25%吡唑醚菌酯懸浮劑在金銀花上的殘留行為及膳食風險評估

王俊曉 ，安 莉 ，馬 歡 ，許海康 ，馬婧瑋 ，汪 紅 ，吳緒金 ，楊 靜 ，李 萌 *

（1.河南中醫藥大學藥學院，鄭州 450046；2.河南省農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所/河南省糧食質量安全與檢測重點實驗室，鄭州 450002）

金銀花為常用中藥材之一，主要作用是清熱解毒、疏散風熱[1]。近年來，受疫情因素的影響，金銀花的市場需求量進一步增大，但隨著人工種植面積的增加，病蟲害問題更加突顯，尤其是白粉病愈加突出[2]。目前，金銀花種植戶主要采取化學農藥進行防治，但由于缺乏專業的培訓，用藥不規范，造成作物中農藥殘留超標，加重了對生態環境和人類身體健康的危害。吡唑醚菌酯作為德國巴斯夫公司生產的新型殺菌劑，被廣泛用于黃瓜、草莓、苦瓜等作物上白粉病的防治，其主要作用方式是通過阻止病菌線粒體呼吸作用，使病菌體內供給細胞的正常代謝活動所需的能量減少，從而造成細胞的死亡[3-4]。

目前關于吡唑醚菌酯的研究主要包括對柑橘[5]、蘋果[6]、草莓[7]、桃[8]等作物的病蟲害防效，以及采用氣相色譜、液相色譜及串聯質譜測定吡唑醚菌酯在作物上的殘留量。例如，楊茜茹等[9]選用乙腈作為提取液利用C18固相萃取柱和石墨化碳黑/氨基雙層固相萃取柱，采用氣相色譜檢測小麥樣品中吡唑醚菌酯殘留量。喻歆茹等[10]選用1.0%甲酸乙腈提取草莓樣品，采用分散固相萃取凈化，借助氣相色譜串聯質譜，測定吡唑醚菌酯的殘留量。劉霞等[11]選用乙腈提取蘋果樣品，經弗羅里硅土固相萃取柱凈化，在波長為275 nm情況下，借助高效液相色譜配合紫外檢測器測定吡唑醚菌酯的殘留量。在膳食風險評估方面，有研究報道桑椹中吡唑醚菌酯在各個年齡段上的慢性膳食攝入風險為3.7%～22.3%[12]；小白菜、油麥菜和西葫蘆中吡唑醚菌酯的長期攝入風險在0.7%～8.0%[13]。除此之外，吡唑醚菌酯在刺梨[14]、豇豆[15]和桑椹[12]等作物中的消解規律也有所報道。然而，關于吡唑醚菌酯在金銀花上殘留檢測消解動態和膳食風險評估鮮少報道。本研究采用超高效液相色譜三重四極桿質譜儀對金銀花中吡唑醚菌酯的殘留量進行檢測，分析其殘留消解動態，并對吡唑醚菌酯在普通消費人群中的膳食風險進行評估，旨在為指導吡唑醚菌酯在金銀花上的合理使用提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

供試試劑。25%吡唑醚菌酯SC，河南遠見農業科技有限公司；吡唑醚菌酯標準品（純度99.0%），德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司；甲酸（色譜純），CNW Technologies；乙腈（色譜純），默克股份兩合公司；氯化鈉（分析純），國藥集團化學試劑有限公司；N-丙基乙二胺固相吸附劑（PSA）、十八烷基硅烷鍵合相吸附劑（C18），天津博納艾杰爾科技有限公司；提取溶液1（乙腈10 mL＋水10 mL）、提取溶液2（乙腈溶液10 mL＋水20 mL）。

供試儀器。LC/MS-8050超高效液相色譜-三重四極桿質譜聯用儀，日本島津儀器公司；TARGIN?VX-Ⅲ多管渦旋振蕩器，北京踏錦科技有限公司；DHG-9140A電熱鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司；TDZ5-WS臺式低速離心機，湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司。

1.2 田間試驗方案

按照NY/T 788—2018《農作物中農藥殘留試驗準則》要求，田間試驗于2020年進行，試驗地點詳見表1。將25%吡唑醚菌酯SC于金銀花白粉病初發時噴霧施藥。本試驗施藥劑量按農藥標簽規定設為250 mg/kg，施藥2次，施藥間隔7 d。于最后1次施藥后間隔2 h，3、5、7、10 d采集金銀花樣品進行消解試驗；于最后1次施藥后間隔7、10 d采集金銀花樣品進行最終殘留試驗。隨機在金銀花植株的不同部位采集生長正常、無病害的金銀花1.5 kg。將金銀花樣品均分為2組，其中一組用電熱鼓風干燥箱烘干制成金銀花（干）樣品，另一組為金銀花（鮮）樣品，均置于-20℃冰柜保存。烘干方式：溫度設置為35℃，預熱30 min，金銀花樣品置于電熱鼓風干燥箱，35℃維持1.5 h；溫度升高到40℃，維持10 h；溫度升高到50℃，維持10 h；溫度升高到55℃，維持2 h，烘干時間總共為24 h。

表1 試驗信息

1.3 提取及凈化

準確稱取5.00 g金銀花樣品于100 mL離心管中，金銀花（鮮）加入提取溶劑1，金銀花（干）加入提取溶劑2，分別加入2.5 g氯化鈉，混勻后震蕩提取10 min，靜置5 min后于4 000 r/min離心10 min；取2 mL上清液置于含有0.03 g C18和0.02 g PSA吸附劑的5 mL離心管中，渦漩混勻2 min，4 000 r/min離心5 min，過0.22 μm濾膜待測。

1.4 儀器條件

色譜條件。液相色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Aq（3.0 mm ×100 mm，3.5 μm）；柱溫：40℃；流速：0.3 mL/min；進樣量：1 μL。梯度洗脫條件見表2。

表2 梯度洗脫條件

質譜條件。掃描方式：電噴霧離子源ESI＋；CID氣：270 Kpa；霧化氣流速：3.0 L/min；加熱氣流速：10 L/min；接口溫度：300℃；DL溫度：250℃；加熱塊溫度：400℃；多反應監測模式（MRM）。吡唑醚菌酯定性離子對：387.9/163.2（m/z），碰撞電壓：25 eV；定量離子對：387.9/194.25（m/z），碰撞電壓：14 eV。

1.5 標準溶液制備

稱取0.010 1 g吡唑醚菌酯標準品至燒杯中，加入乙腈溶解，并用10 mL容量瓶定容，制成1 000 mg/L標準儲備液。分別用乙腈、金銀花（鮮）空白基質溶液和金銀花（干）空白基質進行稀釋，稀釋成0.005、0.01、0.05、0.1、0.2 mg/L系列基質標準溶液，在1.4條件下進行檢測。

1.6 添加回收測定

將濃度為0.01、0.1、1 mg/kg的吡唑醚菌酯標準溶液分別加入金銀花空白對照樣品中，每檔濃度重復5次，按照1.4所述分析方法測定，并計算相對標準偏差（RSD）。

1.7 數據處理

基質效應。關于基質效應（ME）評價，需對標準曲線間斜率的比值按式（1）計算。

2 結果與分析

2.1 方法驗證

吡唑醚菌酯在金銀花（鮮）和金銀花（干）中基質效應ME值分別為30%和22%，基質效應在20%～50%范圍內。根據基質效應評價標準，均屬于中等基質效應，因此可選用金銀花空白基質溶液配制標準溶液并進行定量分析。

在0.005～0.2 mg/L范圍內，基質標準溶液的質量濃度（x）與其峰面積（y）間的線性關系良好。金銀花（鮮）的線性回歸方程為y=57 684 904.195 5x＋214 657.593 7，R2=0.999 5；金銀花（干）線性回歸方程為y=62 037 055.927 6x＋822 620.717 3，R2=0.998 4。

當吡唑醚菌酯的添加水平為0.01、0.1、1 mg/kg時，金銀花（鮮）的平均回收率為102%～108%，RSD為1.3%～1.4%；金銀花（干）的平均回收率為76%～80%，RSD為0.9%～2.4%。吡唑醚菌酯在金銀花中的定量限均為0.01 mg/kg，符合NY/T 788—2018《農作物中農藥殘留試驗準則》[18]規定，適用于殘留分析研究。

2.2 吡唑醚菌酯在金銀花中的消解行為

于2020年在河南焦作、湖南長沙兩地進行吡唑醚菌酯殘留消解試驗。吡唑醚菌酯在金銀花中的消解動態曲線符合一級動力學方程（圖1）。其中，河南焦作金銀花（鮮）和金銀花（干）半衰期分別為2.7和4.3 d，湖南長沙金銀花（鮮）和金銀花（干）半衰期分別為2.1和2.2 d（表3）。

圖1 吡唑醚菌酯在金銀花上的消解動態曲線

表3 吡唑醚菌酯在金銀花中的消解趨勢

2.3 吡唑醚菌酯在金銀花中的最終殘留量

于2020年在河南、湖南、山東、湖北四地進行最終殘留試驗。河南焦作的金銀花（鮮）和金銀花（干）中吡唑醚菌酯的最終殘留量分別為0.017～0.031 mg/kg和0.059～0.10 mg/kg；湖南長沙的金銀花（鮮）和金銀花（干）中吡唑醚菌酯的最終殘留量分別為0.019～0.060 mg/kg和0.035～0.092 mg/kg；山東泰安的金銀花（鮮）和金銀花（干）中吡唑醚菌酯的最終殘留量分別為0.028～0.041 mg/kg和0.13～0.21 mg/kg；湖北荊州的金銀花（鮮）和金銀花（干）中的吡唑醚菌酯最終殘留量分別為0.013～0.024 mg/kg和＜0.037 mg/kg。由于各個試驗地點的氣候、溫度、光照等天氣因素差異較大；不同品種的金銀花，導致作物形態有所區別，兩者共同作用使得吡唑醚菌酯降解存在差距，造成不同試驗地點的最終殘留量的差別[19-20]。

結果還顯示，河南焦作、湖南長沙、山東泰安和湖北荊州地區的吡唑醚菌酯在金銀花中的殘留量均隨著時間的延長而逐漸減少，說明吡唑醚菌酯在金銀花上的殘留量與采收時間呈負相關。

2.4 吡唑醚菌酯在金銀花中的膳食風險評估

國際食品法典委員會（CAC）和我國未規定金銀花中吡唑醚菌酯的最大殘留限量[22]。為指導吡唑醚菌酯在金銀花上的合理使用，需對其進行膳食風險評估?；谠囼炇仪捌趯︴r黃花菜和楊梅中吡唑醚菌酯的殘留結果，得到其對應的淺色蔬菜和水果規范殘留試驗中值（STMR）分別為0.097和0.89 mg/kg。居民體重以63 kg計，我國規定吡唑醚菌酯的每日允許攝入量（ADI）為0.03 mg/kg bw，最后1次施藥后間隔7 d時，吡唑醚菌酯在金銀花上的規范STMR值為0.10 mg/kg，通過風險評估模型（表4）計算出普通人群吡唑醚菌酯的國家估算每日攝入量（NEDI）為1.422 9 mg，占日允攝入量的75.29%，表明吡唑醚菌酯的殘留量對一般消費人群健康危害是可接受的。

表4 金銀花中吡唑醚菌酯的膳食風險評估結果

3 結論與討論

當基質效應的絕對值范圍在0～20%時，屬于弱基質效應；范圍為20%～50%時，屬于中等基質效應；大于50%，屬于強基質效應。本試驗吡唑醚菌酯的|ME|在20%～50%的范圍內，屬于中等基質效應。在使用高效液相色譜串聯質譜法分析金銀花中吡唑醚菌酯殘留量時，建議使用基質標準曲線進行定量。

金銀花（干）原始沉積量和最終殘留量相對金銀花（鮮）較高，可能是由于吡唑醚菌酯的熱穩定性較好，在金銀花烘干過程中，溫度對吡唑醚菌酯殘留量降解影響小。再者，烘干后金銀花（干）較金銀花（鮮）含水量低，對吡唑醚菌酯殘留量起到一定濃縮作用，導致單位質量下金銀花（干）的殘留量較高。吡唑醚菌酯在金銀花（鮮）上的半衰期為2.1～2.7 d，在金銀花（干）上的半衰期為2.2～4.3 d，吡唑醚菌酯的半衰期均小于30 d，屬于易消解類農藥。此外，金銀花的半衰期在兩地之間差異并不明顯，原因可能是溫度或氣候對吡唑醚菌酯殘留量的降解影響較小。已有文獻報道吡唑醚菌酯在鐵皮石斛[22]、人參[23]、蒔蘿[24]和山藥[25]中的半衰期分別為38.1、0.2～8.4、2.7～10.1和4.3～9.9 d，由此可以看出吡唑醚菌酯在金銀花上的半衰期與人參、蒔蘿和山藥相似，但明顯短于鐵皮石斛。

25%吡唑醚菌酯SC在防治金銀花病害時，當制劑施藥劑量為250 mg/kg，施藥2次，施藥間隔7 d，采收間隔期7 d時，金銀花（鮮）和金銀花（干）中的吡唑醚菌酯國家估算每日攝入量（NEDI）為1.422 9 mg，占日允許攝入量的75.29%，對一般消費人群健康危害是可接受的。