松黃和野菊花及其聯合應用對小鼠血糖及血脂的影響

趙士博 吳忠港 鄭淮遠 潘智 李昊陽 鄧鵬鈺 韋雪海 黃鎖義

(右江民族醫學院 1臨床醫學院，廣西 百色 533000；2護理學院；3藥學院；4廣西高校右江流域特色民族藥研究重點實驗室)

松黃即松花粉，松科植物馬尾松等松屬植物的精細胞，是中國藥食兩用的傳統中草藥〔1〕。松黃味甘、性溫、無毒，兼具益氣除風、生肌止血等多種藥理功效，對血糖的降低有奇效〔2〕。野菊花是菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L．的干燥花序，性味苦辛、微寒，具有抗菌解熱、保肝、抗腫瘤、神經保護等藥理作用〔3〕。本實驗研究松黃和野菊花醇提取物對四氧嘧啶誘導的糖尿病小鼠體重、食欲、血糖及肝功能的影響。

1 材料與方法

1.1動物 SPF級昆明種小鼠，雌雄參半，體重(20±2)g，周齡不詳，由右江民族醫學院實驗動物中心提供，許可證號:SCXK桂2012-0003。

1.2藥品 藥材松黃和野菊花由右江民族醫學院科學實驗中心主任黃鎖義教授鑒定為松科植物松屬喬木馬尾松Pinus massoniana Lamb.的干燥花粉和菊科植物野菊Chrysanthemum indicum的干燥頭狀花序。鹽酸二甲雙胍片，規格:每片 0.25 g，批號:180627，北京京豐制藥集團有限公司；四氧嘧啶，規格：5 g/瓶。批號:227A021，北京索萊寶科技有限公司。

1.3儀器與耗材 安穩+血糖儀(三諾生物傳感股份有限公司)；TWCL-T 5000磁力攪拌器(上海標和儀器有限公司)；DLSB-5低溫冷卻液循環泵(鄭州長城科工貿有限公司)；JSC電子天平秤CN-BH(福州科迪電子技術有限公司)；FA1204B電子天平(上海精科天美儀器有限公司)；JMF-320G多級閃蒸器(河南智晶生物科技股份有限公司)；TH-UP-10實驗室專用超純水機(山東滕海分析儀器有限公司)；清潔級實驗鼠維持飼料(江蘇省協同醫藥生物工程有限責任公司)。

1.4四氧嘧啶誘導糖尿病小鼠模型的建立 參照文獻〔4〕方法，禁食16 h后，將四氧嘧啶一水合物溶解在0.9%氯化鈉溶液中，通過腹腔注射150 mg/kg體重的四氧嘧啶進行造模，24 h注射1次，共3次。誘導3 d后進行篩選。選擇3 d后血糖控制在200 mg/dl及以上的小鼠進行本研究。空白對照組普通飼料喂養，不建模。腹腔注射四氧嘧啶幾小時內，個別小鼠會出現低血糖反應，以致死亡。模型小鼠出現消瘦、皮毛光澤降低及活動減少，同時鼠籠墊料臟濕加速等現象出現。以上變化符合糖尿病病癥中的“三多一少”(多飲、多食、多尿及體重減少)的特征，提示造模成功。分組時逐一測定小鼠空腹血糖，各組小鼠的平均血糖值相差應小于20 mg/dl，血糖值升高不符合要求的動物予以剔除。

1.5動物分組與給藥 試驗采用隨機數字表法并用5%苦味酸標記分為7個組，即空白對照組，陽性對照組，松黃組，野菊花組，松花和野菊花1∶1配比低、中、高3個劑量(低、中、高劑量)組。依照雌雄1∶1分籠并隨機分配，每組10只。陽性對照組灌胃12.5 mg/kg鹽酸二甲雙胍溶液。兩種中藥提取物分別配制成1.5、4.5、7.5 mg/ml 3種濃度的藥液，分別對應配伍組低、中、高3個實驗組。

實驗動物經1 w適應性喂養后逐一測定體重。為保證灌胃劑量的準確與實驗操作的嚴謹，實驗期間每3 d測定一次體重。實驗中各組均按體重20 ml/kg給予對應藥液，空白對照組按等體積給予0.9%生理鹽水，共給藥14 d。采用24 h灌胃原則，本實驗遵守動物實驗倫理要求。

1.6藥物提取 參照文獻中〔5〕松黃的乙醇提取方法，稱取2 kg松黃用10倍體積的乙醇超聲提取3次，合并濾液進行閃蒸濃縮與冷凍干燥，得到藥物干燥粉末，用純水配成生藥量為1 g/ml的溶液。野菊花2 kg粉碎，過60目篩，按料液比1∶100加入乙醇，浸泡30 min〔6〕，80℃恒溫加熱，回流2 h，提取3次，合并提取液，蒸發濃縮得提取物浸膏并配制成生藥量為1 g/ml的藥液。兩種藥物均于4℃冰箱保存。

1.7實驗指標 檢測小鼠體重變化，用快速血糖儀測定小鼠空腹血糖值，用生化分析儀檢測樣本中血清谷丙轉氨酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、總膽固醇(TC)及三酰甘油(TG)含量。頸椎脫臼處死小鼠后即刻取肝稱重，并計算肝指數：肝指數=肝凈重(g)/體重(g)×100%。

1.8統計學方法 采用統計軟件SPSS17.0進行方差分析、兩實驗組組間比較用矯正檢驗水準后的配對t檢驗；用雙因素重復測量設計方差分析進行多重比較，部分用單因素方差分析。

2 結果

2.1各組體重對比 給藥前及給藥14 d，各組體重差異無統計學意義(P>0.05)。給藥7 d除陽性對照組外，各實驗組體重均顯著低于空白對照組(P<0.05)。見表1。

2.2各組血糖水平對比 各實驗組血糖均顯著高于空白對照組(P<0.05)，表明造模成功。給藥7 d,低、中、高劑量組及陽性對照組血糖均顯著低于給藥前(P<0.05)。給藥14 d，除野菊花組外，其余實驗組血糖均顯著低于給藥前(P<0.05)，且以高劑量組血糖最低。見表2。

表1 各組不同時間體重比較

表2 各組不同時間血糖水平比較

2.3各組血生化指標和肝臟指數對比 各實驗組ALT顯著高于空白對照組(P<0.05)，低、中、高劑量組及陽性對照組ALT顯著低于松黃組和野菊花組(P<0.05)。各實驗組AST顯著高于空白對照組(P<0.05)，各實驗組間AST差異無統計學意義(P>0.05)。陽性對照組、松黃組、低劑量組、中劑量組TC顯著高于空白對照組(P<0.05)，野菊花組、高劑量組TC與空白對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。除高劑量組TG與空白對照組差異無統計學外(P>0.05)，其余實驗組TG均顯著高于空白對照組(P<0.05)。各實驗組肝臟指數顯著高于空白對照組(P<0.05)，高劑量組肝臟指數顯著高于松黃組(P<0.05)。見表3。

表3 各組血生化指標水平比較

3 討 論

四氧嘧啶作用于胰島的β細胞，能夠中止胰島素分泌而引起動物實驗性四氧嘧啶糖尿病〔7〕。四氧嘧啶通過產生超氧自由基選擇性地破壞胰島β細胞，并使細胞內DNA 損傷，同時激活多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖體合成酶的活性，進一步致使mRNA 功能受損引起細胞死亡，形成胰島素依賴性糖尿病。

西醫治療糖尿病存在耐受性低、藥物不良反應多、依賴性強等問題。中藥通過多成分、多靶點、多效應及多功能的作用特點，已成為當前治療糖尿病藥物研究的新興方向〔8〕。研究發現，松黃對降低血糖有奇效〔9～11〕，同時佐以野菊花使松黃作為君藥的作用進一步發揮。

本研究表明，松黃和野菊花及其配伍能夠在一定程度上降低胰島素依賴性糖尿病小鼠的空腹血糖，且效果隨配伍藥物濃度的升高而呈正相關。此外松黃和野菊花配伍能夠有效降低血清中TG含量與ALT水平，對緩解糖尿病典型的“三多一少”癥狀，對預防糖尿病并發癥起良性作用。但該配伍對血清AST水平干預效果不明顯，表明該配伍對四氧嘧啶致糖尿病小鼠的肝臟損傷無修復或保護作用。