獼猴桃籽油抗氧化活性及其脂肪酸組分的研究

邱燕燕，余 算，原 琦，朱啟堯，孫 蜜，陳 宇

（貴州醫科大學環境污染與疾病監控教育部重點實驗室 公共衛生學院，貴州 貴陽 550025）

0 引言

獼猴桃（Actinide chinensis），又叫奇異果，營養豐富，富含維C，果實中鈣、鉀、硒、食用纖維及氨基酸含量較高，并具有一定的降血脂、防癌、提高免疫力、抗氧化等作用[1-2]。我國是獼猴桃原產國，獼猴桃種植主要分布在陜西、湖南、貴州等中南部，分布范圍廣、種植面積大，獼猴桃的產量在世界最高，因此獼猴桃相關產品的加工業也隨之發展起來[3]。隨著獼猴桃的深加工領域逐漸拓寬，市面上獼猴桃的果汁飲品不計其數，人們將其做成果汁、果酒、果醬、果干等多種美味產品，同時產生的大量的果渣常被丟棄，造成資源浪費[4]。

獼猴桃籽作為獼猴桃加工的副產物，具有豐富的營養價值和保健功效。有研究發現，獼猴桃籽油在醫學方面具有降血脂、軟化血管的功效；在美容方面，因其抗氧化功能而產生延緩衰老的功效；同時，在保健食品行業也非常廣泛的用途[5-6]。獼猴桃籽油中含有豐富的亞麻酸和亞油酸[7]，亞麻酸作為一種功能性油脂，對于維系人類腦組織進化有著重要作用，也能夠有效抑制血栓性疾病[8]。以“海沃德”獼猴桃籽為研究對象，對獼猴桃籽油的抗氧化活性及其脂肪酸的組分進行分析，旨在為獼猴桃籽油保健功能的開發利用提供更多的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

獼猴桃籽，品種為海沃德，購自陜西裕德現代農業科技有限公司。

抗壞血酸、無水乙醇、福林酚試劑、ABTS、DPPH、Tris-HCl緩沖液、過硫酸鉀、水楊酸、鄰苯三酚，沃爾森生物技術有限公司提供。

1.2 儀器與設備

BPG-9070A型精密鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司產品；M150B型多功能粉碎機，拜杰家居有限公司產品；全自動酶聯免疫系統，濟南卓隆生物科技有限公司產品；B220型電熱恒溫水浴鍋，上海亞榮生化儀器廠產品；HP6890/5975C型GC/MS聯用儀，美國安捷倫公司產品。

1.3 獼猴桃籽油抗氧化活性的測定

1.3.1 DPPH·清除試驗方法[9-10]

用無水乙醇將獼猴桃籽油配制成質量濃度為10，30，50，70，90 mg/mL的溶液，選取維C為陽性對照，配制質量濃度與樣品質量濃度一致，同時用蒸餾水做空白對照。取3 mL樣品溶液和濃度為0.2 mmol/L的DPPH溶液2 mL，充分混合后暗處靜置30 min，于波長517 nm處測定吸光度，作為A1；A2表示樣品溶液3 mL和無水乙醇溶液2 mL混合后的吸光度；A3表示蒸餾水3 mL和DPPH溶液2 mL混合后的吸光度。

計算公式：

1.3.2 ABTS+·清除試驗方法

參照王芳等人[11]的研究方法配制ABTS+工作液，其中獼猴桃籽油的質量濃度和維E溶液的質量濃度均配制成5，10，15，20，30 mg/mL的溶液，以無水乙醇為空白對照，維E為陽性對照。分別取樣品溶液1 mL和ABTS+工作液4 mL混合避光30 min后于波長734 nm處分別測定溶液的吸光度（A1），空白對照（A2）用無水乙醇溶液1 mL取代樣品溶液，每組試驗均做3次平行。

計算公式：

1.3.3 羥基自由基（·OH）清除試驗

用無水乙醇將獼猴桃籽油分別配制成質量濃度12，16，20，24，28 mg/mL的溶液，具體測定方法參照劉清清[12]文獻中的方法進行。其中，陽性對照采用同質量濃度的維C溶液，空白對照采用蒸餾水替代樣品溶液，每組試驗做3次平行。

計算公式：

式中：A1——獼猴桃籽油溶液（或是維C溶液）1 mL與FeSO4溶液1 mL、水楊酸乙醇1 mL溶液、H2O2溶液1 mL混合后的吸光度；

A2——獼猴桃籽油溶液（或是維C溶液）1 mL與FeSO4溶液1 mL、水楊酸乙醇1 mL溶液、無水乙醇溶液1 mL混合后的吸光度；

A3——蒸餾水3 mL與FeSO4溶液1 mL、水楊酸乙醇溶液1 mL、H2O2溶液1 mL混合后的吸光度。

1.3.4 超氧陰離子自由基（O2-·）清除試驗

參照李加興等人[13]的方法，其中用無水乙醇將獼猴桃籽油分別配制成質量濃度為3，6，9，12，15 mg/mL的溶液，其中陽性對照采用同質量濃度的維C溶液，空白對照采用蒸餾水替代樣品溶液，每組試驗做3次平行。

1.4 獼猴桃籽油組分的測定方法

1.4.1 色譜條件

色譜柱為Agilent 19091F-433 HP-FFAP彈性石英毛細管柱，由初始溫度為40℃（保留2 min）以4℃/min的速度升溫至220℃，保持19 min，運行時間66 min；汽化室溫度230℃；載氣為高純He（99.999%）；柱前壓7.05 psi，載氣流量1.0 mL/min，分流，溶劑延遲時間：3 min，分流比為30∶1。

1.4.2 質譜條件

質譜條件參數參照劉子記等人[14]的方法，并稍作修改。所用離子源為EI源，離子源的溫度和四極桿溫度分別設置為230℃和150℃，電子能量為70 eV，發射電流為34.6μA，倍增器電壓為1 871 V，接口溫度設置為240℃，質量范圍29～500 amu。樣品中各種揮發性的化學成分是通過將總離子流圖中的各峰與質譜計算機數據系統檢索，以及核對Nist17和Wiley275標準質譜圖來確定的，用峰面積歸一化法測定各化學成分的相對質量分數。

2 結果與分析

2.1 獼猴桃籽油抗氧化活性的分析

2.1.1 獼猴桃籽油對DPPH自由基的清除能力

獼猴桃籽油和維E對DPPH自由基的清除作用見圖1。

由圖1可知，獼猴桃籽油和維E溶液的質量濃度與DPPH自由基的清除率呈正比。隨著獼猴桃籽油質量濃度的增大，DPPH自由基的清除率可高達96.38%；由圖1（b）可知，當維E溶液質量濃度高于10 mg/mL時，其DPPH自由基的清除率趨于平衡，維持在88%左右，說明增加獼猴桃籽油的質量濃度可提高其DPPH自由基的清除作用，且清除能力可達到維E的清除能力。蔡程晨等人[15]研究了獼猴桃籽油微乳液的抗氧化活性，研究發現當獼猴桃籽油微乳液質量濃度為200 mg/mL時，對DPPH自由基的清除率可達到90%左右。以上結果分析可得出，獼猴桃籽油對DPPH自由基的清除率較好，故獼猴桃籽油溶液有清除DPPH自由基的作用。

圖1 獼猴桃籽油和維E對DPPH自由基的清除作用

2.1.2 獼猴桃籽油對ABTS+·的清除作用獼猴桃籽油和維E對ABTS+·的清除作用見圖2。

圖2 獼猴桃籽油和維E對ABTS+·的清除作用

由圖2可知，維E質量濃度為5 mg/mL時，ABTS+·清除率已達到93%，且隨著維E質量濃度增加，清除率幾乎無變化，已經達到飽和。隨著獼猴桃籽油質量濃度的增加，對ABTS+·的清除率逐漸增大，說明ABTS+·清除率與獼猴桃籽油質量濃度呈現一定的線性關系。與維E相比，獼猴桃籽油對ABTS+·的清除作用相對較低。有研究表明[16]，取代基的供電子效應和酚羥基周圍的空間位阻會嚴重影響酚類化合物的抗氧化活性，而維E的側鏈可以直接參與細胞的氧化還原過程，降低自由基的活力，故維E對ABTS+·的清除能力更強。

2.1.3 獼猴桃籽油對·OH的清除作用

獼猴桃籽油和維E對·OH的清除作用見圖3。

圖3 獼猴桃籽油和維E對·OH的清除作用

由圖3可知，·OH的清除率與獼猴桃籽油的質量濃度存在一定的線性關系，隨著獼猴桃籽油質量濃度的增加，雖然·OH的清除率增幅較小，但其清除率在不斷的增大。當獼猴桃籽油溶液質量濃度為28 mg/mL時，對·OH的清除能力達到72.2%，表現出對·OH一定的清除能力。

2.1.4 獼猴桃籽油對O2-·的清除作用

獼猴桃籽油和維E對O2-·的清除作用見圖4。

圖4 獼猴桃籽油和維E對O2-·的清除作用

超氧陰離子自由基是評價抗氧化能力的重要指標之一，另有研究表明，超氧陰離子自由基在機體中少量存在時，可殺傷機體的有害菌，反之會影響健康[17-18]。由圖4可知，隨著獼猴桃籽油質量濃度的增大，O2-·的清除能力不斷增強，當質量濃度由3 mg/mL增大到15 mg/mL時，其清除率由44.05%上升到87.84%，清除效果有明顯的提高，量效關系較好。說明獼猴桃籽油對超氧陰離子自由基有良好的清除效果。

綜合以上結果可知，獼猴桃籽油對DPPH·、ABTS+·、·OH以及O2-·均有一定的清除作用，其中對DPPH·和O2-·的清除效果較明顯，說明獼猴桃籽油具有一定的抗氧化活性。

2.2 獼猴桃籽油中脂肪酸的組分分析

獼猴桃籽油脂肪酸組成見表1。

采用GC-MS對獼猴桃籽油的脂肪酸成分進行分析，由表1可知，獼猴桃籽油中脂肪酸主要有6種，分別為亞麻酸、亞油酸、油酸、棕櫚酸、硬脂酸、角鯊烯，其中亞麻酸、亞油酸、油酸、棕櫚酸含量較高，依次為50.96%，15.47%，14.61%，6.23%。其中不飽和脂肪酸含量高達為81.04%。研究表明，不飽和脂肪酸具有調節血脂、調節機體代謝、提高腦細胞活性等功效，對于人體的健康發揮著重要的作用[19-20]，故對獼猴桃籽油中不飽和脂肪酸保健功效的開發和利用具有重要意義。

由表1可知，獼猴桃籽油中亞麻酸的占比達50.96%，是不飽和脂肪酸中的主要成分，研究表明，亞麻酸對人體的健康有著重要作用，具有降血壓、降血脂、抗血栓、抗癌、保護視力等功效[21-22]。梁攀等人[23]對野生軟棗獼猴桃籽中脂肪酸進行分析發現亞麻酸含量為42.49%，低于研究中的海沃德品種。李可等人[24]對7個品種獼猴桃的脂肪酸組分進行了研究分析，得到海沃德獼猴桃籽出油率最高，且角鯊烯的相對百分含量也較高，以上結果說明海沃德獼猴桃籽油營養價值高，具有較大的開發價值。

表1 獼猴桃籽油脂肪酸組成/%

3 結論

通過對獼猴桃籽油的抗氧化活性及脂肪酸組分進行研究得出，獼猴桃籽油對4種不同的自由基均有一定的清除效果，其清除能力隨著獼猴桃籽油質量濃度的增加而增加，所以獼猴桃籽油有較強的體外抗氧化能力。獼猴桃籽油的主要脂肪酸組成為亞油酸、油酸、亞麻酸、棕櫚酸，亞麻酸含量最高，為50.96%，并含有角鯊烯、硬脂酸等功能活性物質，不飽和脂肪酸含量高達81.04%，說明獼猴桃籽油具有極大的利用價值。試驗僅對獼猴桃籽油的抗氧化能力和脂肪酸組分進行了研究，未涉及到獼猴桃籽油具體的應用，下一步將對獼猴桃籽油的具體保健功效進行研究開發，為獼猴桃籽油相關產品的開發提供相關的理論依據。