎn)量逐漸降低。這可能是由于菌株在生長(zhǎng)后期，會(huì)發(fā)生自溶現(xiàn)象，并釋放如蛋白酶、脂肪酶等次級(jí)代謝產(chǎn)物降解了部分抗菌活性物質(zhì)[25?26]。方差分析結(jié)果顯示不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌株的抑菌效果有顯著影響（P＜0.05）。因此，確定菌株適宜培養(yǎng)時(shí)間為30 h，并選擇其作為下一步正交試驗(yàn)的中心試驗(yàn)點(diǎn)。

圖9 不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)抑菌效果的影響Fig.9 The influence of different culture time on the antibacterial effect

2.4.5 初始pH 的影響 由圖10 可知，不同初始pH對(duì)菌株的抑菌效果影響較為顯著（P＜0.05）。當(dāng)發(fā)酵pH 在5～7 時(shí)，菌株G8 的抑菌效果逐漸增加。當(dāng)pH為7 時(shí)，菌株G8 表現(xiàn)出最大的抑菌直徑（28.34 mm）。當(dāng)后續(xù)pH 持續(xù)增加時(shí)，抑菌效果呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，這可能由于不同的酸或堿性條件影響了菌體的生長(zhǎng)以及次級(jí)代謝產(chǎn)物的分泌[27]。因此，確定菌株G8產(chǎn)生最好抑菌效果的初始pH 為7，并選擇其作為下一步正交試驗(yàn)的中心試驗(yàn)點(diǎn)。

圖10 不同初始pH 對(duì)抑菌效果的影響Fig.10 The effect of different initial pH on the antibacterial effect

2.4.6 轉(zhuǎn)速的影響 由圖11 可知，轉(zhuǎn)速為140、160、180 r/min 時(shí)對(duì)菌株G8 抑菌效果的影響并不顯著（P＞0.05）。轉(zhuǎn)速不斷升高時(shí)，菌株的抑菌效果逐漸增強(qiáng)。當(dāng)轉(zhuǎn)速為160 r/min 時(shí)，菌株的抑菌直徑達(dá)到了最大值。然而，隨著轉(zhuǎn)速的不斷升高，菌株的抑菌效果不斷下降。因此，確定菌株的產(chǎn)生最優(yōu)抑菌效果的轉(zhuǎn)速為160 r/min。

圖11 不同轉(zhuǎn)速對(duì)抑菌效果的影響Fig.11 The influence of different speeds on the antibacterial effect

2.5 正交試驗(yàn)優(yōu)化

菌株G8 在發(fā)酵條件正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)各處理中產(chǎn)生的抑菌效果如表4 所示。R 絕對(duì)值大小代表不同因素對(duì)菌體產(chǎn)生抑菌效果的影響程度，R 值越大，說(shuō)明該因素影響程度越大。因此可以從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以看出這三個(gè)因素對(duì)抑菌效果的影響大小順序?yàn)榕囵B(yǎng)時(shí)間＞ pH＞培養(yǎng)溫度。經(jīng)數(shù)據(jù)分析可得到最優(yōu)的發(fā)酵條件培養(yǎng)參數(shù)為B3C2A3，即培養(yǎng)時(shí)間為33 h，pH 為7，培養(yǎng)溫度為33 ℃。

表4 正交試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Orthogonal experiment results

2.6 發(fā)酵條件優(yōu)化后的抑菌效果測(cè)定

使用優(yōu)化后的發(fā)酵條件對(duì)菌株G8 進(jìn)行培養(yǎng)，即裝液量為60 mL/250 mL，接種量為3%，培養(yǎng)溫度為33 ℃，pH 為7，轉(zhuǎn)速為160 r/min 的條件下培養(yǎng)33 h，得到的發(fā)酵液對(duì)黑曲霉的抑菌直徑達(dá)到了28.79 mm。

3 結(jié)論

本研究從新疆葡萄園土壤中共篩選出14 株對(duì)黑曲霉有抑菌效果的拮抗細(xì)菌，其中菌株G8 對(duì)黑曲霉的抑菌效果最佳。經(jīng)鑒定，菌株G8 為暹羅芽孢桿菌（Bacillus siamensis）。在常溫下，暹羅芽孢桿菌能顯著降低黑曲霉引起的病害問(wèn)題，有效抑制葡萄果實(shí)霉變。其產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)最適的生長(zhǎng)條件為：裝液量為60 mL/250 mL、培養(yǎng)溫度為33 ℃、培養(yǎng)時(shí)間為33 h、接種量3%、pH7、轉(zhuǎn)速為160 r/min。上述研究結(jié)果將為暹羅芽孢桿菌在黑曲霉采后病害的生物防治應(yīng)用方面提供理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)室將進(jìn)一步對(duì)暹羅芽孢桿菌G8 所產(chǎn)抗菌物質(zhì)的純化、鑒定與抑菌機(jī)制等進(jìn)行深入研究。