百色市某種雞場(chǎng)主要疫病調(diào)查檢測(cè)報(bào)告

農(nóng)愛(ài)紅 趙聰 陸春禮 李雪珍 黃百花

（百色市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心, 廣西 百色 533000）

開(kāi)展疫病凈化是提高種雞生產(chǎn)性能的關(guān)鍵, 為掌握某種雞場(chǎng)主要疫病流行狀況, 為制定種雞疫病凈化政策提供科學(xué)依據(jù), 對(duì)百色市某種雞場(chǎng)開(kāi)展禽白血病、雞白痢、高致病性禽流感、雞新城疫等主要疫病病原和血清學(xué)調(diào)查。

禽白血病（Avian leukosis, AL）是一種免疫抑制病, 是由反轉(zhuǎn)錄病毒科的禽白血病病毒（Avianleukosis virus, ALV） 引起的禽類腫瘤性疾病之一, 本病主要為垂直傳播, 病毒型間交叉免疫力很低, 雛雞免疫耐受, 對(duì)疫苗不產(chǎn)生免疫應(yīng)答, 常常以亞臨床感染的形式感染雞群, 導(dǎo)致雞生長(zhǎng)遲緩、繼發(fā)細(xì)菌感染或干擾新城疫、禽流感等疫苗的免疫效果。目前對(duì)本病的控制尚無(wú)切實(shí)可行的方法, 開(kāi)展種群凈化, 減少種雞群的感染率和建立無(wú)禽白血病的種雞群是控制本病最有效措施。雞白痢 （Plorum disease, PD） 是由雞白痢沙門氏菌所引起的一種常見(jiàn)的傳染病, 是危害養(yǎng)雞業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一, 本病可通過(guò)雞蛋垂直傳播, 也可接觸傳染, 排泄物是重要的傳播媒介, 消化道感染是主要傳染方式。張永第的研究顯示, 母雞感染了雞白痢后, 嚴(yán)重影響種蛋的孵化率及雛雞的成活率。高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza, HPAI）與 新 城 疫 疫（Newcastle disease, ND）被農(nóng)業(yè)農(nóng)村部定為一類動(dòng)物疫病, 為烈性傳染性疾病, 對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的威脅十分巨大。

動(dòng)物疫病凈化是實(shí)現(xiàn)疫病消滅與根除的重要措施。通過(guò)監(jiān)測(cè)、檢驗(yàn)檢疫、隔離、撲殺等一系列綜合措施, 在特定區(qū)域或場(chǎng)所消滅和清除病原, 從而達(dá)到在該范圍內(nèi)動(dòng)物個(gè)體不發(fā)病和無(wú)感染的狀態(tài)。《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》HPAI、ND、AL和沙門氏菌列為種禽場(chǎng)優(yōu)先防治的疫病, 規(guī)劃明確引導(dǎo)和支持種畜禽企業(yè)開(kāi)展疫病凈化, 并設(shè)定了疫病凈化考核標(biāo)準(zhǔn)。為此對(duì)百色市某種雞場(chǎng)上述4種疫病進(jìn)行檢測(cè), 目的是為了充分了解該種雞場(chǎng)主要疫病的感染情況, 為種雞場(chǎng)疫病防控及凈化措施制定提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

采樣雞群為百色市某種雞場(chǎng), 該雞場(chǎng)現(xiàn)存欄公雞0.3萬(wàn)只、母雞14萬(wàn)只。在雞群中隨機(jī)抽取50只公雞和160只母雞, 采集血清及泄殖腔棉拭子樣品各210份, 用于抗體檢測(cè)及病原學(xué)檢測(cè)；另外再隨機(jī)采集種用母雞新鮮雞蛋蛋清樣品200份、泄殖腔棉拭子60份, 用于檢測(cè)禽白血病P27（ALV-P27）抗原。 采樣雞群已按既定免疫程序進(jìn)行免疫, 主要的免疫疫苗有重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-11株+Re-12株, H7N9 H7 Re-2株）、新城疫活疫苗, 未免疫禽白血病及沙門氏菌疫苗。

禽流感H5N1（Re-11/Re-12）和H7N9（H7 Re-2）抗體檢測(cè)試劑、陽(yáng)性血清；新城疫抗體檢測(cè)試劑、陽(yáng)性血清；雞白痢、雞傷寒多價(jià)染色平板凝集試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性對(duì)照血清以及禽白血病P27抗原檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自哈爾濱國(guó)生生物科技股份有限公司；禽白血病A/B亞群和J亞群抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自禾旭（鄭州）生物技術(shù)有限公司；禽流感熒光PCR檢測(cè)試劑盒及新城疫PCR檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自深圳澳東檢驗(yàn)檢測(cè)科技有限公司。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（LightCycler 96）由羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司生產(chǎn)；酶標(biāo)儀（LabServ K3）由賽默飛世爾（上海）儀器有限公司生產(chǎn)；生化培養(yǎng)箱（BJPX-250）由山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司生產(chǎn)；移液器（單道、多道）由艾本德（上海）國(guó)際貿(mào)易有限公司生產(chǎn)。

HPAI及ND免疫抗體檢測(cè)按照國(guó)標(biāo)GB/T 18936-2020 高致病性禽流感診斷技術(shù)與GB/T 16550-2020新城疫診斷技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)；SP/SG抗體采用雞白痢、雞傷寒多價(jià)染色平板凝集試驗(yàn)抗原進(jìn)行檢測(cè)；ALV-A/B和ALV-J抗體檢測(cè)采用禽白血病病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)；ALV-P27抗原檢測(cè)采用禽白血病抗原ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)；HPAI及ND病毒病原學(xué)檢測(cè)按PCR試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

2 結(jié)果與分析

2.1 種雞群HPAI及ND免疫抗體檢測(cè)

種雞群HPAI及ND免疫抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。從檢測(cè)結(jié)果來(lái)看, 雞群的HPAI及ND的免疫抗體效價(jià)較高, HPAI（H5N1 Re-11）抗體合格率為97.14%, HPAI（H5N1 Re-12）抗體合格率為99.05%, HPAI（H7N9 H7-Re2）抗體合格率為93.33%, ND抗體合格率為99.52%。其中公雞HPAI N5N1及ND免疫抗體效價(jià)比母雞高, 但相差不大；值得注意的是公雞HPAI H7N9免疫抗體合格率為82%, 遠(yuǎn)低于母雞96.88%的抗體合格率。雞群整體HPAI H7N9免疫抗體合格率雖然比較高, 但是抗體效價(jià)平均值比較低, 抗體的離散度較大。表明雞群HPAI及ND的抗體效價(jià)范圍較大, 整齊度較差, 對(duì)HPAI及ND的感染有一定的風(fēng)險(xiǎn), 應(yīng)對(duì)免疫抗體不達(dá)標(biāo)者及時(shí)補(bǔ)免。

表1 種雞群HPAI及ND免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 種雞群SP/SG、ALV-A/B和ALV-J抗體檢測(cè)

種雞群SP/SG及ALV-A/B和ALV-J抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。由于沒(méi)有免疫禽白血病及沙門氏菌疫苗, 抗體檢測(cè)的結(jié)果基本可以代表種雞群2種疫病的感染情況。從檢測(cè)結(jié)果來(lái)看, 種雞群整體SP/SG抗體陽(yáng)性為23.81%, ALV-A/B抗體陽(yáng)性率為5.24%, ALV-J抗體陽(yáng)性率為2.38%。其中公雞SP/SG抗體陽(yáng)性率為38%, 母雞SP/SG抗體陽(yáng)性率為19.38%, 公雞SP/SG抗體陽(yáng)性率明顯比母雞高。禽白血病檢測(cè)結(jié)果是公雞ALV-A/B抗體陽(yáng)性率為2%, 母雞ALV-A/B抗體陽(yáng)性率為6.25%；公雞ALV-J抗體陽(yáng)性率為0%, 母雞為3.13%, 表明母雞禽白血病陽(yáng)性率明顯比公雞高。

表2 種雞群SP/SG及ALV-A/B和ALV-J抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 種雞群HPAI、ND病原學(xué)檢測(cè)

種雞群HPAI、ND病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果（熒光PCR）如表3所示, 均為陰性。

表3 種雞群HPAI、ND病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

2.4 ALV-P27抗原檢測(cè)

ALV-P27抗原檢測(cè)結(jié)果如表4所示。共檢測(cè)雞蛋蛋清及泄殖腔棉拭子樣品260份, ALV-P27抗原陽(yáng)性率為3.85%；其中用雞蛋蛋清檢測(cè)ALV-P27抗原陽(yáng)性率為5%；泄殖腔棉拭子檢測(cè)ALV-P27抗原陽(yáng)性率為0%。

表4 ALV-P27抗原檢測(cè)結(jié)果

3 討論

本次監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示, 該種雞場(chǎng)HPAI及ND病原學(xué)檢測(cè)均為陰性；同時(shí), HPAI及ND免疫抗體合格率均達(dá)到93%以上, 抗體合格率遠(yuǎn)高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定70%以上合格率的標(biāo)準(zhǔn)。但是檢測(cè)結(jié)果顯示有部分種禽個(gè)體的HPAI免疫抗體效價(jià)為0, 且雞群HPAI及ND的抗體效價(jià)范圍較大, 整齊度較差；HPAI H7N9免疫抗體合格率雖然比較高, 但是抗體效價(jià)平均值比較低；公雞HPAI H7N9免疫抗體合格率為82%, 遠(yuǎn)低于母雞96.88%的抗體合格率。針對(duì)檢測(cè)中所發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題, 建議該種雞場(chǎng)今后仍需定時(shí)進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè), 如發(fā)現(xiàn)抗體效價(jià)水平較低時(shí)應(yīng)進(jìn)行加強(qiáng)免疫, 同時(shí)應(yīng)定時(shí)進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè), 淘汰帶毒雞或雞群, 保證雞群高致病性禽流感及新城疫的免疫無(wú)毒無(wú)疫狀態(tài)。

從沙門氏菌檢測(cè)結(jié)果來(lái)看, 該種雞場(chǎng)SP/SG感染比較嚴(yán)重, 抗體陽(yáng)性率達(dá)23.81%（表2）。其中公雞的SP/SG抗體陽(yáng)性率為38%, 母雞的SP/SG抗體陽(yáng)性率為19.38%, 說(shuō)明種雞群沙門氏菌感染比較嚴(yán)重。由于雞白痢無(wú)疫苗進(jìn)行防治, 使用藥物預(yù)防又容易引起耐藥, 因此采取凈化是最好的防控手段, 需加強(qiáng)采樣監(jiān)測(cè), 淘汰陽(yáng)性家禽, 尤其是種公雞。通過(guò)持續(xù)采取檢測(cè)、淘汰措施, 最終達(dá)到對(duì)該病的凈化。廣西某農(nóng)牧集團(tuán)制定了行之有效的雞白痢控制方案, 持續(xù)開(kāi)展雞白痢控制與凈化工作, 2020年雞白痢抗體陽(yáng)性率控制在0.32%, 取得很好的凈化效果, 其經(jīng)驗(yàn)值得借鑒。

禽白血病血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果如表2所示, 約5%的種雞受到ALV的感染, 其中ALV-A/B抗體陽(yáng)性率為5.24%, ALV-J抗體陽(yáng)性率為2.38%, ALV-A/ B感染比ALV-J嚴(yán)重。本次檢測(cè)結(jié)果還顯示, 母雞的AL感染率比公雞高, 這與劉梅的調(diào)查結(jié)果相同, 可能與母雞對(duì)AL病原比較易感有關(guān)。本次監(jiān)測(cè)還采集了不同的樣本進(jìn)行ALV-P27抗原檢測(cè), 檢測(cè)結(jié)果如表4所示, 結(jié)果顯示雞群ALV-P27抗原陽(yáng)性率為3.85%, 其中檢測(cè)雞蛋蛋清200份, 陽(yáng)性率5%, 泄殖腔棉拭子未檢出陽(yáng)性, 可能與檢測(cè)數(shù)量過(guò)少、采集與保存方式等有關(guān)。陳俊霞等的研究數(shù)據(jù)也表明, 不同類型雞的泄殖腔棉拭子ALV-P27抗原檢測(cè)法不僅有很高的假陽(yáng)性率, 還有一定比例的漏檢率。因此, 在種雞場(chǎng)的ALV凈化過(guò)程中不建議以泄殖腔棉拭子作為檢測(cè)材料。禽白血病的凈化艱難且復(fù)雜, 胡杰等從2013—2020年在廣西11個(gè)重點(diǎn)種雞場(chǎng)按照檢測(cè)-淘汰-分群-再檢測(cè)-再淘汰的原則凈化AL, 總平均陽(yáng)性率從2013年的12.16%, 下降到2020年的0.30%, 證明了其凈化方法和思路的可行性, 值得在百色市種雞場(chǎng)進(jìn)行推廣。

疫病凈化需長(zhǎng)期堅(jiān)持, 要投入大量的人力物力及資金。張銳等研究發(fā)現(xiàn), 養(yǎng)雞場(chǎng)實(shí)施疫病凈化第一年凈收益有明顯提高, 但第二年開(kāi)始凈收益增幅放緩, 直至五年以上才開(kāi)始反彈。因此需要政府及動(dòng)物防疫部門給予強(qiáng)力的支持, 尋求新的動(dòng)物疫病凈化監(jiān)測(cè)新模式, 讓養(yǎng)殖企業(yè)有信心、有動(dòng)力把動(dòng)物疫病凈化工作堅(jiān)持下去。除了引導(dǎo)和支持種畜禽企業(yè)開(kāi)展疫病凈化, 建立無(wú)疫企業(yè)認(rèn)證制度, 建立市場(chǎng)準(zhǔn)入和信息發(fā)布制度, 定期發(fā)布無(wú)疫企業(yè)信息, 還應(yīng)該在動(dòng)物疫病凈化信息公開(kāi)、企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量安全信息透明等問(wèn)題上, 幫助養(yǎng)殖企業(yè)建立產(chǎn)品高質(zhì)量安全的品牌形象。本次調(diào)研結(jié)果說(shuō)明該種雞場(chǎng)主要疫病防控效果較好, 除SP/SG、AL感染外, 其他疫病得到有效控制。要進(jìn)一步控制和消滅SP/SG、AL就需采取凈化措施, 一是把好引種關(guān), 從凈化好的祖代場(chǎng)引入雞種, 減少或杜絕病原菌通過(guò)種雞傳播；二是切實(shí)加強(qiáng)種雞場(chǎng)的消毒劑環(huán)境監(jiān)測(cè)工作；三是加強(qiáng)雛雞飼料管理；四是做好免疫接種, 制定科學(xué)規(guī)范的免疫程序；五是加強(qiáng)種雞場(chǎng)的凈化檢測(cè)。