非小細胞肺癌根治性放化療后血清外泌體來源的microRNA-4429水平與預后的關系

張瑩，陳軍梅，陳名濤，郭晶，吳曉冬，陳歡

1.華潤武鋼總醫院,a 腫瘤科，b 中醫科，c 呼吸與危重癥科,武漢 430080；2.武漢泰康楚園康復醫院康復醫學中心；3.武漢工程大學社區衛生服務站檢驗科

肺癌是較為常見的一種惡性腫瘤,在全世界范圍內具有較高的發病率。其中非小細胞肺癌(NSCLC)占到肺癌的80%以上[1-2]。血清外泌體來源的microRNA-4429是microRNA中的一員,參與較多疾病的發生,腫瘤細胞的增殖、遷移、侵襲等以及放療的敏感性等均與其有著密切的關系,因此部分醫學專家認為microRNA-4429與NSCLC根治性放化療患者的預后有著較大的關聯[3-5],但相關的研究還比較少,尚未得到證實。本文旨在研究NSCLC根治性放化療后血清外泌體來源的microRNA-4429水平與患者預后的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2015年10月至2020年10 月期間，華潤武鋼總醫院收治的120例NSCLC根治性放化療患者治療前、治療后的血液標本進行研究。隨訪調查120例患者1年后的生存率為70.00% (84/120),根據隨訪調查患者1年后生存情況,分為觀察組(84例)、對照組(36例)。觀察組:男性45例,女性39例;年齡范圍45～70(61.4±1.5)歲;腫瘤分期[6]為Ⅲ期40例,Ⅳ期44例;分化程度為低分化35例、中高分化49例。對照組:男性20例,女性16例;年齡范圍45～69(60.9±1.5)歲;腫瘤分期為Ⅲ期17例,Ⅳ期19例;分化程度為低分化10 例、中高分化26例。2組一般資料對比,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究方案經華潤武鋼總醫院倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準 納入標準:(1)初次診斷為進展期NSCLC患者;(2)患者均接受根治性放化療治療;(3)根治性放化療治療前均接受免疫治療或靶向治療;(4)患者及家屬對本次研究知情,且自愿簽署知情同意書。排除標準:(1)患者心、肝、腎功能存在異常及重大疾病者;(2)合并血液系統、免疫系統功能疾病者;(3)轉移性肺癌;(4) 長期服用糖皮質激素類藥物患者;(5)伴有全身感染性疾病患者。

1.3 根治性放化療治療方法 患者在治療前進行常規檢查,確保患者的各項指標符合治療標準。給予順鉑(75 mg/m2，通化茂祥制藥有限公司生產)+長春瑞濱(5 mg/m2，齊魯制藥有限公司生產)化療。采用調強適型放療技術，根治性放療劑量為60～70 Gy，2 Gy/次。

1.4 實時熒光定量(PCR)技術檢測方法 采用PCR技術檢測方法檢測患者血清外泌體來源的microRNA-4429水平,分別提取120例NSCLC患者治療前及治療后1、3、6個月的血液標本,置于肝素抗凝管中,在3 000 r/min離心操作10 min后取上層血清,使用PCR技術檢測血清microRNA-4429水平。按血清總RNA提取試劑盒說明書進行操作,在無菌無酶的環境下提取血清總RNA,使用紫外分光光度計檢測總RNA純度,將其反轉錄為cDNA,使用PCR儀擴增,條件為94℃預變性5 min、95 ℃變性45 s、60 ℃退火45 s、72 ℃擴增45 s,共進行35個循環,并采用2-Cr法計算MicroRNA-4429的相對表達水平。

1.5 觀察指標 (1)血清外泌體來源的mircroRNA 水平:治療前、治療1個月、治療3個月、治療6個月血清外泌體來源的mircroRNA水平變化情況;(2)microRNA-4429水平、生存預后的相關性;(3)分析預后風險因素。

2 結果

2.1 microRNA-4429水平 2組患者在治療前及治療1個月后microRNA-4429水平對比,差異無統計學意義(P>0.05),治療后3、6個月觀察組microRNA-4429水平較對照組明顯升高(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者microRNA-4429水平比較

2.2 microRNA-4429水平與生存預后的關系 治療1個月后NSCLC患者生存預后ROC曲線下面積、最佳截斷點、靈敏度及特異度分別為0.58、0.49、59.12%、91.23%;治療3個月NSCLC患者生存預后ROC曲線下面積、最佳截斷點、靈敏度及特異度分別為0.61、0.62、90.05%、56.82%;治療6個月后NSCLC患者生存預后ROC曲線下面積、最佳截斷點、靈敏度及特異度分別為0.88、0.64、62.93%、98.24%。治療6個月診斷NSCLC生存預后效能明顯高于治療1個月及治療3個月(Z=3.587、2.608,P值均<0.05)。治療6個月NSCLC約登指數為最大值,因此將治療6個月NSCLC生存預后作為最佳截斷點將NSCLC患者分為高MicroRNA組及低MicroRNA組,高microRNA組NSCLC患者生存預后的不良風險發生率較低。

2.3 影響預后的危險因素分析 將NSCLC生存預后作為因變量,將年齡、性別、吸煙史、腫瘤直徑、腫瘤分期、分化程度、靶向治療和microRNA-4429作為自變量,分別納入COX回歸分析,結果顯示分化程度、靶向治療和microRNA-4429均與NSCLC生存預后有相關性,是NSCLC患者生存預后的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 NSCLC患者生存預后風險因素的COX回歸分析

3 討論

對NSCLC的治療,放療是其治療的主要手段,但并非所有患者對放療治療均具有較高的敏感度[7-8]。由于缺乏有效的早期診斷能力,大部分NSCLC患者在接受治療時已經處于中晚期階段,化療的效果并不理想,患者的生存率比較低,在治療后常會出現復發以及轉移等風險[9-11]。研究表明,microRNA是一種內源性非編碼序列,在真核生物中普遍存在,在癌癥細胞的增殖及分化中均有著重要的參與作用[12-14],microRNA-4299作為其中一員,同樣具有相應的作用,但當前關于microRNA-4299與NSCLC患者生存預后關系的研究還比較少。

本研究表明，治療3個月及6個月觀察組的microRNA-4299水平明顯高于對照組,且在ROC曲線分析及COX相關性分析中發現,microRNA-4299水平與NSCLC患者生存預后效果存在線性關系,高microRNA組預后不良風險性低于低microRNA組。這主要是因為microRNA-4299能夠有效調控腫瘤細胞的增殖、遷移以及侵襲等過程,從而調節放化療對NSCLC患者的敏感性,因此能夠在一定程度上反映出患者放化療后的療效。此外，本次研究顯示分化程度、靶向治療以及microRNA-4299水平是影響NSCLC患者生存預后的獨立危險因素,與紀奇峰等[15]、龍濤等[16]的研究結果一致。

綜上所述,microRNA-4299表達水平高表明患者預后不良風險較低,且分化程度、靶向治療及microRNA-4299水平是NSCLC患者生存預后的獨立危險因素,能夠作為NSCLC患者生存預后效果的輔助評價指標。