黑靈芝多糖聯合rhGH 對患者受損小腸黏膜中PCNA、Musashi-1 表達的影響

謝小龍 張銳利 李揚 楊磊磊 于吉人▲

1.浙江大學醫學院，浙江杭州 310003；2.浙江大學醫學院附屬第一醫院胃腸外科，浙江杭州 310003；3.浙江省臺州醫院胃腸外科，浙江臺州 317000

非甾體類抗炎藥在炎性類疾病、心血管、風濕類疾病治療中廣泛應用，但隨著藥物使用比例增加，其不良反應發生率隨之升高，對患者預后造成影響，故如何緩解非甾體類抗炎藥所致的腸道不良反應已成為臨床亟待解決的問題。目前，臨床尚未明確非甾體類抗炎藥致使小腸黏膜損傷的具體機制，但有學者指出長期服用非甾體抗炎藥可抑制前列腺素合成，從而造成小腸黏膜損傷。研究表明，生長激素可促進腸絨毛生長、修復，改善腸黏膜損傷情況。而以黑靈芝為原料的黑靈芝多糖可對腸道黏膜屏障損傷及腸道黏膜免疫產生保護作用，但臨床鮮有黑靈芝多糖聯合重組人生長激素（rhGH）治療小腸黏膜損傷的相關報道。基于此，本文采用黑靈芝多糖聯合rhGH 對非甾體抗炎藥所致的小腸黏膜損傷患者進行治療，研究其對增殖細胞核抗原（PCNA）、上皮干細胞標記物（Musashi-1）表達的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象：隨機選取2019 年9 月～2020 年9 月于浙江省臺州醫院、浙江大學醫學院附屬第一醫院就診的117 例小腸黏膜損傷患者。納入標準：①符合《中國食管良惡性狹窄內鏡下防治專家共識意見（2020，北京）》中腸黏膜損傷相關診斷標準；②服用阿司匹林（100 mg/d）時間＞1 個月；③內鏡檢查確診。排除標準：①心、腎等臟器功能障礙者；②吞咽困難者；③已知或懷疑消化道梗阻、瘺管、狹窄者；④安裝心臟起搏器或體內存在金屬植入物，不能耐受磁控膠囊內鏡檢查者；⑤C 尿素呼氣試驗呈陽性者；⑥同時使用其他非甾類抗炎藥者。按隨機數字表法將患者分為兩組。rhGH 組（n=58）男31 例、女27 例，平均年齡（41.50±19.12）歲，36 例患者至少1 處糜爛和/或潰瘍，22 例患者較大糜爛和/或潰瘍；聯合組（n=59）男30 例、女29例，平均年齡（42.50±20.82）歲，39 例患者至少1 處糜爛和/或潰瘍，20 例患者較大糜爛和/或潰瘍。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已獲得浙江大學醫學院附屬第一醫院醫學倫理委員會批準[批準文號（2020）倫審第（41）號]，患者及家屬知情并簽署同意書。

1.2 方法

rhGH 組：給予所有患者禁食、胃腸減 壓、糾正酸堿及水電解質平衡等常規綜合治療方案。后采用重組人生長激素凍干粉粉針劑（長春金賽藥業有限公司）治療，使用劑量按照8 IU/次，皮下注射，1 次/d，持續用藥1 周。聯合組：在rhGH 組基礎上輔以黑靈芝多糖（北京同仁堂陜西藥業有效公司）治療，2 粒/次，溫水送服，2 次/d。兩組均連續用藥1 周。

1.3 檢測指標及評價標準

1.3.1 膠囊內鏡檢查 利用AKC-1 巡航膠囊內窺鏡系統（上海安翰醫療技術有限公司）對受試者進行膠囊內鏡檢查，膠囊內鏡大小27.0 mm×11.8 mm，拍攝幀率1～2 幀/s，具有自動變頻、體外磁控、體外掃描定位特點。獲取檢查服中數據導入電腦，利用ESNavi 軟件對獲取圖像進行觀察分析，由2 名經驗豐富的內鏡醫師進行閱片，確定小腸黏膜潰瘍/糜爛部位。

1.3.2 腸黏膜屏障 于治療前、治療后7 d 通過胃鏡（上海醫光儀器有限公司）利用活檢鉗鉗取2 處包括黏膜全層及部分黏膜下層的十二指腸降段黏膜標本，用CMIAs 系列多功能真彩色病理圖像分析系統分析。每個標本分別取3 個位置測量小腸黏膜絨毛高度、陷窩深度，取平均值。

1.3.3 血清指標檢測 分別于入院當日、治療后7 d 抽取患者空腹靜脈血5 ml，離心處理，分離上清于EP試管內，-20℃下保存待檢。雙抗夾心ELISA 法檢測DAO、BT、IL-6、IL-8 水平，免疫組化法檢測PCNA、Musashi-1 表達。

1.3.4 療效評估 顯效：腸鏡顯示黏膜基本恢復正常，無明顯糜爛，潰瘍面全部愈合；有效：腸鏡顯示腸黏膜輕度炎癥或見假息肉形成；無效：未達上述標準甚至加重。總有效率（%）=（顯效+有效）例數/總例數×100%。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 兩組患者腸黏膜指標變化比較

治療前，兩組患者腸黏膜指標變化比較，差異無統計學意義（均P＞0.05）；治療后，與rhGH 組比較，聯合組小腸黏膜絨毛高度較高，陷窩深度、DAO、BT 水平較低，差異有統計學意義（均P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者腸黏膜指標變化比較（）

2.2 兩組患者血清PCNA、Musashi-1 表達比較

兩組治療前PCNA、Musashi-1 表達比較，差異無統計學意義（均P＞0.05）；治療后，聯合組PCNA、Musashi-1 表達高于rhGH 組，差異有統計學意義（均P＜0.05）。見表2、封三圖1。

表2 兩組患者血清PCNA、Musashi-1 表達比較（）

2.3 兩組患者炎癥因子水平比較

兩組治療前血清IL-6、IL-8 水平比較，差異無統計學意義（均P＞0.05）；治療后，聯合組血清IL-6、IL-8 水平低于rhGH 組，差異有統計學意義（均P＜0.05）。見表3。

表3 兩組患者炎癥因子水平比較（ng/ml，）

2.4 兩組患者療效評估

聯合組治療有效率為94.91%，高于rhGH 組的82.75%，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

臨床實踐表明，在長期服用非甾體類抗炎藥人群中，小腸黏膜損傷發生率可達70%，但目前臨床治療尚缺乏有效防止非甾體類抗炎藥相關小腸黏膜損傷的藥物，嚴重威脅患者健康。

本研究指出，黑靈芝多糖聯合rhGH 治療小腸黏膜損傷患者可對腸黏膜屏障功能產生保護，從而減輕損傷程度。在應激、感染等特殊狀態下，腸黏膜屏障受到損傷導致腸道細菌移位，最終引起免疫功能紊亂。相關實驗rhGH 在改善腸道通透性方面發揮良好作用，促進腸黏膜屏障功能恢復，療效顯著。黑靈芝多糖在腸道黏膜損傷動物致炎中被證實可促進隱窩底部干細胞分化，增加絨毛表面黏液分泌量，以促進小腸黏膜屏障修復。本研究結果表明，黑靈芝多糖聯合rhGH 能夠保護小腸黏膜損傷患者小腸絨毛結構完整性，改善腸黏膜屏障功能。此結果提示，非甾體類抗炎藥所致小腸黏膜損傷患者的腸黏膜屏障功能多因通透性增加而受到破壞。形成這一結果的原因可能與rhGH可減少毛細血管外滲、降低胃腸通透性作用相關。

資料表明，腸黏膜損傷發生時，主要通過檢測PCNA 表達對腸上皮細胞發生增殖和自我修復情況進行評估。正常狀態下，干細胞多處于靜止狀態，PCNA 表達相對較弱。當腸黏膜損傷后，腸上皮干細胞激活進入分裂狀態，導致PCNA 表達增加。同時Musashi-1 與小腸RNA 相結合標記干細胞。IL-6、IL-8 作為臨床常用炎癥因子，其高水平表達可對炎癥反應發生產生推動作用，導致黏膜通透性增加。本研究顯示，黑靈芝多糖聯合rhGH 治療小腸黏膜損傷患者，PCNA、Musashi-1 表達增加，提示上述聯合治療方案可改善細胞上皮干細胞增殖情況，促進疾病轉歸。同時研究中對小腸黏膜損傷相關炎癥因子水平進行分析發現，黑靈芝多糖、rhGH 聯合治療小腸黏膜損傷可抑制機體炎癥反應，有助于腸黏膜損傷修復，表明藥物聯合可有效改善黏膜通透性，減輕腸黏膜損傷，療效確切。

綜上所述，黑靈芝多糖、rhGH 聯合治療有效改善小腸黏膜損傷患者的臨床療效，有效維持腸黏膜機械屏障穩定性，減輕腸黏膜損傷，增加PCNA、Musashi-1表達，抑制炎癥反應，促進疾病轉歸。