急性ST段抬高型心肌梗死患者血漿UCA1、miR-1表達水平及相關性分析

侯維維,郭良敏,王春彬

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)多是因寒冷刺激、暴飲暴食、激動、過勞引起的持續性冠狀動脈缺血缺氧，是我國常見急重癥，由于病情兇險、預后差，導致病死率一直居高不下，對此需盡早發現、診斷、治療[1]。ST段抬高型心肌梗死是心電圖表現為ST段弓背向上抬高曲線的AMI類型，可伴病理性Q波，誤診、漏診率仍較高，導致治療時機被延誤，故需尋找特異性好、靈敏度高的診斷標志物[2]。近年來隨著基因學及相關臨床研究備受關注，學者發現非編碼RNA常在惡性病變中發揮重要作用[3]。尿路上皮癌抗原1(urothelial cancer antigen 1，UCA1)是一種發現于膀胱移行的長鏈非編碼RNA，參與了癌胚基因發生、發展過程，目前已有研究證實其在尿路上皮癌中存在異常表達[4]。但目前關于UCA1與AMI關系研究較少，處于探索階段。基于以往研究結果，本文分析了AMI患者中UCA1表達情況，并探索了UCA1表達與miR-1及心肌損傷指標的相關性，以此探究ST段抬高型心肌梗死的發生機制，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年3月—2021年3月成都市第三人民醫院心內科收治的STEMI 患者124例為研究對象(STEMI組)，其中男75例，女49例，年齡54～61(59.35±4.22)歲，體質量58～64(61.12±3.26)kg，體質量指數22.90～24.52(23.51±2.01)kg/m2。同期醫院健康體檢者116例為健康對照組，其中男66例，女50例，年齡55～63(59.41±4.57)歲，體質量59～66(62.33±3.45)kg，體質量指數23.01～24.27(23.51±2.01)kg/m2。2組性別、年齡、體質量等比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究通過醫院倫理評審委員會審核，全部受試者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準 納入標準：①STEMI診斷符合“急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南(2019)”[5]中關于急性AMI診斷標準；②經心電圖檢查，發現病理性Q波；經冠狀動脈造影檢查，冠狀動脈內存在血栓。排除標準：①既往有心室擴大、心肌病、心力衰竭、房顫者；②合并血液系統、自身免疫性疾病者；③合并急性腦血管疾病者。

1.3 檢測指標與方法 STEMI組患者入組后第2天、健康對照組于體檢當日晨起抽取受檢者空腹外周肘靜脈血10 ml，分裝2管，其中1管5 ml，1 500 r/min離心10 min，取血清存放于冰箱(-20℃)待檢。使用全自動生化檢測儀(日本希森公司Sysmexbx-5000型)檢測心肌損傷標志物包括肌鈣蛋白I(troponin I，cTnI)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme，CK-MB)。另1管5ml加抗凝后取血漿，使用定量聚合酶鏈反應檢測miR-1、UCA1表達水平。提取總RNA進行反轉錄，按照試劑盒要求提取血漿中總RNA，UCA1和miR-1引物序列由上海吉凱基因公司提供，miR-1上游引物序列：5′-GGGGTGGAATGTAAAGAA-3′，下游引物序列：5′-TGCGTGTCGTGGAGTC-3′；UCA1上游引物序列：5′-ACGCTAACTGGCACCTTGTT-3′，下游引物序列：5′-TGGGGATTACTGGGGTAGGG-3′，采用實時熒光定量PCR儀(ABI公司PRISM 7900型)，嚴格按照說明書進行逆轉錄。建立PCR反應體系20 μl:PCR Master Mix 10 μl，目的引物1 μl，通用引物1 μl，無DNA酶水7 μl，模板CDAN 1 μl，擴增條件：3 min 95℃，40個循環，77℃ 20 s，72℃ 20 s，60℃ 20 s，95℃ 15 s。miR-1、UCA1相對表達水平采用2-△△Ct表示。

2 結 果

2.1 2組受試者UCA1、miR-1表達及cTnI、CK-MB水平比較 STEMI組血漿UCA1表達低于健康對照組，而miR-1表達及cTnI、CK-MB水平高于健康對照組，差異均具有統計學意義(P<0.01)，見表1。

表1 2組UCA1、miR-1表達及cTnI、CK-MB水平比較Tab.1 Comparision of UCA1,miR-1 expression and cTnI,CK-MB levels between 2 groups

2.2 相關性分析 Pearson分析結果表明，血漿UCA1表達與miR-1表達及cTnI、CK-MB均呈顯著負相關(r/P=-0.755、-0.581、-0.646，P<0.001)。

2.2 各項指標預測STEMI的ROC曲線分析 經ROC曲線分析，血漿UCA1、miR-1表達水平及cTnI、CK-MB水平預測STEMI的AUC分別為0.992、0.995、0.982、0.972，見表2、圖1。

3 討 論

急性心肌梗死是臨床常見疾病，其發病率和病死率均較高，給人民生命健康帶來巨大的威脅，造成沉重的社會和經濟負擔。其發病主要是因冠狀動脈血流減少、急性梗阻引起的心肌缺血缺氧，早期可出現持續性劇烈胸骨后疼痛，隨著病情惡化，可并發心力衰竭、休克、心律失常。ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者具有典型的缺血性胸痛，一般持續時間超過20 min，在心電圖檢查中可見典型ST段抬高表征，威脅患者生存質量和健康，需盡早診治[6-7]。目前多項研究表明，采用冠狀動脈介入、藥物治療能夠解除AMI患者動脈血流受限，改善心肌供血和預后。但常規介入和藥物治療的整體療效受治療時機影響，無法有效保證整體預后。因此，早期準確診斷顯得尤為重要。隨著臨床對AMI病理機制研究不斷深入，學者發現非編碼RNA在多種疾病發生發展中存在重要意義，蔡華榮等[8]研究發現長鏈非編碼RNA UCA1在非小細胞肺癌中存在異常表達失調，且有學者通過動物實驗，發現長鏈RNA作為核受體信號轉導的共激活因子，可引起心室肌收縮功能障礙，故學者推測長鏈非編碼RNA在AMI診斷中可能存在一定價值[9]。

表2 血漿UCA1、miR-1表達及cTnI、CK-MB水平預測STEMI的效能Tab.2 Efficiency of plasma UCA1,miR-1 expression and cTnI,CK-MB levels in predicting STEMI

圖1 血漿UCA1、miR-1及血清cTnI、CK-MB預測STEMI的ROC曲線Fig.1 ROC curve of plasma UCA1,miR-1 and serum cTnI,CK-MB in predicting STEMI

本研究結果表明，STEMI組相較于健康對照人群，cTnI、CK-MB水平明顯升高，UCA1表達顯著降低，說明cTnI、CK-MB、UCA1在AMI人群中存在異常表達，可作為預測心肌損傷的重要生物指標。UCA1是一種存在于血漿中的長鏈非編碼RNA，最早在膀胱移行細胞癌中發現，可在膀胱癌中出現異常表達，但無編碼蛋白質的功能，故常作為診斷膀胱癌的潛在標志物[10]。近年來隨著學者研究不斷深入，發現UCA1在心肌損傷中也有一定異常表現。推測原因是，在高糖刺激下，心肌細胞UCA1可逐漸減少，導致機體熱休克蛋白被抑制，加速心肌細胞凋亡，同時還可促使細胞色素C釋放、線粒體功能下降，減少心肌葡萄糖攝取，降低葡萄糖轉運體4水平，從而影響心肌能量代謝，加重心力衰竭[11-12]。本研究經Pearson相關分析發現，UCA1表達與cTnI、CK-MB水平呈負相關，考慮是由于UCA1表達在心功能保護中發揮一定作用，與劉崇韜等[13]研究結果相符。

miR-1是心臟中表達豐度較高的miRNA，且特異表達于心肌細胞。miR-1在抑制轉錄后基因表達中具有一定作用，可介導細胞分化、增殖，促進靶向mRNA降解過程中負向調節功能，在心肌細胞中存在特異性表達，且對心血管病變發生、發展有著重要作用[14]。本結果顯示，STEMI組miR-1表達高于健康對照組，分析原因，系機體發生AMI后，可通過受損破裂的心肌細胞滲入至體循環，加入微囊泡主動分泌，使得miR-1表達水平升高[15]。而經相關性分析，miR-1與UCA1表達呈負相關性，是因為miR-1可通過介導氧化，下調UCA1表達，當機體發生AMI后，miR-1表達升高，從而間接或直接影響UCA1結合，抑制UCA1表達，隨之miR-1降低，UCA1可從受損心肌釋放至血液中，使得體內UCA1水平逐漸上升。此外，通過線性回歸分析，miR-1會對血漿UCA1表達產生顯著的負向影響關系，但cTnI、CK-MB并不會對血漿UCA1表達產生直接關系，說明AMI體內UCA1表達含量變化與miR-1更具有直接關系，可能是因miR-1、UCA1有著相同特點，均直接參與調控心肌重塑過程，是心血管病變重要的靶向分子和生物標志物[16]。

綜上所述，STEMI患者存在UCA1表達降低，且與miR-1 cTnI、CK-MB均呈顯著負相關，可為今后STEMI疾病診斷、病情評估、預后預測提供科學依據。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

侯維維：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；郭良敏：提出研究思路，分析試驗數據，論文審核；王春杉：課題設計，進行統計學分析，論文撰寫