EGCG 對熱應激蛋鴨腸道結構及十二指腸IgA 的影響

郝曉娜 辛清武 李 麗 章琳俐 朱志明 繆中緯 鄭嫩珠＊

（1.福建農林大學動物科學學院（蜂學學院） 福州 350002；2.福建省農業科學院畜牧獸醫研究所 福州 350013）

在世界熱帶國家和地區， 高溫環境是制約畜牧生產領域發展的重要因素之一。 在我國南部地區，熱應激對蛋禽行業的負面影響較大， 不僅降低生產性能， 而且嚴重的高溫易造成畜禽大面積死亡和繼發性疾病[1]。 熱應激較大程度阻礙了養殖行業經濟發展，其影響程度大小與家禽品種、日齡以及熱應激模式有一定的相關性[2]。

家禽適宜的生長環境溫度為15~25 ℃， 高于30 ℃則會出現各種不良機體反應[3]。 熱應激對蛋禽腸道形態結構和完整性產生不利影響[4]。 腸道穩態與機體健康狀態密切相關[5]，腸道的正常結構可以阻擋有害菌的侵襲， 從而保障機體正常的營養攝入及消化吸收功能，減少其對高溫環境的敏感度[6]。 熱應激對家禽腸道主要有3 大方面的影響：第一，腸道功能和形態結構方面的影響； 第二， 腸壁通透性增加，阻礙機體對營養成分的吸收，對生長繁殖產生不利影響；第三，增加腸道疾病的發生率及衍生風險[7]。

通過添加綠色高效安全的抗氧化劑來緩解熱應激造成的一系列負面影響，是當前研究的熱點。表沒食子兒茶素沒食子酸酯及茶多酚在國內外家禽生產中的應用效果好、市場空間大，能夠改善家禽腸道健康[8]。 綠茶中活性最強的物質是表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG），具有較強的抗氧化、抗菌、抗炎作用[9]。 Song 等[10]研究表明，熱應激條件下在肉雞日糧中添加EGCG， 可通過提高機體的抗氧化能力及抑制炎性反應來改善熱應激對腸道的損傷。 EGCG在國內外蛋鴨方面的生產應用研究較少， 本試驗選用400 日齡健康金定鴨，探討EGCG 對熱應激蛋鴨腸道結構及十二指腸黏膜IgA 的影響， 為其在家禽實際生產開發提供合理可靠的依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及材料 試驗選用400 日齡健康金定鴨240 羽，隨機分為4 組，每組3 個重復，每個重復20 羽。 NT 組（溫度22~26 ℃），HS 組（溫度33~37 ℃），NT 和HS0 組 飼 喂 基 礎 日 糧，HS300 和HS600 組在飼喂基礎日糧的基礎上分別添加EGCG 300 mg/kg 和600 mg/kg 。 試驗共計4 周，28 d 結束后屠宰并采集各段腸道樣本。

1.2 飼養管理 試驗在福建省農科院畜牧獸醫研究所試驗基地開展， 嚴格按照金定鴨飼養管理標準進行統一飼養。 每天早上8:30、晚上18:30 飼喂，自由飲水。 飼糧使用福建省福清華龍飼料有限公司生產的蛋鴨產蛋期配合飼料711 （產品標準編號：Q/FQHL 003-2018， 飼料生產許可證編號： 閩飼證(2020)01352，其營養成分見表1。 98%表沒食子兒茶素沒食子酸酯（精細粉末、類白色、特有氣味，堆積密度0.45~0.65 g/mL）購自陜西某生物科技有限公司。

表1 基礎飼糧營養水平

1.3 腸道形態結構和十二指腸黏膜IgA 含量測定

1.3.1 腸道形態結構測定 在試期28 d 結束時，每個重復隨機選取2 羽蛋鴨進行屠宰，分別取1 cm 十二指腸、空腸、回腸各兩段，使用預冷的生理鹽水清洗腸段內容物，置于多聚甲醛固定液進行常溫固定，24 h 后用于HE 染色試驗及腸道形態測定。

用經過高壓消毒的器械將多聚甲醛固定液中的腸段取出并做相應修整， 將標簽和對應的腸段置于脫水盒，隨后對腸段進行不同濃度酒精脫水，清洗、浸蠟、包埋、切片，將切片放置載玻片上，隨后采用蘇木素-伊紅（HE）染色方法進行染色，最后脫水封片，使用顯微鏡觀察各腸段形態。

1.3.2 十二指腸黏膜IgA 含量測定 在試驗28 d結束時，屠宰解剖并取出十二指腸置于無RNA 酶的EP 管中，迅速置于液氮中，用于十二指腸黏膜IgA測定。

1.4 數據統計與分析 腸道形態結構采用HE 染色，顯微鏡鏡檢并采集圖像進行分析。十二指腸黏膜IgA 結果利用SPSS26.0 軟件進行統計分析，利用單因素方差分析（ANOVA，LSD）進行顯著性檢驗，P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。 數據用平均值±標準誤（SE）表示。

2 結 果

2.1 EGCG 對熱應激條件下蛋鴨腸道形態的影響由腸道切片圖1 可見，對照組十二指腸、空腸、回腸的形態結構較為完整，無明顯的組織損傷，且分布密集，絨毛之間間隔清晰。熱應激組十二指腸、空腸、回腸可見上皮脫落、絨毛損傷的現象，其中十二指腸和空腸的損傷較為明顯。 熱應激后在日糧中分別添加EGCG 300 mg/kg 和600 mg/kg 的試驗組，可見腸道上皮脫落和絨毛嚴重損傷情況得到有效改善， 腸道形態結構的完整性雖不比對照組好， 卻能夠對熱應激后十二指腸、空腸的絨毛形態、排列以及絨毛末端的損傷起到積極作用。

2.2 EGCG 對熱應激條件下蛋鴨十二指腸黏膜IgA的影響 由表2、圖2 可以看出，與對照組相比，HS0組十二指腸的黏膜IgA 含量極顯著降低 （P＜0.01），HS300、HS600 組可一定程度提高十二指腸的黏膜IgA 含量，但與對照組、HS0 組相比，差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 十二指腸黏膜IgA 含量檢測結果

3 討 論

3.1 EGCG 對熱應激條件下蛋鴨腸道形態結構的影響 熱應激會造成家禽腸道結構實質性損傷[11]。雷昕[12]研究表明，EGCG 在熱應激下添加能夠保護AA 肉雞的空腸形態結構。 本研究表明，熱應激導致小腸絨毛及黏膜結構出現脫落、斷裂的現象，在添加EGCG 后能夠改善蛋鴨的十二指腸、 空腸和回腸的形態結構。 與雷昕[12]的研究結果相一致。

圖1 腸道切片

圖2 十二指腸IgA 含量

3.2 EGCG 對熱應激條件下蛋鴨十二指腸黏膜IgA的影響 腸道黏膜IgA 所構建的免疫屏障在應對家禽熱應激、 控制毒素及有害菌進入腸道起到一定的保護作用。 Liu 等[13]研究表明，熱應激降低了腸道黏膜IgA 表達，損傷了腸道免疫功能。 林立楠[14]研究表明，十二指腸、輸卵管黏膜的IgA 含量受熱應激的影響顯著下降。

本研究表明， 熱應激能夠極顯著降低十二指腸IgA 含量，這與Liu 等[13]、林立楠[14]研究相一致；日糧中添加EGCG 對熱應激下蛋鴨的十二指腸免疫球蛋白IgA 有一定的改善效果。