獼猴桃籽油抗氧化活性及其脂肪酸組分的研究

邱燕燕，余 算，原 琦，朱啟堯，孫 蜜，陳 宇

（貴州醫(yī)科大學(xué)環(huán)境污染與疾病監(jiān)控教育部重點實驗室 公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

0 引言

獼猴桃（Actinide chinensis），又叫奇異果，營養(yǎng)豐富，富含維C，果實中鈣、鉀、硒、食用纖維及氨基酸含量較高，并具有一定的降血脂、防癌、提高免疫力、抗氧化等作用[1-2]。我國是獼猴桃原產(chǎn)國，獼猴桃種植主要分布在陜西、湖南、貴州等中南部，分布范圍廣、種植面積大，獼猴桃的產(chǎn)量在世界最高，因此獼猴桃相關(guān)產(chǎn)品的加工業(yè)也隨之發(fā)展起來[3]。隨著獼猴桃的深加工領(lǐng)域逐漸拓寬，市面上獼猴桃的果汁飲品不計其數(shù)，人們將其做成果汁、果酒、果醬、果干等多種美味產(chǎn)品，同時產(chǎn)生的大量的果渣常被丟棄，造成資源浪費[4]。

獼猴桃籽作為獼猴桃加工的副產(chǎn)物，具有豐富的營養(yǎng)價值和保健功效。有研究發(fā)現(xiàn)，獼猴桃籽油在醫(yī)學(xué)方面具有降血脂、軟化血管的功效；在美容方面，因其抗氧化功能而產(chǎn)生延緩衰老的功效；同時，在保健食品行業(yè)也非常廣泛的用途[5-6]。獼猴桃籽油中含有豐富的亞麻酸和亞油酸[7]，亞麻酸作為一種功能性油脂，對于維系人類腦組織進化有著重要作用，也能夠有效抑制血栓性疾病[8]。以“海沃德”獼猴桃籽為研究對象，對獼猴桃籽油的抗氧化活性及其脂肪酸的組分進行分析，旨在為獼猴桃籽油保健功能的開發(fā)利用提供更多的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

獼猴桃籽，品種為海沃德，購自陜西裕德現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技有限公司。

抗壞血酸、無水乙醇、福林酚試劑、ABTS、DPPH、Tris-HCl緩沖液、過硫酸鉀、水楊酸、鄰苯三酚，沃爾森生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 儀器與設(shè)備

BPG-9070A型精密鼓風干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；M150B型多功能粉碎機，拜杰家居有限公司產(chǎn)品；全自動酶聯(lián)免疫系統(tǒng)，濟南卓隆生物科技有限公司產(chǎn)品；B220型電熱恒溫水浴鍋，上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；HP6890/5975C型GC/MS聯(lián)用儀，美國安捷倫公司產(chǎn)品。

1.3 獼猴桃籽油抗氧化活性的測定

1.3.1 DPPH·清除試驗方法[9-10]

用無水乙醇將獼猴桃籽油配制成質(zhì)量濃度為10，30，50，70，90 mg/mL的溶液，選取維C為陽性對照，配制質(zhì)量濃度與樣品質(zhì)量濃度一致，同時用蒸餾水做空白對照。取3 mL樣品溶液和濃度為0.2 mmol/L的DPPH溶液2 mL，充分混合后暗處靜置30 min，于波長517 nm處測定吸光度，作為A1；A2表示樣品溶液3 mL和無水乙醇溶液2 mL混合后的吸光度；A3表示蒸餾水3 mL和DPPH溶液2 mL混合后的吸光度。

計算公式：

1.3.2 ABTS+·清除試驗方法

參照王芳等人[11]的研究方法配制ABTS+工作液，其中獼猴桃籽油的質(zhì)量濃度和維E溶液的質(zhì)量濃度均配制成5，10，15，20，30 mg/mL的溶液，以無水乙醇為空白對照，維E為陽性對照。分別取樣品溶液1 mL和ABTS+工作液4 mL混合避光30 min后于波長734 nm處分別測定溶液的吸光度（A1），空白對照（A2）用無水乙醇溶液1 mL取代樣品溶液，每組試驗均做3次平行。

計算公式：

1.3.3 羥基自由基（·OH）清除試驗

用無水乙醇將獼猴桃籽油分別配制成質(zhì)量濃度12，16，20，24，28 mg/mL的溶液，具體測定方法參照劉清清[12]文獻中的方法進行。其中，陽性對照采用同質(zhì)量濃度的維C溶液，空白對照采用蒸餾水替代樣品溶液，每組試驗做3次平行。

計算公式：

式中：A1——獼猴桃籽油溶液（或是維C溶液）1 mL與FeSO4溶液1 mL、水楊酸乙醇1 mL溶液、H2O2溶液1 mL混合后的吸光度；

A2——獼猴桃籽油溶液（或是維C溶液）1 mL與FeSO4溶液1 mL、水楊酸乙醇1 mL溶液、無水乙醇溶液1 mL混合后的吸光度；

A3——蒸餾水3 mL與FeSO4溶液1 mL、水楊酸乙醇溶液1 mL、H2O2溶液1 mL混合后的吸光度。

1.3.4 超氧陰離子自由基（O2-·）清除試驗

參照李加興等人[13]的方法，其中用無水乙醇將獼猴桃籽油分別配制成質(zhì)量濃度為3，6，9，12，15 mg/mL的溶液，其中陽性對照采用同質(zhì)量濃度的維C溶液，空白對照采用蒸餾水替代樣品溶液，每組試驗做3次平行。

1.4 獼猴桃籽油組分的測定方法

1.4.1 色譜條件

色譜柱為Agilent 19091F-433 HP-FFAP彈性石英毛細管柱，由初始溫度為40℃（保留2 min）以4℃/min的速度升溫至220℃，保持19 min，運行時間66 min；汽化室溫度230℃；載氣為高純He（99.999%）；柱前壓7.05 psi，載氣流量1.0 mL/min，分流，溶劑延遲時間：3 min，分流比為30∶1。

1.4.2 質(zhì)譜條件

質(zhì)譜條件參數(shù)參照劉子記等人[14]的方法，并稍作修改。所用離子源為EI源，離子源的溫度和四極桿溫度分別設(shè)置為230℃和150℃，電子能量為70 eV，發(fā)射電流為34.6μA，倍增器電壓為1 871 V，接口溫度設(shè)置為240℃，質(zhì)量范圍29～500 amu。樣品中各種揮發(fā)性的化學(xué)成分是通過將總離子流圖中的各峰與質(zhì)譜計算機數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索，以及核對Nist17和Wiley275標準質(zhì)譜圖來確定的，用峰面積歸一化法測定各化學(xué)成分的相對質(zhì)量分數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 獼猴桃籽油抗氧化活性的分析

2.1.1 獼猴桃籽油對DPPH自由基的清除能力

獼猴桃籽油和維E對DPPH自由基的清除作用見圖1。

由圖1可知，獼猴桃籽油和維E溶液的質(zhì)量濃度與DPPH自由基的清除率呈正比。隨著獼猴桃籽油質(zhì)量濃度的增大，DPPH自由基的清除率可高達96.38%；由圖1（b）可知，當維E溶液質(zhì)量濃度高于10 mg/mL時，其DPPH自由基的清除率趨于平衡，維持在88%左右，說明增加獼猴桃籽油的質(zhì)量濃度可提高其DPPH自由基的清除作用，且清除能力可達到維E的清除能力。蔡程晨等人[15]研究了獼猴桃籽油微乳液的抗氧化活性，研究發(fā)現(xiàn)當獼猴桃籽油微乳液質(zhì)量濃度為200 mg/mL時，對DPPH自由基的清除率可達到90%左右。以上結(jié)果分析可得出，獼猴桃籽油對DPPH自由基的清除率較好，故獼猴桃籽油溶液有清除DPPH自由基的作用。

圖1 獼猴桃籽油和維E對DPPH自由基的清除作用

2.1.2 獼猴桃籽油對ABTS+·的清除作用獼猴桃籽油和維E對ABTS+·的清除作用見圖2。

圖2 獼猴桃籽油和維E對ABTS+·的清除作用

由圖2可知，維E質(zhì)量濃度為5 mg/mL時，ABTS+·清除率已達到93%，且隨著維E質(zhì)量濃度增加，清除率幾乎無變化，已經(jīng)達到飽和。隨著獼猴桃籽油質(zhì)量濃度的增加，對ABTS+·的清除率逐漸增大，說明ABTS+·清除率與獼猴桃籽油質(zhì)量濃度呈現(xiàn)一定的線性關(guān)系。與維E相比，獼猴桃籽油對ABTS+·的清除作用相對較低。有研究表明[16]，取代基的供電子效應(yīng)和酚羥基周圍的空間位阻會嚴重影響酚類化合物的抗氧化活性，而維E的側(cè)鏈可以直接參與細胞的氧化還原過程，降低自由基的活力，故維E對ABTS+·的清除能力更強。

2.1.3 獼猴桃籽油對·OH的清除作用

獼猴桃籽油和維E對·OH的清除作用見圖3。

圖3 獼猴桃籽油和維E對·OH的清除作用

由圖3可知，·OH的清除率與獼猴桃籽油的質(zhì)量濃度存在一定的線性關(guān)系，隨著獼猴桃籽油質(zhì)量濃度的增加，雖然·OH的清除率增幅較小，但其清除率在不斷的增大。當獼猴桃籽油溶液質(zhì)量濃度為28 mg/mL時，對·OH的清除能力達到72.2%，表現(xiàn)出對·OH一定的清除能力。

2.1.4 獼猴桃籽油對O2-·的清除作用

獼猴桃籽油和維E對O2-·的清除作用見圖4。

圖4 獼猴桃籽油和維E對O2-·的清除作用

超氧陰離子自由基是評價抗氧化能力的重要指標之一，另有研究表明，超氧陰離子自由基在機體中少量存在時，可殺傷機體的有害菌，反之會影響健康[17-18]。由圖4可知，隨著獼猴桃籽油質(zhì)量濃度的增大，O2-·的清除能力不斷增強，當質(zhì)量濃度由3 mg/mL增大到15 mg/mL時，其清除率由44.05%上升到87.84%，清除效果有明顯的提高，量效關(guān)系較好。說明獼猴桃籽油對超氧陰離子自由基有良好的清除效果。

綜合以上結(jié)果可知，獼猴桃籽油對DPPH·、ABTS+·、·OH以及O2-·均有一定的清除作用，其中對DPPH·和O2-·的清除效果較明顯，說明獼猴桃籽油具有一定的抗氧化活性。

2.2 獼猴桃籽油中脂肪酸的組分分析

獼猴桃籽油脂肪酸組成見表1。

采用GC-MS對獼猴桃籽油的脂肪酸成分進行分析，由表1可知，獼猴桃籽油中脂肪酸主要有6種，分別為亞麻酸、亞油酸、油酸、棕櫚酸、硬脂酸、角鯊烯，其中亞麻酸、亞油酸、油酸、棕櫚酸含量較高，依次為50.96%，15.47%，14.61%，6.23%。其中不飽和脂肪酸含量高達為81.04%。研究表明，不飽和脂肪酸具有調(diào)節(jié)血脂、調(diào)節(jié)機體代謝、提高腦細胞活性等功效，對于人體的健康發(fā)揮著重要的作用[19-20]，故對獼猴桃籽油中不飽和脂肪酸保健功效的開發(fā)和利用具有重要意義。

由表1可知，獼猴桃籽油中亞麻酸的占比達50.96%，是不飽和脂肪酸中的主要成分，研究表明，亞麻酸對人體的健康有著重要作用，具有降血壓、降血脂、抗血栓、抗癌、保護視力等功效[21-22]。梁攀等人[23]對野生軟棗獼猴桃籽中脂肪酸進行分析發(fā)現(xiàn)亞麻酸含量為42.49%，低于研究中的海沃德品種。李可等人[24]對7個品種獼猴桃的脂肪酸組分進行了研究分析，得到海沃德獼猴桃籽出油率最高，且角鯊烯的相對百分含量也較高，以上結(jié)果說明海沃德獼猴桃籽油營養(yǎng)價值高，具有較大的開發(fā)價值。

表1 獼猴桃籽油脂肪酸組成/%

3 結(jié)論

通過對獼猴桃籽油的抗氧化活性及脂肪酸組分進行研究得出，獼猴桃籽油對4種不同的自由基均有一定的清除效果，其清除能力隨著獼猴桃籽油質(zhì)量濃度的增加而增加，所以獼猴桃籽油有較強的體外抗氧化能力。獼猴桃籽油的主要脂肪酸組成為亞油酸、油酸、亞麻酸、棕櫚酸，亞麻酸含量最高，為50.96%，并含有角鯊烯、硬脂酸等功能活性物質(zhì)，不飽和脂肪酸含量高達81.04%，說明獼猴桃籽油具有極大的利用價值。試驗僅對獼猴桃籽油的抗氧化能力和脂肪酸組分進行了研究，未涉及到獼猴桃籽油具體的應(yīng)用，下一步將對獼猴桃籽油的具體保健功效進行研究開發(fā)，為獼猴桃籽油相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)提供相關(guān)的理論依據(jù)。