正交試驗優選復方痛風顆粒處方工藝*

唐勇琛 ，張亞洲 ，呂建偉

（1. 廣西壯族自治區柳州市中醫醫院·柳州市壯醫醫院，廣西 柳州 545000； 2. 貴州中醫藥大學藥學院，貴州貴陽 550025； 3. 廣西中醫藥大學第一附屬醫院，廣西 南寧 530000）

復方痛風顆粒是在柳州市中醫醫院痛風經驗方“健脾化濁湯”基礎上擬研發的純中藥制劑，具有促進尿酸排泄作用，臨床療效較好［1-4］。方中白術益氣健脾，燥濕利水，健運中焦，散精于肺，為君藥；紫蘇梗寬胸利膈，寬中和胃，解魚蟹毒，加強中焦運化，為臣藥；車前子、薏苡仁清熱利尿，利濕化濁，助尿酸從膀胱排泄，為佐藥；枇杷葉和胃降逆，肅降肺氣，使精氣得以正常運行，為使藥；諸藥合用，共奏健脾肅肺、利濕化濁之功效。臨床原以湯劑入藥，存在服用劑量大、患者順應性差、易霉變酸臭、攜帶貯存不便等缺點。為優化臨床對該方的使用，需將其開發為醫療機構中藥制劑，同時兼顧到實際生產應用，擬將其研制成顆粒劑。因此，在前期研究的基礎上，本研究中擬優化該制劑的最佳輔料及配比，考察不同輔料對顆粒成型性、吸濕性、溶化性和流動性的影響，同時采用正交試驗法優化處方工藝，以期為該制劑的開發利用提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GZX - DH500 - BS - Ⅱ型電熱恒溫干燥箱（蘇州市萊頓科學儀器有限公司）；DZF-6090 型多功能真空干燥箱（上海勝衛電子科技有限公司）；AB135-S 型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.1 mg）；LK - 1000A 型搖擺式高速中藥粉碎機（上海新諾儀器設備有限公司）。

1.2 試藥

糊精（藥用級，安徽淮南山河藥用輔料有限公司，批號為20161106）；可溶性淀粉（藥用級，西隴化工股份有限公司，批號為20160204）；蔗糖（食品級，廣西鳳糖生化股份有限公司，批號為20160408）；其余試劑均為分析純。白術（批號為20160106）、紫蘇梗（批號為20160201）、車前子（批號為20151128）、薏苡仁（批號為20151214）、枇杷葉（批號為20160217）飲片，均購自廣西仙茱中藥科技有限公司，經貴州中醫藥大學劉芃教授鑒定為正品，均符合2020 版《中國藥典（一部）》要求［5］69，107，213，354，393。

2 方法與結果

2.1 浸膏粉制備

按處方比例稱取各藥材適量，加水浸泡30 min，提取 3 次，分別加12，10，10 倍量水，均提取45 min，濾過，合并濾液，減壓濃縮得浸膏（相對密度1.26～1.30，80 ℃），60 ℃下減壓干燥，粉碎，過60目篩，即得［6］。

2.2 輔料初篩

以吸濕率為評價指標，選擇吸濕性相對較小且有助于成型、可溶性較好的輔料為處方輔料。分別稱取一定量的糖粉、糊精、可溶性淀粉及其混合輔料，于30 ℃烘箱中恒重48 h，稱取2 g，分別置已恒重的稱量瓶，在底部將其鋪開至約2 mm 厚度，將稱量瓶蓋打開，放入相對濕度為75%盛有氯化鈉過飽和溶液的玻璃干燥器內，于25 ℃條件下恒溫放置48 h，稱量并計算吸濕率，共做2 組，取平均值。結果見表1。可見，各種輔料中，糖粉∶糊精（1∶1，m/m）的吸濕率最低，因此初步確定使用糖粉∶糊精（1∶1，m/m）混合輔料作為成型輔料。

表1 相對濕度75%下各輔料48 h的吸濕率（%）Tab.1 Moisture absorption rate of various excipients within 48 h at 75% RH（%）

2.3 輔料選擇

采用濕法制粒，稱取2.1 項下浸膏粉和2.2 項下輔料適量，充分混勻，以適量80%乙醇為潤濕劑制軟材，以達到“手握成團，捏之即散”的狀態，以20 目篩制粒，60 ℃下減壓干燥2 h，整粒即得，并進行綜合評價［7］。

成型率測定：按2020 年版《中國藥典（四部）》通則0982 粒度和粒度分布測定法（第二法篩分法）進行測定［5］6，146，485。能通過一號篩且不能通過五號篩的顆粒即為合格顆粒。成型率（%）=合格顆粒質量/顆粒總質量×100%。

吸濕率測定：按2020 年版《中國藥典（四部）》通則9103 藥物引濕性試驗指導原則進行測定。取干燥的具塞玻璃稱量瓶，試驗前1 天置盛有氯化銨過飽和溶液的恒溫干燥器中［溫度為（25 ± 1）℃，相對濕度為（80± 2）%］，精密稱定質量（m1）；取適量樣品，均勻攤布于上述量瓶中（約2 mm厚），精密稱定質量（m2）；在上述恒溫恒濕條件下敞開稱量瓶，并與瓶蓋同時放置48 h，蓋好稱量瓶蓋子，精密稱定質量（m3），計算吸濕率。吸濕率（%）=（m3-m2）/（m2-m1）× 100%［5，8-9］。

溶解性測定：按2020 年版《中國藥典（四部）》制劑通則0104 顆粒劑（可溶顆粒檢查法）進行測定［5，10］。稱取樣品10 g，加70 ℃熱水200 mL，磁力攪拌直至顆粒完全溶解或有輕微渾濁，記錄所需時間。

流動性測定：采用固定漏斗法測定樣品的休止角（α）［10-12］。將3 只漏斗串聯固定于鐵架臺上，使其距離水平桌面上的坐標紙高度適宜，則最下方的漏斗下口端距離坐標紙的高度即為h。將樣品沿最上方的漏斗壁緩慢倒入，直至坐標紙上的樣品堆起并觸碰到最下方的一只漏斗的下口端為止，測量圓錐體底部的直徑2r。α=arctg（h/r）。

綜合評分及結果分析：上述各指標權重系數依次為0.25，0.25，0.25，0.25，綜合得分（%）= 粒度 / 最大粒度×0.25+最小吸濕率/吸濕率×0.25+最小溶解時間/ 溶解時間 × 0.25 + 最小休止角/ 休止角 ×0.25［8，13］。結果見表2。可見，糖粉∶糊精（1∶1，m/m）的綜合評分最高，故以其為本制劑的成型輔料。

表2 綜合評分結果Tab.2 Results of comprehensive scoring

2.4 正交試驗優選處方工藝

以輔料用量（浸膏粉∶輔料，g/g，因素A），乙醇體積分數（%，因素B），料液比（浸膏粉∶乙醇，g/mL，因素C）為考察因素，以成型率（最大值）、吸濕率、溶解時間和α（最小值）所得的綜合得分為考察指標，采用L9（34）正交試驗法考察。因素與水平見表3，正交試驗結果見表4，方差分析結果見表5。由表4 和表5 可見，各影響因素影響強度依次為A ＞B ＞C，且僅因素A 對結果有顯著影響（P＜0.05）。同時結合直觀分析，確定綜合得分最高的即為最佳處方，即A3B1C3，具體為浸膏粉（g）∶輔料（g）=1∶1，乙醇體積分數為80%，料液比為6∶1。

表3 因素與水平Tab.3 Factors and their levels

表4 L9（34）正交試驗設計與結果Tab.4 Design and results of the L9（34） orthogonal test

表5 方差分析結果Tab.5 Results of the ANOVA

2.5 驗證試驗

按優選的處方工藝制備3 批樣品，并進行驗證試驗［12-15］。結果平均成型率為97.50%（RSD=0.56%），平均吸濕率為8.45%（RSD= 1.56%），平均溶解時間為41.62 s（RSD=1.53%），α均值為32.34 °（RSD=1.42%）。顆粒劑的外觀性狀、粒度、水分、溶解性、流動性等均符合2020年版《中國藥典（四部）》制劑通則0104顆粒劑項下的要求，表明該處方工藝合理可行、穩定可靠。

2.6 顆粒劑臨界相對濕度測定

取干燥至恒重的樣品2 g，精密稱定，置恒重的敞口稱量瓶，共7 份，分別置放有氯化鋰（LiCl，相對濕度11.05%）、氯化鎂（MgCl2，相對濕度33.00%）、碳酸鉀（K2CO3，相對濕度42.76%）、溴化鈉（NaBr，相對濕度57.70%）、氯化鈉（NaCl，相對濕度75.28%）、氯化鉀（KCl，相對濕度 84.26%）、硝酸鉀（KNO3，相對濕度92.48%）的過飽和鹽溶液的玻璃干燥器中，于25 ℃條件下放置7 d，取出并稱定質量，計算吸濕率［9，16-19］。結果見表6。以相對濕度（%）為橫坐標（X）、吸濕率（%）為縱坐標（Y）繪制吸濕曲線，沿曲線兩端作切線，得2條切線的線性方程分別為Y1= 0.025 96X1+ 0.703 33 和Y2=1.064 48X2-76.882 82，此2條切線交點所對應的橫坐標值即為臨界相對濕度。結果見圖1。根據切線方程計算可得，樣品的臨界相對濕度為74.71%，即在整個生產及貯存過程中，周圍環境相對濕度須低于74.71%。

表6 不同相對濕度下樣品的吸濕率（%）Tab.6 Moisture absorption rate of samples at different RH（%）

圖1 樣品吸濕曲線圖Fig.1 Moisture absorption curve of sample

3 討論

目前，國家藥品監督管理局（NMPA）及藥品審評中心（CDE）對于醫療機構中藥制劑均有相關的工藝制備指導原則或指導規范。如NMPA《中藥注冊分類及申報資料要求》［20］中制劑成型工藝部分內容規定，應提供中間體、輔料研究及制劑處方篩選研究資料，明確所用輔料的種類、級別、用量等；提供成型工藝方法、主要工藝參數的確定依據等。CDE《中藥復方制劑生產工藝研究技術指導原則（試行）》［21］和《中藥新藥研究各階段藥學研究技術指導原則（試行）》［22］的成型研究部分內容規定，中藥復方制劑成型研究應根據制劑成型所用原料的性質和用量，結合用藥經驗、適應證等，選擇適宜的劑型、輔料、生產工藝及設備，明確所用輔料、成型工藝及其主要工藝參數等。因此，在傳統中醫藥理論的指導下，本研究中以NMPA 及CDE 發布的相關指導原則和技術要求為藍本，結合現代制劑研究開發技術，對該臨床經驗方進行二次開發，重點考察成型工藝所用原輔料的種類、性質、用量及其配比，不同輔料對顆粒成型性、吸濕性、溶化性和流動性的影響；同時還優選其處方工藝條件，考察輔料用量、乙醇體積分數及料液比等參數及其臨界相對濕度，最終將傳統湯劑研制成顆粒劑。

本研究中制備所得的中藥浸膏粉吸濕性較強，口感較苦，難以直接制粒和服用。盡管乳糖、甘露醇等輔料吸濕性小、溶解性好，但價格昂貴，且乳糖還易出現不耐受的癥狀［23］，不利于實際大生產和患者服用，因而不予考慮。為了改善口感和降低吸濕性，考慮以經濟易得的蔗糖為基礎輔料，同時輔以糊精、可溶性淀粉等吸濕性較小，成型性、流動性較好的其他輔料來改善其黏合和吸濕等情況。

預試驗中發現，浸膏相對密度在1.10～1.25（80 ℃）時，制粒所需輔料的量較多（超過浸膏的5 倍）；相對密度高于1.30（80 ℃）時，則浸膏過于黏稠，攪拌時，浸膏與輔料不易混勻且易粘壁；相對密度在1.26～1.30（80 ℃）時，制粒所需輔料的量和軟材軟硬均適中，且較易過篩成型。故本試驗中選擇浸膏的相對密度為1.26～1.30（80 ℃）。

預試驗中還對各因素水平進行了單因素考察。因素A，由于提取物出膏率約為25%，每次服用的生藥材量為30 g，故每次服用浸膏粉量約為7.5 g，而顆粒劑的口服單劑量一般為每包10～15 g，故加入輔料量約為2.5～7.5 g。故選擇浸膏粉與輔料的配比水平為3∶1，2∶1，1∶1。因素B，選擇50%，60%，70%，80%，90%的乙醇進行考察，當加入50%，60%，70%的乙醇時細粉較多，不易成團；加入80%，90%乙醇時，制得的軟材適中，可手握成團，捏之即散，故選擇水平為80%，85%，90%。因素C，選擇80%乙醇作潤濕劑，浸膏粉∶輔料（1∶1，m/m）時，發現料液比為10∶1，8∶1，6∶1 時較易制得軟材，故選擇這3個水平。

綜上所述，該處方工藝穩定可靠、簡便可行，所選輔料合理，所制得顆粒成型性高、吸濕性低、溶解性好、流動性好，符合2020 年版《中國藥典（四部）》制劑通則0104 顆粒劑項下檢查要求，可為該制劑的中試及大生產提供理論依據。