五味子藤總木脂素抗氧化活性研究

喬巍，郭娜，張穎智，崔玉海，魏淑梅，接偉光*

（1.黑龍江東方學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150066；2.哈爾濱首智生物技術(shù)有限公司，黑龍江哈爾濱 150016）

五味子（Schisandra chinensis）作為一味傳統(tǒng)中藥材，主要入藥部位是其成熟果實(shí)。木脂素是廣泛分布在植物中的小分子量次生代謝產(chǎn)物，是五味子主要的活性物質(zhì)，具有抗氧化、保肝、抗炎等作用。北五味子藤莖是五味子的干燥藤莖，經(jīng)證實(shí)，五味子藤莖中存在有效成分——木脂素，可發(fā)揮與其果實(shí)相似的藥理作用。

抗氧化功能評價(jià)主要包括體內(nèi)評價(jià)和體外評價(jià)。體外評價(jià)包括化學(xué)評價(jià)法和生物活性評價(jià)法，且已經(jīng)形成系統(tǒng)的體系。化學(xué)評價(jià)法以其原理簡單、費(fèi)用低廉、快速簡便等優(yōu)勢廣泛應(yīng)用于抗氧化活性物質(zhì)的初篩階段，主要包括體外總抗氧化能力測定法（T-AOC）、清除各類活性氧自由基法（·OH、·O2-）、清除自由基法（DPPH法、ABTS法、ORAC法）。根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料及目的，本文選用化學(xué)評價(jià)法中具有代表性的總抗氧化能力試劑盒及對超氧陰離子自由基清除效果兩種方法評價(jià)五味子藤總木脂素抗氧化活性。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 儀器

BS124S分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.1.2 試劑與材料

95%乙醇，分析純，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司；總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒，鄭州和成新材料科技有限公司；VC對照品（批號：O19EB100374）、焦性沒食子酸（批號：C14A9C58726），上海源葉生物科技有限公司；三羥甲基氨基甲烷（批號：2020/11），北京博奧拓達(dá)科技有限公司。

五味子藤總木脂素固形物：原料為五味子藤，以95%乙醇為提取溶劑，通過加熱回流法在料液比1∶10、提取次數(shù)3次、提取時(shí)間5 h條件下提取制得粗提液，再經(jīng)AB-8大孔樹脂在上樣濃度1.5 mg/mL、吸附速率2 BV/h、上樣量6 BV、95%濃度乙醇洗脫、洗脫速率2 BV/h、洗脫劑用量8 BV條件下純化后干燥制得（BV為樹脂床體積）。

1.2 方法

1.2.1 原理

（1）總抗氧化能力

Fe3+可以被樣品中的抗氧化物質(zhì)還原成Fe2+，F(xiàn)e2+可與菲啉類物質(zhì)形成穩(wěn)固的絡(luò)合物，通過紫外分光光度計(jì)進(jìn)行測定[1-2]。

（2）超氧陰離子自由基清除力

鄰苯三酚在堿性條件下發(fā)生自氧化反應(yīng)，能產(chǎn)生穩(wěn)定濃度的·O2-和有色中間產(chǎn)物。由于自氧化的速率與·O2-的濃度相關(guān)，消除·O2-則抑制自氧化反應(yīng)，阻止氧化產(chǎn)物的積累，因此可以通過測定某一波長吸光度值的線性積累評價(jià)受試樣品清除·O2-的能力[2-5]。

1.2.2 T-AOC測定

將總木脂素固形物配制成濃度為0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL的溶液，取上清液0.1 mL作為供試品溶液。配制濃度0.2 mg/mL的VC溶液作為對照品溶液。

按照T-AOC試劑盒（比色法）操作步驟，采用紫外分光光度法，在520 nm處測定各溶液吸光度值，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。以總抗氧化能力單位（U）為指標(biāo)計(jì)算各濃度供試品溶液和對照品溶液的總抗氧化能力，如公式（1）。

式中，ODt和ODc分別為試劑盒中測定管和對照管吸光度；V1和V2分別為配置溶液總量和取樣量，mL；f為稀釋倍數(shù)；TA為總抗氧化能力，U/mg。

1.2.3 超氧陰離子自由基清除力測定

（1）分別標(biāo)記空白管、對照管、VC對照管和0.05 mg/mL、0.10 mg/mL、0.20 mg/mL的3個(gè)濃度樣品管。空白管和對照管中加入4 mL蒸餾水，VC對照管加入0.2 mg/mL的VC對照品4 mL，樣品組各加入對應(yīng)濃度的4 mL樣品溶液。（2）向（1）中各管加入0.1 mol/L的Tris-HCl緩沖溶液（pH=8.2）4.5 mL，25 ℃水浴20 min。（3）空白管加入0.5 mL蒸餾水，其余各管加入3 mmol/L鄰苯三酚溶液0.5 mL，充分振搖后立即測定320 nm處吸光度值，以空白管調(diào)零。每30 s測量1次，共10次，記錄時(shí)間和對應(yīng)的吸光度值，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。（4）以時(shí)間t為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)繪制曲線，得回歸方程，直線斜率V為吸收速率。抑制率IC的計(jì)算方法如公式（2）所示。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用SPSS 26.0軟件進(jìn)行分析處理，P＜0.05為差異顯著，結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 五味子藤總木脂素總抗氧化能力

五味子藤總木脂素總抗氧化能力測定結(jié)果見表1。由表1可知，隨著五味子藤總木脂素固形物濃度的增加，總抗氧化活性呈升高趨勢，各濃度的抗氧化活性具有顯著差異；與VC比較，五味子藤木脂素的抗氧化值約是同等濃度VC的1/5。

表1 五味子藤木脂素總抗氧化能力測試結(jié)果

2.2 五味子藤總木脂素對超氧陰離子自由基清除作用

五味子藤總木脂素對超氧陰離子自由基的清除作用見表2。由表2可知，隨著五味子藤總木脂素固形物濃度的增加，對鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生的超氧陰離子自由基的抑制作用呈現(xiàn)上升趨勢，各濃度間抑制率具有顯著差異；同等濃度下，五味子藤木脂素固形物對超氧陰離子自由基的清除能力約是VC的1/4。

表2 超氧陰離子自由基清除效果匯總

3 結(jié)論

按照總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒（比色法）測定，五味子藤總木脂素固形物總抗氧化值約是同等濃度下VC的1/5；對超氧陰離子自由基的抑制作用約是同等濃度下VC的1/4，五味子藤總木脂素固形物具有一定的抗氧化活性。