氣相色譜-質譜法檢測川芎定痛膠囊的揮發油成分*

佟彬良，楊澤康，劉瀟琳，張卜文，顏文，周春華△

（1.河北醫科大學第一醫院藥學部，河北 石家莊 050031；2.河北醫科大學藥學院，河北 石家莊 050017）

川芎定痛膠囊是由河北醫科大學第一醫院制劑室研制的中藥復方制劑（批準文號為冀藥制字Z05000005），由川芎、絞股藍、延胡索、白芷、細辛、全蝎6 味藥材組方，具有調和氣血、平肝熄風、活絡安神止痛等功效，用于偏頭痛、緊張性頭痛、叢集性頭痛不伴外感癥狀者［1］。中醫認為，疼痛主要分為“不榮則痛”“不通則痛”，不榮為氣血兩虛，不通為氣滯血瘀。本品主治氣滯血瘀型疼痛，氣滯血瘀可因外感風、濕、寒或情志內傷，肝郁氣滯等引起。方中，川芎為君藥，活血行氣，與延胡索有協同作用；細辛驅風散寒；白芷驅風燥濕散寒；全蝎息風解痙、活血化瘀，但活血易導致氣虛；絞股藍起益氣健脾作用，其性寒，其余5 味藥性溫，藥性調和，防止服藥者陽重成火。現代藥理學研究表明，川芎具有抗氧化、保護神經、抗炎、抗菌等作用，含阿魏酸、綠原酸、苯肽類成分如藁本內酯及其衍生物等［2-3］；延胡索的主要藥效物質為生物堿類成分［4］；白芷含有揮發油和香豆素類等化學成分，其中香豆素類生物活性最強［5］；絞股藍主要成分為人參皂苷Rb及絞股藍皂苷［6］；細辛中主要活性成分為揮發油［7］。川芎定痛膠囊內容物為上述6味中藥的提取物，成分復雜，主要含有機酸類、生物堿類、香豆素類、三萜皂苷、揮發油等活性成分。目前，川芎定痛膠囊揮發油成分研究中多局限于單一成分藥材或各個指標性成分進行定性定量檢測，但單一成分難以代表制劑的有效成分。為此，本研究中采用氣相色譜-質譜（GC -MS）法分離并分析了膠囊中揮發油的化學成分，為其物質基礎、質量控制、藥理活性的研究提供試驗依據。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890B -7000C 型氣相色譜-質譜聯用儀（美國Agilent 公司），配有Mass Hunter 質譜工作站，美國國家標準與技術研究院（NIST）標準質譜圖庫；10 mL揮發油提取器（天長市唐氏實驗儀器有限公司）；BP121S 型電子天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司，精度為萬分之一）。

1.2 試藥

川芎定痛膠囊（河北醫科大學第一醫院醫院制劑，批號為191013）；乙酸乙酯（色譜純），石油醚（分析純），購于天津科美爾化學試劑有限公司。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與質譜條件

2.1.1 GC 條件

色譜柱：DB -17MS 毛細管柱（30 m × 0.25 mm，0.25 μm）；程序升溫：色譜柱初始溫度為60 ℃、保持2 min，以3 ℃/ min 的速率升至120 ℃、保持2 min，以5 ℃/ min 的速率升至180 ℃、保持6 min，以20 ℃/ min的速率升至260 ℃、保持2 min；進樣口溫度：240 ℃；載氣：氦（He）氣；載氣流速：1 mL/ min；分流比：20∶1；進樣量：1μL。

2.1.2 MS 條件

電子轟擊（EI）離子源；離子源溫度：230 ℃；四極桿溫度：150 ℃；電子能量：70 eV；接口溫度：250 ℃；溶劑延遲時間：6.5 min；全掃描監測方式，質荷比（m/z）掃描范圍：60～600［8-10］。

2.2 揮發油樣品制備

取川芎定痛膠囊內容物30 g，精密稱定，置揮發油提取器中，加入純化水400 mL，浸泡4 h。按2020 年版《中國藥典（四部）》2204 揮發油測定法（附錄XD 甲法）進行測定，水蒸氣蒸餾5 h，收集揮發油。以石油醚作溶劑，萃取、收集揮發油；減壓蒸餾揮去石油醚，所得樣品用無水硫酸鈉干燥，得淺黃色油狀液體；移取至樣品瓶，密封，保存于4 ℃冰箱，備用。提取的揮發油樣品，加乙酸乙酯稀釋，用0.22μm微孔濾膜濾過。

2.3 方法學考察

精密度試驗：取2.2 項下揮發油樣品，連續進樣測定6次，GC-MS色譜峰保留時間的RSD≤0.31%（n=6），峰面積的RSD≤0.53%（n=6），表明儀器精密度好。

穩定性試驗：取2.2項下樣品，分別于0，3，6，9，12 h時進樣分析，各色譜峰保留時間的RSD≤0.83%（n=5），峰面積的RSD≤1.02%（n=5），表明穩定性良好。

2.4 揮發油化學成分GC-MS 分析

成分鑒定與相對含量測定：采用氣相色譜-質譜聯用儀對川芎定痛膠囊揮發油總離子流色譜進行分析和處理，根據相應的MS 譜圖，通過工作站NIST 標準質譜圖庫檢索，參考文獻［7，11-16］，確定各色譜峰代表的化學成分，并按面積歸一化法計算各揮發油化學成分的相對含量。

結果分析：樣品經GC-MS 分析，得到總離子流圖（圖1），采用氣相色譜-質譜聯用儀對川芎定痛膠囊揮發油總離子流色譜進行分析，并采用峰面積歸一化法確定揮發油各組分的相對百分含量。揮發油中共分離出49 個峰，其中鑒定出31 個成分，主要包括烯烴類、醇類、酮類、醚類、酚類、酯類、芳香化合物等，占總流出峰峰面積的86.78%，其中，烯類13個，峰面積之和占總流出峰面積的20.04%；醇類3個，占2.48%；酮類2個，占0.64%；芳香化合物4個，占12.95%；醚類3個，占15.79%；酚類2個，占10.63%；酯類（苯酞類）4個，占24.25%。E-藁本內酯峰面積最高（17.56%），其次是黃樟醚（10.62%）、甲基丁香酚（10.32%）、3，5 -二甲氧基甲苯（7.58%）、角鯊烯（5.77%）、肉豆蔻醚（4.33%）、3，4，5-三甲氧基甲苯（4.08%）。詳見表1。

3 討論

由表1 可知，已鑒定出的31 種化學成分中大多數化學成分來源于川芎、細辛。其中來源于川芎的成分19種，其他藥材揮發油成分較少，與川芎為君藥的事實相符。經鑒定，川芎定痛膠囊揮發油中E-藁本內酯占比最高（17.56%）。

表1 GC-MS法分析川芎定痛膠囊揮發油化學成分Tab.1 Chemical components in the volatile oil from Chuanxiong Dingtong Capsules by the GC -MS

藁本內酯及其衍生物為川芎揮發油的主要活性成分，同其生物堿均具有腦保護作用，如抑制腦I/ R 損傷、抗偏頭痛、保護神經，其在抑制血栓形成和血小板聚集、抗心肌缺血及抑制子宮平滑肌收縮等方面的作用也使川芎常被用于活血化瘀調經藥［17］。另有研究表明，藁本內酯可劑量依賴性地減輕動脈粥樣硬化模型大鼠動脈血栓的質量，抑制腺苷二磷酸所致血小板聚集［18］，從而發揮抗動脈粥樣硬化作用。其衍生物洋川芎內酯Ⅰ對于偏頭痛模型大鼠具有顯著的治療效果，同時，李海剛等［3］提出藁本內酯可能具有抗凝血和抗血小板凝集作用，MA等［19］提出Z-蒿本內酯具有抗抑郁作用。

黃樟醚、甲基丁香酚、3，5-二甲氧基甲苯和2，4，6-三甲氧基甲苯等為細辛的主要活性成分。網絡藥理學分析顯示，黃樟醚和甲基丁香酚被認為具有抗炎作用，是能發揮抗炎鎮痛作用的主要藥效物質。現代藥理學研究證明，甲基丁香酚能抑制中樞神經系統，對不同物種的實驗動物靜脈注射后可起到不同程度的麻醉效果，能有效限制神經病理性疼痛，可作為有效的局部麻醉劑和鎮痛劑。在相關動物實驗中，細辛中的揮發油成分被證明對神經系統、心血管系統等均有影響，可實現鎮靜抗驚厥、解熱鎮痛、預防和治療炎癥、抗變態反應等作用［20-21］，同時也具有一定毒性，需謹慎使用［20］。

川芎、細辛的揮發油成分可能在川芎定痛膠囊的藥效中起到了重要作用。另外，其他幾味藥材揮發油含量較少，但所含有的其他化學成分也對川芎定痛膠囊的藥效起到了輔助作用。

延胡索的主要藥效物質為生物堿類成分，對人體各大系統均有顯著效果。現代藥理學研究表明，叔胺類成分具有鎮痛、鎮靜、催眠、抗焦慮作用［22］，針對消化系統的抗胃腸道潰瘍作用［23］和心腦血管系統的抗心肌缺血、腦缺血作用等［24］，臨床常用于治療心血管疾病、炎癥、失眠癥等，但由于生物堿具有一定毒性，應關注其禁忌證［4，25］；香豆素類是白芷中生物活性最強的成分，對神經中樞的影響強，具有解熱、鎮痛、平喘作用，在擴血管、抗血小板聚集、降血壓等方面有一定效果，但需注意可能帶有肝毒性等毒副作用［26］。動物實驗證明，絞股藍的主要成分為人參皂苷Rb、絞股藍皂苷，在調血脂、保肝、抗疲勞、抗氧化、保護心腦血管等有一定作用，廣泛用于高血脂等治療［6，27］。

上述揮發油中許多化學成分具有不同程度的毒性。黃樟醚可抑制呼吸中樞，中毒初期會有頭痛、嘔吐、氣短、體溫升高、心悸等，嚴重時會導致明顯的中樞神經系統抑制，呼吸逐漸困難甚至死亡；甲基丁香酚也被證明有肝毒性、基因和細胞毒性、致癌致突變等毒性［28］；欖香素在一定條件下具有致癌毒性［29］；藁本內酯可使細胞凋亡，肉豆蔻醚能使人致幻等。多成分揮發油的毒性往往不是某個成分單獨起作用，多個揮發油成分單獨或協同作用極有可能使毒副作用變得復雜且更嚴重。因此，對于揮發油含有多種化學成分的川芎痛定膠囊，應更明確和規范其成分種類和含量。作為中藥復方制劑，川芎定痛膠囊在選材和制藥過程中，已通過配伍、煎煮等傳統手段減毒。而利用更精確的現代分析技術，可對其含量進行精確測量和控制，最大程度地發揮其效應，在保障安全性的同時提高有效成分含量。

綜上所述，采用GC-MS法分析川芎定痛膠囊的揮發油成分，擴大了揮發油化學成分的測定范圍，明確了其成分種類、含量占比，可用于川芎定痛膠囊的成分和質量控制研究。