33%苯醚甲環唑·萎銹靈懸浮種衣劑高效液相色譜分析

陳文杰，車春花，李 軍，沈東華，徐新曄

（溧陽中南化工有限公司，江蘇溧陽 213300）

萎銹靈是一種具有內吸作用的雜環類殺菌劑，主要用于防治高粱絲黑穗病等禾谷類黑穗病，也可防治小麥穗病、棉草病害、粟白發病等[1]；苯醚甲環唑是三唑類殺菌劑，是甾醇脫甲基化抑制劑，具有廣譜內吸性，廣泛應用于果樹、蔬菜等作物，有效防治黑星病、黑痘病、白腐病、斑點落葉病、白粉病、褐斑病、銹病、條銹病、赤霉病等[2-3]。

目前，國內有關萎銹靈和苯醚甲環唑有效成分分析方法報道有許多[4-6]。但目前同時檢測苯醚甲環唑·萎銹靈復配制劑的分析方法尚未見公開報道。本研究采用反向液相色譜法對2種有效成分同時進行測定，具有快速、準確、靈敏度高、重復性好的特點，適用于苯醚甲環唑和萎銹靈產品質量的檢測分析。

1 材料與方法

1.1 儀器設備

LC-20A高效液相色譜儀配有紫外檢測器，日本島津公司；XB-C18色譜柱［250 mm×4.6 mm（i.d），5 μm］，月旭科技（上海）股份有限公司；LabSolutions色譜工作站，日本島津公司；電子天平AL204，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；超聲波清洗器KH2200，昆山禾創超聲儀器有限公司；有機針式過濾器0.45 μm，上海安普實驗科技股份有限公司。

1.2 試劑

苯醚甲環唑標準品（純度98.9%）、萎銹靈標準品（純度98.0%），沈陽化工研究院；乙腈（色譜純），永華化學科技（江蘇）有限公司；純凈水，娃哈哈集團；冰醋酸（分析純），國藥集團化學試劑有限公司。

1.3 溶液配制

1.3.1 標樣溶液的配制

苯醚甲環唑標準品母液配制：稱取0.04 g（精確至0.000 2 g）苯醚甲環唑標準品于50 mL容量瓶中，加20 mL乙腈超聲溶解，冷卻到室溫后用乙腈稀釋至刻度，搖勻待用。

混合標準溶液的配制：稱取0.04 g（精確至0.000 2 g）萎銹靈標準品于100 mL容量瓶中，用移液管移取5.0 mL苯醚甲環唑標準品母液于容量瓶中，加20 mL乙腈超聲溶解，冷卻到室溫后用乙腈稀釋至刻度，搖勻待用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取含萎銹靈0.04 g（精確至0.000 2 g）的樣品于100 mL容量瓶中，加20 mL乙腈超聲溶解，冷卻到室溫后用乙腈稀釋至刻度，搖勻過膜待用。

1.4 色譜分析條件

流動相：乙腈-水-冰醋酸（80∶19.5∶0.5，V/V/V），經濾膜過濾，并進行脫氣；柱溫：（30±2）℃；檢測波長：230 nm；流速：1.0 mL/min；進樣體積：5 L。在上述色譜條件下，萎銹靈和苯醚甲環唑保留時間分別約為4.4和5.3 min（見圖1、圖2）。

圖1 萎銹靈和苯醚甲環唑混合標樣高效液相色譜圖

圖2 33%苯醚甲環唑·萎銹靈懸浮種衣劑試樣高效液相色譜圖

1.5 測定

在1.4所述的色譜操作條件下，待儀器基線穩定后，連續注入數針標樣溶液，直到相鄰2針的相對響應值變化小于1.5%，按下列順序進行測定：混合標準溶液，試樣溶液，試樣溶液，混合標準溶液。

1.6 計算

取2針平行試樣溶液和試樣峰面積的平均值，按式（1）計算試樣中2種有效成分的質量分數w。

式中：A1、A2分別表示標樣、試樣峰面積平均值，mAU·min；m1表示萎銹靈（苯醚甲環唑）標準品質量，g；m2為萎銹靈（苯醚甲環唑）試樣質量，g；P為萎銹靈（苯醚甲環唑）標準品的質量分數，%。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

綜合考慮萎銹靈和苯醚甲環唑紫外光譜吸收值大小，及萎銹靈與苯醚甲環唑含量比值（10/1），選取檢測波長230 nm。該波長下靈敏度較高，雜質干擾少，能滿足分析要求。

方法選擇C18這類常用色譜柱，使用不同比例的乙腈-水，并用醋酸調節流動相的pH，最后確定三者比例乙腈-水-醋酸為80∶19.5∶0.5（V/V/V）最合適，該條件下分析時間短和分離效果好。

2.2 方法線性相關性分析

配制5個不同濃度梯度的萎銹靈、苯醚甲環唑標準溶液，按1.4所述的色譜條件進樣分析，每個濃度分析2次，求其平均值。以萎銹靈（苯醚甲環唑）峰面積（y）為縱坐標，以萎銹靈（苯醚甲環唑）的質量濃度（x）為橫坐標作圖，得到萎銹靈（苯醚甲環唑）的線性方程，數據結果見表1和表2。萎銹靈線性回歸方程：y=14 184x＋40 650，R2=0.999 7；苯醚甲環唑線性回歸方程：y=37 909x-949.1，R2=0.999 7。二者的R2值均大于0.999，可見本文方法在萎銹靈和苯醚甲環唑的所測濃度范圍內，線性關系良好。

表1 萎銹靈線性關系

表2 苯醚甲環唑線性關系

2.3 方法的精密度分析

任取一批33%苯醚甲環唑·萎銹懸浮種衣劑試樣，按本研究中的方法連續測定萎銹靈和苯醚甲環唑含量，分別計算平均值、標準偏差、變異系數、精密度，結果見表3。萎銹靈和苯醚甲環唑的標準偏差分別為0.101 1%和0.024 1%，變異系數分別為0.334%和0.758%。則該方法的重現性好，精密度高。

表3 方法的精密度試驗

2.4 方法的準確度試驗

在空白試樣中添加不等量的苯醚甲環唑、萎銹靈標樣，配成不同含量的試樣，測定回收率，見表4。苯醚甲環唑和萎銹靈回收率分別在99.6%～101.1%和99.3%～101.7%之內，滿足NY/T 2887—2016《農藥產品質量分析方法確認指南》[7]對定量分析中回收率的要求。

表4 方法準確度試驗結果

3 結 論

本研究建立了高效液相色譜快速測定33%苯醚甲環唑·萎銹靈懸浮種衣劑的分析方法。試驗結果表明，該方法操作簡便、快速，線性關系良好、準確度和精密度高，是工業化大生產對萎銹靈和苯醚甲唑產品質量控制的實用方法。