小兒智力糖漿質量標準提高研究

汪玉萍，楊積慧，江厚義，劉軍玲，程世云

作者單位：1安慶市食品藥品檢驗中心，安徽 安慶 246052；

2上海寶龍安慶藥業有限公司，安徽 安慶 246001；

3安徽省食品藥品檢驗研究院，安徽 合肥 230051

小兒智力糖漿是由龜甲、龍骨、遠志、石菖蒲、雄雞等5 味藥組成，收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第八冊，標準號為WS3-B-1496-93［1］。2004 年5 月25 日國家食品藥品監督管理局國家藥品標準（修訂）頒布件ZGB2004-31 將標準中“功能與主治”的內容修訂為“開竅益智，調補心腎，滋養安神等作用。用于心腎不足，痰濁阻竅所致小兒多動，少語，煩躁不安，神思渙散，少寐健忘，潮熱盜汗；兒童多動癥見上述證候者”；標準號修訂為WS3-B-1496-93-2004，其他內容未作修訂。檢驗項目包括：性狀、遠志的薄層鑒別、相對密度檢查及糖漿劑的通則檢查［2］。其質量標準較為簡單，不能全面有效地控制其藥品內在質量；因此有必要建立更為完善的質量控制體系，以利于對該藥品進行有效的質量控制。本研究時間為2021 年1—5 月，在原質量標準的基礎上增加了石菖蒲和龜甲的定性鑒別方法，增加了高效液相色譜法（HPLC）測定其遠志皂苷元的含量，對小兒智力糖漿質量控制方法進行了較為系統的提高完善，本研究建立的鑒別和含量測定方法為小兒智力糖漿質量標準的修訂提供了科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料 全自動點樣儀（CAMAG 公司）；Agilent1260 型高效液相色譜儀（包括G1315D 型DAD檢測器），Agilent 公司；Waters SymmetryShieldTMRP18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；雙槽展開缸（規格10 cm×10 cm；10 cm ×20 cm，上海信誼儀器廠）；硅膠G 薄層板：青島海洋化工廠分廠；Merk 公司。XP26 型電子天平（瑞士梅特勒公司，d=0.001 mg）；S120H型超聲波清洗器（德國Elma公司）。

石菖蒲對照藥材（批號121098-201105）、龜甲對照藥材（批號121494-201102）、丙氨酸對照品（批號140680-201604，含量100.0%）、遠志皂苷元對照品（批號111572-201803，含量98.5%），對照藥材及對照品購自中國食品藥品檢定研究院。

小兒智力糖漿12 批（批號為190333 、190334、190336、180111 由A 公司提供；批號為180802、180906、181106 由B 公司提供；批號為17060006、18010002、19030001 由C 公司提供，批號為20181002、20181102由D公司提供）。

三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、正丁醇、石油醚（60～90 ℃）、鹽酸、苯酚、硼酸、甲醇等均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）。水為純化水。

1.2 方法

1.2.1 薄層色譜鑒別方法

1.2.1.1 石菖蒲 取本品20 mL，加乙醚振搖提取3次，每次30 mL，合并乙醚液，低溫蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL溶解，作為供試品溶液。另取石菖蒲對照藥材1 g，加水50 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液加乙醚振搖提取3次，每次30 mL，合并乙醚液，低溫蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL溶解，作為對照藥材溶液。按小兒智力糖漿處方和工藝制備缺石菖蒲的陰性樣品，并按照供試品溶液的制備方法制備成缺石菖蒲陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2020年版四部通則0502）試驗，吸取上述對照藥材溶液5～10μL、供試品溶液及陰性樣品各10～15μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。

1.2.1.2 龜甲 取本品1 mL，加水20 mL 和鹽酸3 mL，加熱回流60 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5 mL 使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取丙氨酸對照品適量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按小兒智力糖漿處方和工藝制備缺龜甲的陰性樣品，并按照供試品溶液的制備方法制備成缺龜甲陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2020 年版四部通則0502）試驗，吸取供試品溶液及陰性樣品各5～10μL、對照品溶液1～2 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以苯酚-0.5%硼酸溶液（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.2%的茚三酮乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。

1.2.2 HPLC 含量測定方法 色譜柱為Waters SymmetryShieldTMRP18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-0.05%磷酸溶液（41∶59）為流動相；檢測波長為210 nm，柱溫：35 ℃；進樣量：10μL，理論板數按遠志皂苷元峰計算應不低于3 000。精密稱取遠志皂苷元對照品6.12 mg，置50 mL 量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，即得（濃度為0.120 6 g/L），作為對照品儲備溶液。精密量取對照品儲備溶液2 mL 加甲醇稀釋至10 mL 作為對照品溶液。精密量取本品10 mL，置100 mL 具塞錐形瓶中，加12.5%的鹽酸溶液40 mL，搖勻，置沸水浴中加熱回流1 h，立即冷卻至室溫，濾過，濾渣用水沖洗至中性，濾渣及錐形瓶晾干，連同濾紙置原錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按處方組成比例，取除遠志以外的其余藥味，按制備工藝要求，制成不含遠志的小兒智力糖漿陰性樣品，并按照供試品溶液同法制備成陰性溶液。按上述色譜條件，分別精密量取遠志皂苷元對照品溶液、樣品溶液及陰性樣品溶液各10μL 注入高效液相色譜儀進行測定。

2 結果

2.1 薄層色譜分析結果

2.1.1 石菖蒲薄層色譜鑒別 照薄層色譜法（中國藥典2020 年版四部通則0502）試驗，3 批小兒智力糖漿樣品色譜圖中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點，且陰性樣品對鑒別結果無干擾，薄層色譜圖見圖1。

2.1.2 龜甲薄層色譜鑒別 照薄層色譜法（中國藥典2020 年版四部通則0502）試驗，3 批小兒智力糖漿樣品色譜圖中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。且陰性樣品對鑒別結果無干擾，薄層色譜圖見圖1。

2.2 遠志皂苷元含量測定結果

2.2.1 專屬性試驗 按“1.2.2”項下色譜條件，分別取“1.2.2”項下供試品溶液、“1.2.2”項下遠志皂苷元對照品溶液和“1.2.2”項下陰性對照溶液進樣分析，記錄液相色譜圖，見圖2。實驗表明，處方中其他藥味對遠志皂苷元的測定無干擾。

圖2 高效液相色譜圖：A為對照品溶液；B為供試品溶液；C為陰性對照溶液

2.2.2 線性關系的考察 精密吸取“1.2.2”項下對照品儲備溶液0.5、1、2、4、5、10 mL，分別置10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，即得。分別吸取10 μL 進樣，按“1.2.2”色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標（Y），遠志皂苷元進樣濃度（g/L）為橫坐標（X），實驗數據線性回歸處理，得回歸方程Y=7 928 515.5X+1 202.1（r=0.999 9，n=6）。實驗表明：遠志皂苷元對照品在所試濃度為0.006 03～0.120 60 g/L 范圍內與峰面積積分值具有良好的線性關系。

2.2.3 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，連續進樣6 次，其遠志皂苷元峰面積測量值的相對標準偏差為0.25%，表明儀器精密度良好。

2.2.4 重復性試驗 取同一批小兒智力糖漿（批號190334）的樣品6份，按“1.2.2”項下方法制備供試品溶液，測定供試品中遠志皂苷元的含量，結果樣品中遠志皂苷元含量為0.105 8 g/L，其RSD 為1.78%。實驗表明本法重現性較好。

2.2.5 穩定性試驗 取配制好的同一供試品溶液，按“1.2.2”項下色譜條件分析，分別于配制后0、2、4、8、12、24 h 精密量取10 μL 注入液相色譜儀。結果遠志皂苷元峰面積RSD 為0.60%，表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

2.2.6 準確度試驗 分別精密量取遠志皂苷元對照品甲醇溶液（配制過程：精密稱取遠志皂苷元3.975 mg，置10 mL 量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。濃度為0.391 5 g/L）6 份，每份1 mL，置100 mL 具塞錐形瓶中，蒸干，再精密量取同一批已知含量的小兒智力糖漿（批號190334，含量為0.105 8 g/L）的樣品6 份，每份5 mL 至上述錐形瓶，加水補足至10 mL，按“1.2.2”項下方法處理，濾過，取續濾液，即得。按“1.2.2”項下色譜條件測定其遠志皂苷元的含量，計算平均回收率為89.7%，RSD=3.1%。實驗表明：本法準確性較好。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.2.7 樣品含量測定 取12 批不同廠家的小兒智力糖漿，分別按“1.2.2”項下方法制備供試品溶液，對照品溶液和樣品溶液，分別進樣10μL，按“1.2.2.”項下色譜條件進行測定，計算各批樣品中遠志皂苷元的含量。結果見表2。

表2 小兒智力糖漿中遠志皂苷元的含量/（g/L，n=2）

3 討論

3.1 薄層色譜鑒別研究［3-5］在研究石菖蒲薄層色譜鑒別時，分別比較了二氯甲烷、乙醚、石油醚（60～90 ℃）等不同溶劑的提取溶劑，結果顯示采用乙醚為提取溶劑時樣品斑點清晰，且提取方法簡單可行，故選用乙醚為提取溶劑液，選擇石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm 下）檢視，色譜斑點清晰，陰性對照無干擾。

龜甲的薄層色譜鑒別中采用了龜甲對照藥材和丙氨酸對照品為對照，結果龜甲對照藥材與陰性樣品有部分斑點一致，故未將龜甲對照藥材納入標準正文的質量標準中。

3.2 遠志的含量測定研究及限度擬定［5-13］根據國家藥典委員會藥品標準提高課題申報書綜合意見單上要求，增加遠志專屬性成分的含量測定方法。遠志為中醫臨床常用藥，其功效主要有安神益智，交通心腎，祛痰，消腫。遠志的主要活性成分為皂苷類、酮類、寡糖酯類，其中皂苷類成分主要有遠志皂苷元、細葉遠志皂苷、遠志酸、遠志皂苷B等，酮類成分主要為遠志口山酮Ⅲ；寡糖酯類成分主要為3，6′-二芥子酰基蔗糖等。開始選擇遠志口山酮Ⅲ和3，6′-二芥子酰基蔗糖作為指標成分，但小兒智力糖漿樣品中未檢出這兩種成分，再選擇細葉遠志皂苷為指標成分進行含量測定方法研究，因細葉遠志皂苷為堿水解的二次皂苷，水解條件苛刻，方法重現性差，回收率低。后來再選擇遠志皂苷元作為指標成分。經方法學驗證表明：本法準確、重現性好，可作為該制劑的定量分析控制方法。樣品中遠志皂苷元的含量高低與生產企業有關，C 公司生產的小兒智力糖漿樣品含量最高可達0.480 5 g/L，而D 司生產的小兒智力糖漿樣品含量僅0.013 6 g/L，這可能與不同企業購買的遠志藥材有關，因《中國藥典》2020 年版一部中遠志藥材項下無遠志皂苷元含量測定項，將C 公司生產的三批含量特別高以及D 公司生產的兩批含量特別低的離群樣本棄掉，得平均值為0.130 4 g/L，按照平均值下浮20%的量擬定限度為0.10 g/L，因此暫定樣品中遠志皂苷元的含量限度定為：“本品每1 毫升含遠志以遠志皂苷元（C30H45ClO6）計，不得少于0.10 mg”。

4 結論

本研究在小兒智力糖漿現有質量標準的基礎上增加了石菖蒲和龜甲的薄層色譜鑒別，增加了遠志皂苷元的含量測定。建立了較完整的質量評價體系，為小兒智力糖漿的質量標準提高完善提供了科學依據。

（本文圖1見插圖8-2）