膠體金法檢測TP和HbsAg漏檢原因分析

張波（南寧中心血站,廣西 南寧 530007）

乙肝和梅毒居廣西乙類傳染病患者發病數前三位[1]，乙肝和梅毒是經血傳播性疾病，作為無償獻血常規檢測項目得到了采供血機構的高度重視。以膠體金法進行乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體的聯合檢測，不僅操作簡單，而且不需要特殊檢測儀器和設備，在廣大獻血人群中進行TP和HbsAg篩查時發揮了重要作用，有效減少了血液的浪費[2]，但是在血液初篩過程中因為各種原因導致乙肝和梅毒漏檢的情況時有發生，不僅造成了血液的浪費，還為血液安全埋下了隱患[3]。本文通過分析初篩環節TP和HbsAg漏檢的各項因素，探討初篩漏檢的主要原因并為減少血液浪費和保障血液安全提供依據，報告如下。

1 材料與方法

1.1標本來源 2021年7月-11月南寧市各獻血點成功獻血采集的血液標本60521份。

標本的保存：血液樣本用5ml的EDTA-K2真空采血管留取，2℃-8℃冰箱保存待用。

1.2儀器與試劑 STAR全自動加樣系統，帝肯EVO全自動加樣系統，FAME全自動酶免分析儀，URANUS AE 368全自動酶免分析儀。梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）：北京萬泰生物藥業股份有限公司（WT）、上海科華生物工程股份有限公司（KH）生產。乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯免疫法）：北京萬泰生物藥業股份有限公司（WT）、法國伯樂生物藥業股份有限公司（BL）生產。乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試劑（膠體金法）：英科新創（廈門）科技股份有限公司（試劑5）生產。所有使用試劑均經質檢合格，在有效期范圍內。

1.3方法

1.3.1留取所有的標本經離心后（離心條件：離心力1600g，離心時間20min，離心溫度25℃）采用試劑1和試劑2進行常規抗-TP ELISA檢測、試劑3和試劑4進行常規抗-HbsAg ELISA檢測，將兩種試劑初、復檢測定的S/CO值≥1的反應性標本（陽性標本）按照血液初篩要求用試劑5重新進行檢測。吸取60-80μL血液標本滴在加樣處，加樣15分鐘最終觀察并判斷結果。

1.3.2用唐山9.0血站血液信息管理系統導出反應性標本的血液初篩信息，包括采血點、檢測時間、檢測人員、獻血頻次、當天采集人數等信息。

1.3.3統計學分析 計數資料利用構成比進行統計描述，以[n(%)]表述，統計分析采用卡方檢驗計算P值，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.160521份血液標本經酶聯免疫法檢測后TP和HbsAg反應性標本共112份，占所有經血傳播疾病檢測項目237份不合格標本的47.26%。其中HbsAg反應性標本60例、TP反應性標本52例。反應性標本用膠體金法檢測HbsAg陽性27例（45%）、陰性33例（55%）；TP陽性37例（71.15%）、陰性15例（28.85%）。不同S/CO值金標法檢測陽性結果比例，χ2=24.772，P＜0.05，差異有統計學意義，見表1。

表1 金標法再次檢測反應性標本漏檢情況[n(%)]

2.2外采、血屋和首次、重復獻血者反應性標本膠體金法檢測漏檢情況 膠體金法檢測TP和HbsAg陽性標本和陰性標本分別占總獻血人數的0.11%和0.08%。外采和血屋TP和HbsAg陽性占比，χ2=0.003，P＞0.05，差別無統計學意義。首次和重復獻血者陽性占比，χ2=4.253，P＜0.05，差別有統計學意義，見表2。

表2 外采、血屋和首次、重復獻血者反應性標本膠體金法檢測漏檢情況[n(%)]

2.3采血人數對檢測結果的影響情況 外采和血屋不同采血人數TP和HbsAg陽性占比，P＜0.05，差異有統計學意義。血屋采血人數16人以上TP和HbsAg漏檢比例為32.81%，外采人數超過100人時TP和HbsAg漏檢比例為45.31%，見表3。

表3 血屋和外采不同采血人數漏檢情況[n(%)]

2.4不同工齡和初篩時間段漏檢情況 工齡5-10年TP和HbsAg漏檢率分別為51.35%和51.85%。初篩時間分段統計TP漏檢各時間段無明顯差異。HbsAg漏檢9-12時占比較高，為59.26%，見表4。

表4 不同工齡和初篩時間段漏檢情況

2.5采血人數同陽性漏檢標本判斷時間對比情況 0-5分鐘的39例陽性漏檢標本中26例（66.67%）是在采集量大情形發生。10-15分鐘顯示結果有8例（12.5%），見表5。

表5 采血人數與結果顯示時間情況

3 討論

乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋抗體聯合檢測試劑采用膠體金免疫層析技術同時測定全血、血清或血漿中乙型肝炎病毒表面抗原和梅毒抗體，操作簡單，檢測快速、特異度高而且肉眼可判斷結果[4]，聯合試劑的應用在獻血前經血傳播疾病篩查中發揮了重要的作用。而且通過再次用膠體金法試驗驗證仍然有15例TP和33例HbsAg陽性漏檢，漏檢率為0.08%，酶聯免疫法檢測S/CO值＞10時膠體金法檢出率較高，而S/CO值＜10時膠體金法檢出率較低，甚至S/CO值＜5時只有3例TP顯示陽性（表1），說明膠體金法檢測TP和HbsAg有一定的漏檢比例，主要是因為膠體金試劑靈敏度有限，其需要較高濃度的標記，而且直徑較大的膠體金顆粒才有較高的靈敏度[5]，此外，層析速度過快也可導致對照線很快顯色，檢測線顯色不明顯出現假陰性的結果而出現漏檢[6]。提示生產廠家要采用高親和力和高特異性的材料制備試劑，提高試劑靈敏度和穩定性。TP和HbsAg的漏檢同時提示，雖然在血液初篩環節已經進行了TP和HbsAg的檢測，初篩結果合格也只是說明初篩結果符合獻血標準，并不能作為疾病檢測的依據。此外，在獻血者健康檢查過程中應該重視獻血者健康宣教并且認真履行告知義務，讓獻血者明白無償獻血不能作為化驗血液的途徑，不安全的血液會危害患者的生命和健康，獻血者捐獻具有傳染性的血液會給受血者帶來危險，應承擔對受血者的道德責任。獻血者如果認為已捐獻的血液可能存在安全隱患，應當盡快告知血站[7]。同時工作人員在血液及標本的處理過程中都應該做好個人防護，不能因為獻血者血液初篩合格就放松防備，應當謹慎地對待每一份血液和標本，嚴格按照操作規程進行操作，減少職業暴露的風險[8]。

既往已經在我站成功獻血并且血液檢測結果合格的獻血者再次來獻血的，血液初篩時不再重復進行TP和HbsAg項目的檢測，導致本研究中重復獻血者有8例HbsAg和2例TP陽性標本漏檢，漏檢率為0.016%。目前部分采供血機構在血液初篩環節對所有獻血者進行乙肝/梅毒項目檢測，這在一定程度上減少了不合格血液的浪費，但是會增加初篩檢測時間成本和材料成本。血液初篩環節TP和HbsAg膠體金法檢測陽性標本漏檢64例，占比0.11%，這在獻血屋和外采獻血人數分類統計中可以看出，漏檢受獻血場所影響不大，但是隨著獻血人數的增加，漏檢比例增加明顯，采血人數在15人以內時漏檢比例較低（3.13%），隨著獻血人數的增加，尤其是外采采血人數超過100人時，漏檢比例增幅明顯（45.31%）。說明隨著獻血者增加，工作量明顯增加，在工作人員不足的情況下，為了提高工作效率、加快工作進度，在初篩加樣還有觀察時間上會大打折扣[9]。膠體金法5分鐘能夠檢出陽性結果39例中捐血屋31人以上獻血的8例、外采100人以上獻血的18例，占比66.67%。一方面提示血站要根據血液采集計劃合理安排工作人員，采集任務超出工作能力范圍時，需及時增補工作人員，以保障優質的服務質量和血液檢測質量，避免工作人員長期高強度作業導致漏檢或者差錯事故的發生。另一方面則是膠體金法5分鐘能夠檢出陽性結果39例中有13例是在采血量不大的情況下漏檢，說明工作人員日常工作質量存在問題，應該加大培訓力度，在常規工作下要保持嚴謹的工作態度和高度的責任心。64例陽性漏檢標本中，8例是在10-15分鐘內出現陽性結果，提示檢測人員要嚴格按照加樣量和時間觀察要求操作，確保血液初篩結果的準確性。S/CO值＞10仍然有17例漏檢（15.18%），說明工作中要注意試劑的保存，防止受潮、避免空氣中暴露時間過長，做到隨用隨加，確保試劑的有效和正確使用[10]。工作人員工齡和初篩時間的統計結果顯示，工齡5-10年陽性漏檢率較高，主要原因為工作一段時間后積累了一定的工作經驗，雖然初篩操作熟練程度提高，動作更加麻利，但是此時更加容易出現麻痹大意，暴露出工作中不注意細節、工作嚴謹性不夠等問題，從而出現誤判、漏判導致漏檢現象發生。這也提示血站在對員工的培訓中不僅要加強新員工培訓和考核，同時對有一定工作經驗的員工也要進行崗位技能的再培訓、再學習，從而達到糾偏目的，讓各項操作和技能更趨成熟。

綜上所述，膠體金法檢測TP和HbsAg在血液初篩環節的應用價值明顯，但是仍然存在一定的漏檢比例，這提示一方面要按照要求保存和使用試劑，保證試劑的靈敏性和特異性，另一方面要做好初篩環節的關鍵點控制，加強工作人員職業技能培訓，提高工作人員的質量意識和血液安全意識，保障獻血場所人員配備，可以進一步降低TP和HbsAg漏檢率。