PD-1、PD-L1在彌漫大B細胞淋巴瘤組織中的差異性表達及其與臨床病理及預后的關系

張芳芳 張曉麗 冀烜靜 王戰芳 徐麗偉

彌漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B cell lympoma，DLBCL)屬于常見的淋巴瘤，具有高度異質性，臨床特征、形態學、免疫學和細胞遺傳學特征均不同[1]。程序性死亡受體-1(PD-1)及程序性死亡配體(PD-L1)信號通路是腫瘤免疫逃避的重要途徑，PD-1可以介導細胞凋亡，與PD-L1結合可以誘導效應T細胞凋亡以及抑制T細胞活化，形成腫瘤生長局部或全身微環境，造成腫瘤細胞獲得免疫逃逸[2]。有研究證實表達PD-1、PD-L1的DLBCL患者的療效及生存率均偏低[3]。本研究旨在探討PD-1、PD-L1在彌漫大B細胞淋巴瘤組織中的差異性表達及其與臨床病理及預后的關系?，F報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2020年1月本院收治彌漫大B細胞淋巴瘤患者60例，年齡18～87歲，平均(64.23±8.14)歲。納入標準：①符合 2016 年WHO惡性淋巴瘤分類診斷標準[4]，經病理診斷為彌漫大B細胞淋巴瘤； ②行手術切除患者，且手術前未行放、化療治療；③臨床資料完整； ④患者簽署自愿受試同意書及知情同意書。排除標準：① 合并腦血管疾??；②合并其他惡性腫瘤患者；③合并其他器官嚴重性病變患者。

1.2 免疫組化法檢測PD-1、PD-L1表達

4%中性甲醛固定標本，經脫水、石蠟包埋，切片后分別進行HE及免疫組化染色，光鏡顯微鏡下觀察組織形態學特征。采用PV600二步法，以PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性組織作為陽性對照。結果判定：PD-1陽性染色定位于細胞質，呈黃色或棕黃色，當著色細胞≥5%時可定義為陽性。PD-L1陽性染色定位于細胞膜，呈黃色或棕黃色，當著色細胞≥5%時定義為陽性。

1.3 隨訪及預后評價標準

采用門診隨訪或電話隨訪的方式，隨訪截止日期為2021年5月1號。根據世界衛生組織制定的療效標準[5]，記錄患者術后1年的近期療效

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 PD-1表達與DLBCL臨床病理特征的關系

腫瘤細胞中PD-1表達與患者的年齡、性別、CD5、HANs分型、EBER、CD30無相關性(P>0.05)。微環境細胞中PD-1表達與患者年齡、性別、CD5、EBER無相關性(P>0.05)，與Non-GCB 型、CD30相關，其中Non-GCB 型、CD30陰性患者中微環境細胞中PD-1陽性表達率顯著高于GCB 型、CD30陽性患者，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 PD-1表達與DLBCL臨床病理特征的關系/例

2.2 PD-L1表達與DLBCL臨床病理特征的關系

腫瘤細胞中PD-L1表達與患者的年齡、性別、CD5、HANs分型、EBER、CD30無相關性(P>0.05)，微環境細胞中PD-L1表達與患者年齡、性別、HANs分型、CD30無相關性(P<0.05)，與CD5陰性、EBER相關，其中CD5陰性、EBER陰性患者中微環境細胞中PD-L1陽性表達率顯著高于CD5陽性、EBER陽性患者，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 PD-L1表達與DLBCL臨床病理特征的關系/例

2.3 微環境細胞中PD-1、PD-L1表達與DLBCL患者療效的關系

PD-1、PD-L1陰性表達患者的治療總有效率明顯高于PD-1、PD-L1陽性表達患者，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 PD-1、PD-L1表達與DLBCL患者療效的關系/例

2.4 微環境細胞中PD-1和PD-L1表達與DLBCL患者預后生存率的關系

DLBCL患者組織中PD-1陽性表達者3年預后生存率為66.67%(8/12)，明顯低于陰性表達者89.58%(43/48)，差異有統計學意義(χ2=3.954，P<0.05)；PD-L1陽性患者3年預后生存率為63.16%(12/19)，明顯低于陰性表達者87.80%(36/41)，差異有統計學意義(χ2=4.929，P<0.05)。

3 討論

DLBCL屬于常見的非霍奇金淋巴瘤類型，是一種高度惡性侵襲性淋巴瘤，其在形態學、細胞學、免疫組織化學表型、化療敏感性及預后等方面均表現出異質性[6]。目前，免疫缺陷是DLBCL的危險因素，腫瘤浸潤調節性T細胞作為腫瘤微環境細胞的重要組成部分，腫瘤微環境可以通過破壞癌細胞或抑制其生長來抑制腫瘤生長，也可以通過建立促進腫瘤生長的條件來促進腫瘤的進展[7]。近期，免疫治療已成為腫瘤領域中最有前景的治療措施，腫瘤免疫治療是指通過機體自身的免疫系統，增強抗腫瘤免疫能力，從而達到抑制和殺傷腫瘤細胞的目的[8-9]。

PD-1是B7受體家族成員，是活化T細胞和B細胞表面的抑制性信號受體，PD-1和PD-L1結合后可成為重要的免疫檢查點，在腫瘤的免疫逃避及抗腫瘤免疫中發揮重要作用[10]。具體機制是PD-1在T細胞激活后活化于T細胞表面，與其配體結合后引起SHP1、SHP-2募集及下游信號分子去磷酸化，從而導致細胞因子減少，導致T細胞增殖受到抑制，正常的免疫平衡被打破[11-12]。有研究證實，PD-L1信號通路可通過抑制T細胞功能，從而抑制腫瘤免疫應答，多種實體腫瘤均出現PD-L1表達上調的現象[13-14]。已有研究證實PD-1/PD-L1抑制劑在淋巴瘤中療效顯著[15]。然而有研究指出DLBCL患者中PD-1表達水平與患者預后密切相關，而PD-L1表達與患者的預后無相關性[16]。本研究結果發現，Non-GCB 型、CD30陰性患者中微環境細胞中PD-1陽性表達率顯著高于GCB 型、CD30陽性；CD5陰性、EBER陰性患者中微環境細胞中PD-1陽性表達率顯著高于CD5陽性、EBER陽性患者。GCB亞型和Non-GCB亞型分別來源于正常生發中心B細胞與活化的外周血記憶B細胞，有研究證實GCB亞型5年生存率明顯高于Non-GCB亞型[16]。這與Non-GCB亞型患者PD-L1陽性表達率顯著高于GCB亞型的結果一致。PD-1、PD-L1陰性表達患者的總有效率及3年預后生存率明顯高于PD-1、PD-L1陽性表達患者，這與已有的研究報道一致[17]。

本試驗作為回顧性研究，存在一定的局限性，首先是樣本量相對較少，可能導致最終結果出現偏倚，其次本試驗使用的部分組織存儲時間較長，可能存在蛋白部分降解的情況。因此，還需要更加擴大樣本量、提高各項檢測技術等來驗證結果。

綜上所述，PD-1、PD-L1表達與彌漫大B細胞淋巴瘤患者HANs分型、CD30、EBER表達等臨床病理特征以及預后具有相關性，可將其作為疾病病情以及預后的重要生物學指標。