免疫檢查點(diǎn)B7-H3、TMIGD2、HHLA2在卵巢癌中表達(dá)及臨床意義

張 娟 孫麗莎 王 虹

卵巢癌是臨床婦科常見惡性腫瘤，且近10年發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，因發(fā)病隱匿且早期無明顯癥狀，臨床就診時(shí)70%患者已屬于晚期，致使患者5年生存率僅在20%～30%[1-2]。因此尋找有效的生物標(biāo)志物對(duì)卵巢癌病情及預(yù)后進(jìn)行判斷具有重要價(jià)值。目前有研究顯示免疫檢查點(diǎn)抑制劑是腫瘤免疫治療重要研究方向，但應(yīng)用于婦科腫瘤治療的研究較少[3]。B7/CD28家族作為T細(xì)胞協(xié)同刺激分子，參與T細(xì)胞活化、效應(yīng)及凋亡，通過抑制T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞功能影響腫瘤增殖及免疫調(diào)控過程[4]。B7-H3蛋白和人內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒-H長(zhǎng)末端重復(fù)關(guān)聯(lián)蛋白2(human endogenous retrovirus-H long terminal repeat-associating protein 2，HHLA2)均屬于B7蛋白超家族成員，跨膜和免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域2 (transmembrane and immunoglobulin domain containing 2，TMIGD2)是HHLA2的受體，有研究顯示其在肺癌、乳腺癌等實(shí)體腫瘤中的表達(dá)與腫瘤分期及預(yù)后具有相關(guān)性[5-6]。因此本研究主要探討免疫檢查點(diǎn)B7-H3、TMIGD2、HHLA2在卵巢癌患者中表達(dá)及臨床意義，為臨床卵巢癌免疫治療靶點(diǎn)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年10月至2021年1月收治卵巢癌患者84例為研究對(duì)象，年齡31～72(51.91±4.94)歲；FIGO分期[7]：Ⅰ～Ⅱ期19例，Ⅲ～Ⅳ期65例；腫瘤大小：<3 cm 32例，≥3 cm 52例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例；腹腔積液58例；組織學(xué)類型：漿液性腺癌49例，其它35例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)后經(jīng)臨床病理學(xué)檢查診斷為卵巢癌，且符合中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)婦科腫瘤專業(yè)委員會(huì)制定的《卵巢惡性腫瘤診斷與治療指南(2021年版)》[8]相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②未接受放化療等影響研究結(jié)果的相關(guān)治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①缺乏完整臨床資料者；②伴有其它惡性腫瘤或重要器官功能障礙者；③合并其它嚴(yán)重內(nèi)科疾病、凝血功能障礙等無法耐受手術(shù)治療者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

①患者根據(jù)2017年第4版NCCN《卵巢癌臨床實(shí)踐指南》[9]采取治療措施。②血清可溶性B7-H3檢測(cè)：患者入院時(shí)和治療6個(gè)月后抽取外周靜脈血3 ml，4000 r/min離心10 min取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，試劑盒購于上海將來實(shí)業(yè)股份有限公司，按照試劑盒說明書進(jìn)行嚴(yán)格操作。③卵巢癌組織B7-H3、TMIGD2、HHLA2蛋白水平檢測(cè)：收集病理組織標(biāo)本4%多聚甲醛固定、石蠟包埋進(jìn)行切片處理，置于-80 ℃保存待測(cè)。檢測(cè)時(shí)對(duì)組織玻片進(jìn)行脫蠟處理，并采用檸檬酸鈉修復(fù)抗原，行免疫組化檢測(cè)，加入一抗按1∶500稀釋，4 ℃環(huán)境下進(jìn)行孵育過夜，PBS洗滌，采用二抗孵育30 min計(jì)入DAB脫水顯色，封片。所有抗體均購于北京百普賽斯生物科技有限公司。組織B7-H3、TMIGD2、HHLA2蛋白水平結(jié)果判定：計(jì)數(shù)細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)染色強(qiáng)度根據(jù)陽性細(xì)胞百分比及半定量統(tǒng)計(jì)結(jié)果：0級(jí)：<5%，1級(jí)：5%～25%，2級(jí)：26%～50%，3級(jí)：51%～80%，4級(jí)：>80%；<10%為陰性，≥10%為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 不同病理特征患者治療前后血清B7-H3水平比較

卵巢癌患者治療后血清B7-H3水平低于治療前(P<0.05)。不同F(xiàn)IGO分期、腫瘤大小及是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液卵巢癌患者血清B7-H3水平比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同病理特征患者治療前后血清B7-H3水平比較

2.2 不同病理特征與癌組織B7-H3表達(dá)的相關(guān)性

卵巢癌組織B7-H3陽性表達(dá)67例(79.8%)。不同F(xiàn)IGO分期、是否存在腹腔積液卵巢癌患者組織B7-H3表達(dá)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Logistic回歸分析顯示，組織B7-H3表達(dá)與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液具有相關(guān)性。見表2、3。

表2 不同病理特征與癌組織B7-H3表達(dá)的相關(guān)性(例，%)

2.3 不同病理特征與組織TMIGD2表達(dá)的相關(guān)性

卵巢癌組織TMIGD2陽性表達(dá)55例(65.5%)。不同F(xiàn)IGO分期、腫瘤大小及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液卵巢癌患者組織TMIGD2表達(dá)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Logistic回歸分析顯示，組織TMIGD2表達(dá)與FIGO分期、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液具有相關(guān)性。見表4、5。

2.4 不同病理特征與組織HHLA2表達(dá)的相關(guān)性

卵巢癌組織HHLA2陽性表達(dá)56例(66.7%)。不同F(xiàn)IGO分期、腫瘤大小及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液卵巢癌患者組織HHLA2表達(dá)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Logisitic回歸分析顯示，組織HHLA2表達(dá)與不同F(xiàn)IGO分期、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液具有相關(guān)性。見表6、7。

3 討論

卵巢癌占婦科惡性腫瘤的23%～27%，其中以上皮性卵巢腫瘤較為常見，占卵巢癌90%左右，多見于中老年婦女，60%患者就診時(shí)病灶已超出盆腔范圍，5年存活率僅約30%[10-12]。有學(xué)者認(rèn)為影響卵巢癌患者生存率的主要原因是卵巢組織解剖位置位于盆腔深部，導(dǎo)致早期診斷難度大、治療手段局限[13-14]。目前治療手段包括化學(xué)治療、免疫治療、放射治療、信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑等，其中免疫治療是近年來臨床研究的熱點(diǎn)，而針對(duì)免疫檢查點(diǎn)的相關(guān)治療被認(rèn)為是卵巢癌治療的新方法[15]。有研究顯示，卵巢癌患者的存活時(shí)間、復(fù)發(fā)率與T淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)的免疫應(yīng)答密切相關(guān)[16]。免疫卡控點(diǎn)B7家族分子B7-H3、HHLA2等在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，其中B7-H3主要參與T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，抑制T細(xì)胞增殖活化，同時(shí)抑制腫瘤細(xì)胞黏附、遷移和入侵[17]。HHLA2作為T細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)因子，發(fā)揮抑制CD4+和CD8+T細(xì)胞增殖作用，發(fā)生腫瘤免疫逃逸和免疫侵襲[18]。TMIGD2是HHLA2的特異性受體之一，由單一的免疫球蛋白變異體結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和1細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域組成，在自然殺死細(xì)胞中和先天淋巴細(xì)胞中高表達(dá)[19]。有研究顯示TMIGD2表達(dá)可識(shí)別腫瘤組織中的記憶CD8+T細(xì)胞，在上皮細(xì)胞源腫瘤中起抗腫瘤免疫應(yīng)答作用[20]。

表3 組織B7-H3表達(dá)對(duì)卵巢癌患者不同病理特征Logistic回歸分析

表4 不同病理特征與癌組織TMIGD2表達(dá)的相關(guān)性(例，%)

表5 組織TMIGD2表達(dá)對(duì)卵巢癌患者不同病理特征Logistic回歸分析

表6 不同病理特征與癌組織HHLA2表達(dá)的相關(guān)性(例，%)

表7 組織HHLA2表達(dá)對(duì)卵巢癌患者不同病理特征Logistic回歸分析

本研究結(jié)果中卵巢癌患者治療后血清B7-H3水平低于治療前；不同F(xiàn)IGO分期、腫瘤大小及是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液卵巢癌患者血清B7-H3水平比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果提示外周血清B7-H3水平增強(qiáng)與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是腫瘤常見轉(zhuǎn)移方式，增加了腫瘤中轉(zhuǎn)移的復(fù)雜性，使原發(fā)病灶尋找、診斷困難，同時(shí)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌會(huì)使局部淋巴結(jié)受累與周圍組織粘連，進(jìn)行血源性轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響臨床治療效果及預(yù)后。本研究結(jié)果中卵巢癌患者組織B7-H3陽性表達(dá)67例(79.8%)，其中不同F(xiàn)IGO分期、是否存在腹腔積液卵巢癌患者組織B7-H3表達(dá)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；組織B7-H3表達(dá)與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液具有相關(guān)性。結(jié)果說明B7-H3可能參加卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程，可作為免疫檢查點(diǎn)提示預(yù)后。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌患者組織TMIGD2陽性表達(dá)55例(65.5%)，HHLA2陽性表達(dá)56例(66.7%)。結(jié)果中不同F(xiàn)IGO分期、腫瘤大小及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液卵巢癌患者組織TMIGD2、HHLA2表達(dá)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；組織TMIGD2、HHLA2表達(dá)與FIGO分期、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液具有相關(guān)性。結(jié)果提示TMIGD2、HHLA2在卵巢癌微環(huán)境中共同參與腫瘤免疫逃逸與轉(zhuǎn)移，可作為免疫檢查點(diǎn)提示預(yù)后。

綜上所述，免疫檢查點(diǎn)B7-H3、TMIGD2、HHLA2在卵巢癌組織中均出現(xiàn)高表達(dá)，并與病情進(jìn)展呈現(xiàn)正相關(guān)性，具有明確的預(yù)后意義。本研究不足之處在于其為單中心研究，待后續(xù)納入大量樣本進(jìn)行更全面、細(xì)致的研究。