circ_0000285靶向miR-127-5p調(diào)控阿爾茨海默病細(xì)胞模型的損傷①

劉 潔 米亞靜 張 典 史宏恩 （西安醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部，西安 710021）

阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）是最常見(jiàn)的進(jìn)行性神經(jīng)退行性疾病，以認(rèn)知障礙、學(xué)習(xí)和記憶缺陷以及語(yǔ)言技能喪失為特征，是危害全球老年人健康的重大疾?。?］。近年來(lái)雖然AD 的診斷和治療研究不斷發(fā)展，但仍缺乏抑制AD 進(jìn)展的有效策略。環(huán)狀RNA（circRNA）是由前體RNA反向剪切形成的共價(jià)封閉轉(zhuǎn)錄本，其通過(guò)與特定的微小RNA（miRNA）結(jié)合發(fā)揮內(nèi)源性miRNA 抑制劑作用包括AD 等神經(jīng)退行性疾病的發(fā)展中發(fā)揮重要作用［2-3］。研究顯示，circ_0000950 在體外AD 模型中可促進(jìn)神經(jīng)元凋亡和炎癥反應(yīng)，抑制神經(jīng)突生長(zhǎng)［4］。研究發(fā)現(xiàn)circ_0000285 表達(dá)增加對(duì)喉癌、膀胱癌進(jìn)展具有抑制作用。在糖尿病腎病小鼠模型中，circ_0000285表達(dá)增加并促進(jìn)足細(xì)胞損傷［5］。然而，circ_0000285 在AD 進(jìn)展中的潛在作用及機(jī)制尚不清楚。miR-127-5p 是一類短鏈非編碼RNA，研究顯示骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞中miR-127-5p 表達(dá)降低，上調(diào)其表達(dá)可促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖并抑制炎癥反應(yīng)［6］。circRNA 33186 直接結(jié)合并抑制miR-127-5p 表達(dá)參與骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)展［7］。本研究通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)miR-127-5p 是circ_0000285 的潛在靶點(diǎn)，于是假設(shè)miR-127-5p可能參與circ_0000285介導(dǎo)的AD進(jìn)展。本研究以Aβ25-35誘導(dǎo)SK-N-SH細(xì)胞建立AD細(xì)胞模型，旨在探討circ_0000285 靶向miR-127-5p 對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的SK-N-SH細(xì)胞損傷的作用和分子機(jī)制［8］。

1 材料與方法

1.1 材料 神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SK-N-SH 購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究所細(xì)胞資源中心；Aβ25-35（超純水將Aβ25-35 凍干粉制成1 mmol/L 儲(chǔ)存液保存在-20 ℃冰箱備用，使用前稀釋至所需濃度）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green 試劑盒購(gòu)自大連TaKaRa 生物公司；TRIzol 試劑、二喹啉甲酸（BCA）試劑盒、丙二醛（MDA）含量檢測(cè)試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性檢測(cè)試劑盒、膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素（Annexin V-FITC）/碘化丙啶（PI）細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京百奧萊博生物公司；miRNA 模擬物（mimics）、miRNA 抑制物（anti-miR）、小干擾RNA（si-RNA）、過(guò)表達(dá)載體（pcDNA-RNA）由上海生工公司提供；鼠抗人B 細(xì)胞淋巴瘤（Bcl-2）單克隆抗體、鼠抗人Bcl 相關(guān)x 蛋白（Bax）單克隆抗體、鼠抗人磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）單克隆抗體、羊抗鼠IgG二抗購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和模型構(gòu)建 SK-N-SH 細(xì)胞采用補(bǔ)充10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素雙抗的DMEM 培養(yǎng)基在37 ℃、含5% CO2濕潤(rùn)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將對(duì)數(shù)期SK-N-SH 細(xì)胞接種6 孔板，用含5 μmol/L Aβ25-35 的DMEM 培養(yǎng)基孵育細(xì)胞24 h 建立AD細(xì)胞模型。

1.2.2 實(shí)時(shí)定量PCR（RT-qPCR）檢測(cè)circ_0000285 和miR-127-5p 表達(dá)量 參照TRIzol 試劑使用說(shuō)明提取AD 模型細(xì)胞中的總RNA，紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD260進(jìn)行RNA 樣品定量。每組取1 μg 的RNA 樣品通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行cDNA 合成，然后利用SYBR Green試劑盒對(duì)cDNA產(chǎn)物進(jìn)行RT-qPCR。采用2-ΔΔCt方法計(jì)算circ_0000285（內(nèi)參為GAPDH）和miR-127-5p（內(nèi)參為U6）表達(dá)量。U6正向引物5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，反向引物5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'；GAPDH 正 向 引 物5'-CCTTCTCTTGTGTGACAAAGTGGACA-3'，反向引物5'-CATTTGATGTTAGCGGGATCTCG-3'；circ_0000285 正向引物5'-TACCTCTGCAGGCAGGAACT-3'，反向引物5'-TCACATGAATTTAGGTGGGACTT-3'；miR-127-5正向引物5'-GCCGAGCTGAAGCTCAGAGG-3'，反向引物5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'。

1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和實(shí)驗(yàn)分組 將對(duì)數(shù)期SK-N-SH細(xì)胞接種于6 孔板，細(xì)胞匯合度達(dá)50%時(shí)利用脂質(zhì)體Lipofectamin 2000 將si-circ_0000285、si-NC、miR-127-5p mimics、miR-NC 分別轉(zhuǎn)染至細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48 h后收獲細(xì)胞。用含5 μmol/L Aβ25-35的DMEM 培養(yǎng)基處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h，根據(jù)轉(zhuǎn)染序列不同分為AD+si-circ_0000285 組、AD+si-NC 組、AD+miR-127-5p組、AD+miR-NC 組。未轉(zhuǎn)染SK-N-SH 細(xì)胞采用5 μmol/L 的Aβ25-35 處理24 h 記為AD 組，未處理SK-N-SH細(xì)胞記為對(duì)照（Con）組。

1.2.4 試 劑 盒 檢 測(cè)MDA 水 平、SOD 和GSH-Px 活性 收集各組SK-N-SH 細(xì)胞至離心管，離心棄上清。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)加入提取液，冰浴、超聲波破碎細(xì)胞，4 ℃、10 000 r/min 離心10 min，收集上清置于冰上。按照各個(gè)試劑盒操作步驟分別測(cè)定MDA水平、SOD和GSH-Px活性。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 采用500 μl 結(jié)合緩沖液重懸各組細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105個(gè)/ml，依次加入5 μl 的Annexin V-FITC 以及5 μl 的PI，暗室孵育30 min后，1 h內(nèi)采用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡情況（Annexin-V染色陽(yáng)性細(xì)胞為凋亡細(xì)胞）。

1.2.6 Western blot 分析Bcl-2和Bax蛋白表達(dá) 以RIPA 緩沖液提取細(xì)胞中總蛋白，BCA 試劑盒測(cè)定每個(gè)樣品的濃度。取20 μg 蛋白樣品進(jìn)行SDSPAGE 凝膠電泳，并轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯（PVDF）膜。PVDF膜采用5%脫脂牛奶封閉2 h后，用一抗在4 ℃孵育膜過(guò)夜，再用適當(dāng)?shù)亩乖谑覝叵路跤? h。化學(xué)發(fā)光試劑盒進(jìn)行顯色反應(yīng)，Image J 軟件評(píng)估蛋白條帶灰度值，以目的蛋白和內(nèi)參GAPDH 灰度值比值表示對(duì)應(yīng)蛋白表達(dá)量。

1.2.7 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn) 將含有miR-127-5p結(jié)合位點(diǎn)的circ_0000285 野生（WT）序列或突變（MUT）序列克隆到pGL3-熒光素酶基本載體，構(gòu)建熒光素酶報(bào)告載體WT-circ_0000285、MUT-circ_0000285，該步驟由上海生工公司完成。利用Lipofectamine 2000將報(bào)告載體分別與miR-127-5p mimics、miR-NC共轉(zhuǎn)染至SK-N-SH細(xì)胞，使用雙重?zé)晒馑孛皋D(zhuǎn)運(yùn)蛋白測(cè)定試劑盒分析轉(zhuǎn)染24 h 后細(xì)胞相對(duì)熒光素酶活性。將pcDNA、pcDNA-circ_0000285、si-NC、si-circ_0000285 分別轉(zhuǎn)染至SK-N-SH 細(xì)胞，RTqPCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染48 h細(xì)胞中miR-127-5p表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 每組設(shè)置3個(gè)平行，實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3 次。使用SPSS18.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)用于評(píng)估兩組間差異，單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)用于分析多組間差異。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 circ_0000285 和miR-127-5p 在AD 細(xì) 胞 模 型中的表達(dá) AD組細(xì)胞中circ_0000285表達(dá)量較Con組顯著增加（P＜0.05），而miR-127-5p 表達(dá)量較Con組顯著減少（P＜0.05，表1）。

表1 circ_0000285 和miR-127-5p 在AD 細(xì)胞模型中的表達(dá)（±s，n=9）Tab.1 Expressions of circ_0000285 and miR-127-5p in AD cells model（±s，n=9）

表1 circ_0000285 和miR-127-5p 在AD 細(xì)胞模型中的表達(dá)（±s，n=9）Tab.1 Expressions of circ_0000285 and miR-127-5p in AD cells model（±s，n=9）

Note：Compared with Con group，1）P＜0.05.

Groups Con AD t P circ_0000285 1.00±0.07 2.69±0.221）21.961 0.000 miR-127-5p 1.00±0.06 0.37±0.031）28.174 0.000

2.2 干擾circ_0000285表達(dá)對(duì)AD 細(xì)胞模型氧化應(yīng)激的影響 與Con 組相比，AD 組細(xì)胞中circ_0000285表達(dá)量、MDA含量顯著升高（P＜0.05），SOD和GSH-Px 活性顯著降低（P＜0.05）；相較于AD+si-NC 組，AD+si-circ_0000285 組 細(xì) 胞 中circ_0000285表達(dá)量、MDA 含量顯著降低（P＜0.05），SOD 和GSHPx活性顯著升高（P＜0.05，表2）。

表2 干擾circ_0000285表達(dá)對(duì)AD細(xì)胞模型氧化應(yīng)激的影響（±s，n=9）Tab.2 Effects of interference with circ_0000285 expression on oxidative stress in AD cell model（±s，n=9）

表2 干擾circ_0000285表達(dá)對(duì)AD細(xì)胞模型氧化應(yīng)激的影響（±s，n=9）Tab.2 Effects of interference with circ_0000285 expression on oxidative stress in AD cell model（±s，n=9）

Note：Compared with Con group，1）P＜0.05；compared with AD+si-NC group，2）P＜0.05.

Groups Con AD AD+si-NC AD+si-circ_0000285 F P circ_0000285 1.00±0.05 2.68±0.251）2.71±0.26 1.49±0.112）184.354 0.000 MDA/（μmol·L-1）6.04±0.33 40.01±3.841）41.57±3.09 8.73±0.692）540.573 0.000 SOD/（U·mg-1）56.83±3.19 18.05±1.491）17.99±1.57 45.03±3.492）511.526 0.000 GSH-Px/（U·mg-1）67.85±5.10 26.39±2.081）25.93±2.06 58.74±3.482）365.114 0.000

2.3 干擾circ_0000285表達(dá)對(duì)AD 細(xì)胞模型凋亡的影響 與Con組相比，AD組細(xì)胞凋亡率、Bax蛋白表達(dá)量顯著升高（P＜0.05），Bcl-2 蛋白表達(dá)量顯著降低（P＜0.05）；與AD+si-NC 組 相 比，AD+si-circ_0000285 組細(xì)胞凋亡率、Bax 蛋白表達(dá)量顯著降低（P＜0.05），Bcl-2 蛋白表達(dá)量顯著升高（P＜0.05，表3、圖1）。

圖1 干擾circ_0000285表達(dá)對(duì)AD細(xì)胞模型凋亡的影響Fig.1 Effects of interference with circ_0000285 expression on apoptosis of AD cell model

表3 干擾circ_0000285 表達(dá)對(duì)AD 細(xì)胞模型凋亡的影響（±s，n=9）Tab.3 Effects of interference with circ_0000285 expression on apoptosis of AD cell models（±s，n=9）

表3 干擾circ_0000285 表達(dá)對(duì)AD 細(xì)胞模型凋亡的影響（±s，n=9）Tab.3 Effects of interference with circ_0000285 expression on apoptosis of AD cell models（±s，n=9）

Note：Compared with Con group，1）P＜0.05；compared with AD+si-NC group，2）P＜0.05.

Groups Con AD AD+si-NC AD+si-circ_0000285 F P Apoptosis rate/%6.08±0.46 29.05±2.681）30.19±2.32 10.74±1.052）398.912 0.000 Bcl-2 protein 0.73±0.04 0.31±0.031）0.29±0.03 0.67±0.042）388.800 0.000 Bax protein 0.14±0.02 0.61±0.031）0.62±0.05 0.25±0.022）521.429 0.000

2.4 circ_0000285 靶 向 調(diào) 控miR-127-5p 的 表 達(dá)在circular RNA Interactome工具中輸入circ_0000285基因號(hào)進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)circ_0000285 與miR-127-5p 序列間存在特異性結(jié)合序列，見(jiàn)圖2。與轉(zhuǎn)染miR-NC 相比，轉(zhuǎn)染miR-127-5p mimics 顯著降低WT-circ_0000285 的相對(duì)熒光素酶活性（P＜0.05），而對(duì)MUT-circ_0000285 的相對(duì)熒光素酶活性無(wú)顯著影響，見(jiàn)表4。pcDNA-circ_0000285 組細(xì)胞中miR-127-5p 表達(dá)量較pcDNA 組顯著降低，而si-circ_0000285 組細(xì)胞中miR-127-5p 表達(dá)量較si-NC 組顯著升高（P＜0.05，表5）。

表5 circ_0000285調(diào)控miR-127-5p的表達(dá)（±s，n=9）Tab.5 circ_0000285 regulates expression of miR-127-5p（±s，n=9）

表5 circ_0000285調(diào)控miR-127-5p的表達(dá)（±s，n=9）Tab.5 circ_0000285 regulates expression of miR-127-5p（±s，n=9）

Note：Compared with pcDNA group，1）P＜0.05；compared with si-NC group，2）P＜0.05.

Groups pcDNA pcDNA-circ_0000285 si-NC si-circ_0000285 t P miR-127-5p 1.00±0.05 0.39±0.031）1.03±0.05 2.61±0.212）647.970 0.000

圖2 circ_0000285 的序列中含有與miR-127-5p 互補(bǔ)的核苷酸序列Fig.2 Sequence of circ_0000285 contains a nucleotide sequence complementary to miR-127-5p

表4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)（±s，n=9）Tab.4 Double luciferase report experiment（±s，n=9）

表4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)（±s，n=9）Tab.4 Double luciferase report experiment（±s，n=9）

Note：Compared with miR-NC group，1）P＜0.05.

Groups miR-NC miR-127-5p t P WT-circ_0000285 1.01±0.08 0.48±0.041）17.177 0.000 MUT-circ_0000285 1.02±0.06 0.99±0.05 0.152 0.266

2.5 miR-127-5p 過(guò)表達(dá)對(duì)AD 細(xì)胞模型損傷的影響 與AD+miR-NC 組相比，AD+miR-127-5p 組細(xì)胞中miR-127-5p 表達(dá)量顯著升高（P＜0.05），MDA 含量、凋亡率、Bax 蛋白表達(dá)量顯著降低（P＜0.05），而SOD、GSH-Px 活性、Bcl-2 蛋白表達(dá)量顯著升高（P＜0.05，圖3、表6）。

表6 miR-127-5p過(guò)表達(dá)對(duì)AD細(xì)胞模型損傷的影響（±s，n=9）Tab.6 Effects of miR-127-5p overexpression on damage of AD cell models（±s，n=9）

表6 miR-127-5p過(guò)表達(dá)對(duì)AD細(xì)胞模型損傷的影響（±s，n=9）Tab.6 Effects of miR-127-5p overexpression on damage of AD cell models（±s，n=9）

Note：Compared with AD+miR-NC group，1）P＜0.05.

Groups AD+miR-NC AD+miR-127-5p t P miR-127-5p 1.00±0.06 3.02±0.231）25.495 0.000 MDA/（μmol·L-1）41.99±3.16 13.83±1.221）24.940 0.000 SOD/（U·mg-1）15.98±1.26 39.96±3.291）20.420 0.000 GSH-Px/（U·mg-1）24.53±2.08 51.54±4.481）16.405 0.000 Apoptosis rate/%32.15±2.21 13.64±1.091）22.535 0.000 Bcl-2 protein 0.28±0.02 0.61±0.041）22.137 0.000 Bax protein 0.64±0.05 0.31±0.031）16.978 0.000

圖3 miR-127-5p過(guò)表達(dá)對(duì)AD細(xì)胞模型凋亡的影響Fig.3 Effects of miR-127-5p overexpression on apoptosis of AD cell models

2.6 抑制miR-127-5p 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾circ_0000285 表達(dá)對(duì)AD 細(xì)胞模型損傷的作用 與AD+si-circ_0000285+anti-miR-NC 組 相 比，AD+si-circ_0000285+anti-miR-127-5p組細(xì)胞中miR-127-5p表達(dá)量顯著降低（P＜0.05），MDA 含量、凋亡率、Bax 蛋白表達(dá)量顯著升高（P＜0.05），而SOD 和GSH-Px 活性、Bcl-2蛋白表達(dá)量顯著降低（P＜0.05，表7、圖4）。

圖4 抑制miR-127-5p 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾circ_0000285 表達(dá)對(duì)AD細(xì)胞模型凋亡的作用Fig.4 Inhibition of miR-127-5p reversed effect of interference with circ_0000285 expression on apoptosis of AD cell models

表7 抑制miR-127-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾circ_0000285表達(dá)對(duì)AD細(xì)胞模型損傷的作用（±s，n=9）Tab.7 Inhibition of miR-127-5p reversed effect of interference with circ_0000285 expression on damage of AD cell model（±s，n=9）

表7 抑制miR-127-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾circ_0000285表達(dá)對(duì)AD細(xì)胞模型損傷的作用（±s，n=9）Tab.7 Inhibition of miR-127-5p reversed effect of interference with circ_0000285 expression on damage of AD cell model（±s，n=9）

Note：Compared with AD+si-circ_0000285+anti-miR-NC group，1）P＜0.05.

Groups AD+si-circ_0000285+anti-miR-NC AD+si-circ_0000285+anti-miR-127-5p t P miR-127-5p 1.00±0.06 0.24±0.021）36.050 0.000 MDA/（μmol·L-1）8.88±0.59 33.23±2.241）31.536 0.000 SOD/（U·mg-1）47.74±3.36 28.93±2.451）13.570 0.000 GSH-Px/（U·mg-1）61.11±4.33 36.15±2.631）14.780 0.000 Apoptosis rate/%10.14±0.87 21.19±2.171）14.179 0.000 Bcl-2 protein 0.69±0.04 0.38±0.031）18.000 0.000 Bax protein 0.23±0.02 0.51±0.041）18.783 0.000

3 討論

Aβ對(duì)神經(jīng)元和神經(jīng)突觸均有毒性，其可破壞突觸傳遞并導(dǎo)致突觸變性導(dǎo)致神經(jīng)元功能障礙［8］。Aβ25-35 是全長(zhǎng)Aβ1-42 肽的部分片段，具有體積小、在腦內(nèi)易擴(kuò)散等優(yōu)勢(shì)，其處理的Aβ25-35已被廣泛應(yīng)用于AD 體外模型的建立［9］。本研究旨在通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)circ_0000285 靶向miR-127-5p 對(duì)AD模型細(xì)胞損傷的作用和分子機(jī)制。

本研究發(fā)現(xiàn)Aβ25-35 處理后SK-N-SH 細(xì)胞中circ_0000285表達(dá)量顯著升高，提示circ_0000285表達(dá)上調(diào)可能與AD 進(jìn)展相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激與AD發(fā)病機(jī)理各階段、病理特征形成密切相關(guān)，AD患者與正常人相比表現(xiàn)出較強(qiáng)的氧化損傷［10］。當(dāng)機(jī)體氧化抗氧化系統(tǒng)失衡時(shí)導(dǎo)致活性氧過(guò)量生成誘導(dǎo)過(guò)膜脂氧化反應(yīng)，導(dǎo)致過(guò)氧化損傷標(biāo)志物MDA大量形成［11］。本研究通過(guò)轉(zhuǎn)染si-circ_0000285 進(jìn)行功能缺失驗(yàn)證結(jié)果顯示，干擾circ_0000285 表達(dá)可顯著降低Aβ25-35 處理的SK-N-SH 細(xì)胞中MDA 水平，升高抗氧化酶SOD 和GSH-Px 活性，提示干擾circ_0000285 能夠減輕Aβ25-35 誘導(dǎo)的SK-N-SH 細(xì)胞氧化損傷。Bcl-2 和Bax 是參與細(xì)胞凋亡調(diào)控的重要因子，Bax 表達(dá)增加可移位至線粒體改變膜通透性促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)生，而B(niǎo)cl-2 發(fā)揮相反作用，研究證實(shí)miR-129-5p 通過(guò)上調(diào)Bcl-2 表達(dá)、下調(diào)Bax 表達(dá)可抑制AD 模型細(xì)胞的凋亡［12］。本研究發(fā)現(xiàn)，干擾circ_0000285 可顯著降低Aβ25-35 誘導(dǎo)的SK-N-SH中Bax 表達(dá)水平，升高Bcl-2 表達(dá)水平，提示干擾circ_0000285 可能通過(guò)調(diào)控線粒體途徑抑制Aβ25-35 誘導(dǎo)的SK-N-SH 細(xì)胞凋亡。以上研究證實(shí)干擾circ_0000285 通過(guò)抗氧化、抗凋亡作用保護(hù)SK-NSH 免受Aβ25-35 誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷，這與干擾circ_0000285 在糖尿病腎病中對(duì)足細(xì)胞的保護(hù)作用一致［5］。

目前對(duì)circ_0000285 的研究多集中在腫瘤方面，且多篇文獻(xiàn)表明circ_0000285 的功能作用均與調(diào)控miRNA 表達(dá)相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)circ-0000285通過(guò)下調(diào)miR-599 表達(dá)顯著增加骨肉瘤細(xì)胞、肝癌的增殖和遷移潛能［13-14］。在宮頸癌中circ_0000285 通過(guò)靶向miR-197-3p 調(diào)節(jié)癌細(xì)胞活力、集落形成、凋亡和自噬［15］。本研究中通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)、雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí)在SK-N-SH 細(xì)胞中miR-127-5p表達(dá)受到circ_0000285 的靶向負(fù)性調(diào)控。既往研究表明，miR-127-5p 在肺炎鏈球菌感染肺泡上皮細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，過(guò)表達(dá)miR-127-5p 可抑制肺炎鏈球菌誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷［16］。circ_0136474 通過(guò)抑制miR-127-5p 表達(dá)進(jìn)而抑制骨關(guān)節(jié)炎細(xì)胞增殖，同時(shí)增強(qiáng)細(xì)胞凋亡［17］。本研究顯示Aβ25-35 處理后SK-N-SH細(xì)胞中miR-127-5p 表達(dá)量顯著降低，通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-127-5p mimics 恢復(fù)miR-127-5p 表達(dá)進(jìn)行功能分析，結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)miR-127-5p 通過(guò)上調(diào)Bcl-2 蛋白表達(dá)，下調(diào)Bax 蛋白表達(dá)來(lái)調(diào)控SK-N-SH 細(xì)胞凋亡，并通過(guò)降低細(xì)胞中MDA水平，升高抗氧化酶SOD和GSH-Px 活性來(lái)減輕Aβ25-35 誘導(dǎo)的SK-N-SH 細(xì)胞損傷。深入分析發(fā)現(xiàn)，抑制miR-127-5p 表達(dá)可顯著減弱干擾circ_0000285 表達(dá)對(duì)Aβ25-35 誘導(dǎo)的SKN-SH 細(xì)胞凋亡和氧化損傷的影響，提示circ_0000285 部分通過(guò)靶向miR-127-5p 參與調(diào)控Aβ25-35誘導(dǎo)的SK-N-SH細(xì)胞損傷。

總之，干擾circ_0000285 表達(dá)可通過(guò)靶向miR-127-5p 減弱Aβ25-35誘導(dǎo)的SK-N-SH 細(xì)胞損傷。因此，circ_0000285/miR-127-5p途徑可能是AD 的潛在治療靶點(diǎn)。