苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯對柑橘炭疽病菌的聯合毒力及防效

李建明，何 蓮，孔玄慶，喻 快，成淑芬，吳曉峰，歐曉明*

（1.湖南化工研究院國家農藥創制工程研究中心/湖南省農用化學品重點實驗室，長沙 410014；2.湖南化研院檢測技術有限公司，長沙 410014；3.湖南永州市農業科學研究所，湖南永州 425100）

柑橘是世界第一大果樹品種，其種植面積和產量均居果樹首位，炭疽病是柑橘的主要真菌性病害之一[1]，引起柑橘炭疽病的病原菌為膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloesporioides）。我國各柑橘種植區均有炭疽病的發生，可危害柑橘樹各部位，主要危害癥狀表現為大量落葉、落果、枝梢枯死和樹皮爆裂，嚴重時可造成植株死亡，影響果實的品質和貯藏運輸[2-4]，從而造成嚴重的經濟損失。目前柑橘炭疽病的防治仍已化學藥劑防治為主，用于柑橘炭疽病防治的登記農藥產品共有137個，其中主要以咪鮮胺、代森錳鋅和嘧菌酯為主導[5]。相同成分殺菌劑的反復使用，可造成病原菌產生抗性，從而導致防效下降，甚至失效[6]。楊媚等[7]研究發現10個具有代表性的柑橘炭疽病單孢菌株對嘧菌酯和代森錳鋅都具有一定程度的抗藥性。因此，如何有效地防治柑橘炭疽病已成為柑橘種植產業中亟需解決的重要問題。蒲占湑等[8]發現吡唑醚菌酯、嘧菌酯、咪鮮胺、唑醚·代森聯、甲基硫菌靈和丙森鋅對柑橘炭疽病菌菌絲抑制的EC50值分別為0.81、2.58、0.066、4.97、1555.15和237.98 μg/mL；陳建等[9]發現苯醚甲環唑與嘧菌酯質量比為1∶1.6的混合物對抑制炭疽病菌菌絲生長最明顯，在大田藥效試驗中，2種藥劑質量比1∶1.6混用對瑞昌山藥炭疽病的防效最好；張帥等[10]研究發現苯醚甲環唑與吡唑醚菌酯質量比為2∶1混用，對祁山藥炭疽病的防效明顯。苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯對柑橘炭疽病均有分開報道，但未見不同配比對柑橘炭疽病毒力及田間防效的報道。本研究在前人研究的基礎上，在室內開展苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯對柑橘炭疽病菌的聯合毒力，從柑橘葉片和果實發病情況來調查2種藥劑及其混合物的田間防效。通過本研究，旨在明確2種藥劑增效作用的最佳配比及田間防效，為新農藥的開發、柑橘炭疽病防治藥劑的選擇和使用提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株

膠孢炭疽菌，帶病葉片采自廣西省桂林市平樂縣，于實驗室內進行病原菌分離，得到的菌株經過純化后，再進行單孢分離，采用PDA培養基保種并培養于4℃冰箱。

1.1.2 供試藥劑

99%苯醚甲環唑原藥，湖北玖豐隆化工有限公司；98%吡唑醚菌酯原藥，山東穗泰生物科技有限公司；40%苯醚甲環唑乳油，山東貴合生物科技有限公司；30%吡唑醚菌酯乳油，青島星牌作物科學有限公司。

1.1.3 PDA培養基配方

每1000 mL水中加入去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，高壓滅菌20 min。

1.2 試驗方法

1.2.1 苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯對柑橘炭疽病菌的室內毒性測定

試驗方法參照NY/T 1156.2—2006《農藥室內生物測定試驗準則》[11]中的平皿法進行。分別稱取一定量的苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯原藥，被丙酮溶解后用0.1%的吐溫80水溶液稀釋成質量濃度為200 mg/L。取20、18、10、6、4 mL苯醚甲環唑溶液分別加入到4、6、10、18、20 mL吡唑醚菌酯溶液中，制成200 mg/L苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯質量濃度比為5∶1、3∶1、1∶1、1∶3和1∶5的混合溶液，再用0.1%的吐溫80水 溶 液 稀 釋 成50、25、12.5、6.25、3.125、1.563 mg/L備用；苯醚甲環唑用0.1%的吐溫80水溶液稀釋成50、25、12.5、6.25、3.125、1.563 mg/L；吡唑醚菌酯用0.1%的吐溫80水溶液稀釋成100、50、25、12.5、6.25、3.125 mg/L，空白對照為0.1%的吐溫80水溶液。取配制的各濃度藥液3 mL，加入冷卻至40℃左右的27 mL PDA培養基中，制成含藥培養基平板。然后從培養7 d的柑橘炭疽病菌菌落邊緣制取直徑為5 mm的菌餅，移至各含藥培養基上，菌絲面朝上，每處理4次重復。處理完畢，置于28℃的恒溫生化培養箱中培養，4 d后用卡尺十字交叉法垂直測量菌落直徑，取其平均值，按式（1）計算生長抑制率。

1.2.2 聯合毒力評價

參照《農藥室內生物測定試驗準則》[11]，采用增效系數（SR）來進行聯合毒力的測定，按式（2）～（3）分別計算EC50（理論值）和SR。

式中：A和B分別表示苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯占兩者質量總和的百分比，%；SR＜0.5為拮抗作用，0.5≤SR≤1.5為相加作用，SR＞1.5為增效作用。

1.2.3 田間藥效試驗

試驗地設在廣西省桂林市平樂縣平樂鎮高埠村，品種為早熟蜜桔。試驗時為柑橘幼果期，生長均勻一致，期間未施用其他殺菌劑，土壤為灰泥田土，常規水肥管理，施藥時為發病初期。40%苯醚甲環唑乳油、30%吡唑醚菌酯乳油及其混合物（根據聯合毒力評價結果，苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯按有效成分質量比1∶1混合）田間施藥濃度設計為2000倍液和3000倍液，同時設置清水對照。每處理4個重復，每重復2棵柑橘樹，充分搖勻后，采用常規噴霧法，由低濃度向高濃度均勻噴霧，施藥量為2 L/株樹，噴霧至藥液噴濕葉片但不滴落，共施藥2次，間隔10 d。在第1次施藥當天調查病情指數以及第2次施藥后第14 d調查施藥后病害發生情況。采取五點取樣法，每點各取2個枝條和6個果，記錄總葉數、發病葉（果）數和發病級數，按式（4）～（5）分別計算病情指數和防效。葉分級方法為0級：無病斑；1級：每葉有病斑1～5個；3級：每葉有病斑6～10個；5級：每葉有病斑11～15個；7級：每葉有病斑16～20個；9級：每葉有病斑21個以上。果分級方法為0級：無病；1級：病斑相連面積占整個果面積5%以下；3級：病斑相連面積占整個果面積6%～10%；5級：病斑相連面積占整個果面積11%～25%；7級：病斑相連面積占整個果面積26%～50%；9級：病斑相連面積占整個果面積51%以上。

1.3 數據處理

采用SPSS 16.0進行試驗數據的處理與分析。

2 結果與分析

2.1 苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯對柑橘炭疽病的聯合毒性

根據菌落生長抑制情況來分析評價苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯混合物的聯合毒性，以處理濃度的對數作為橫坐標x，菌落生長抑制率幾率值作為縱坐標y進行線性擬合，發現各處理皆具有良好的線性關系，詳見表1。試驗過程中，各處理菌落大小與空白對照組相比較，均受到不同程度的抑制作用，苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯質量配比為1∶1時，其對菌落大小的抑制最為明顯。

表1 苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯對柑橘炭疽病的室內毒性測定結果

按照Wadley法[11]，根據增效系數來評價苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯2種藥劑混用的增效作用可知，當2種藥劑質量配比為5∶1、3∶1、1∶3、1∶5時，其增效系數在0.980～1.1010之間，處于0.5～1.5范圍內，則2種藥劑的聯合作用類型為相加作用；當質量配比為1∶1時，實測EC50值為0.525 mg/L，低于苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯分別對炭疽病原菌的EC50值，增效系數為1.658，大于1.5，2種藥劑的聯合作用類型為增效作用，故可視為苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯的最佳配比。

2.2 田間藥效試驗

柑橘葉片的病情指數調查結果見表2。施藥前，柑橘園炭疽病處于發病初期，各處理的藥前病情指數均小于1，清水對照為0.653±0.125，各組間無顯著差異。在藥后14 d進行結果調查發現，清水對照病情指數為9.275±0.451，明顯高于各處理組，且與各處理組相比顯著升高。相同藥劑不同稀釋倍數之間的病情指數也具有顯著差異，其中40%苯醚甲環唑乳油2000倍液病情指數最小，為0.953±0.126，與混合物（A∶B=1∶1）2000倍液的病情指數相近，且無顯著性差異。柑橘果實的病情指數結果見表3。施藥前，各處理的病情指數無顯著性差異，其最大值為1.759±0.355，藥后14 d調查發現，清水對照病情指數為15.370±0.642，與藥前相比增加了約10倍，與各處理組相比具有顯著性差異。和葉片病情指數情況一樣，40%苯醚甲環唑乳油2000倍液的病情指數最小，與混合物（A∶B=1∶1）2000倍液的病情指數相近，組間無顯著性差異。

表2 苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯復配對柑橘葉片炭疽病的田間防效

表3 苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯復配對柑橘果實炭疽病的田間防效

對于柑橘葉片上的炭疽病防效來說，40%苯醚甲環唑乳油和30%吡唑醚菌酯乳油及兩者混合物的稀釋倍數較小，其防效較好。縱觀整體，40%苯醚甲環唑乳油2000倍液防效最好，防效為89.07%±2.00%，其次為2種藥劑質量比1∶1的混合物2000倍液，防效為87.16%±1.61%，2組防效之間無顯著性差異，說明40%苯醚甲環唑乳油2000倍液與苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯按質量比1∶1的混合物2000倍液對柑橘葉片炭疽病的防效接近。混合物3000倍液時的防效與30%吡唑醚菌酯乳油2000倍液和40%苯醚甲環唑乳油3000倍液的防效接近，無顯著性差異。根據防效及其顯著性差異分析可得，在苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯質量比1∶1的混合物相同稀釋倍數下，其防效略低于40%苯醚甲環唑乳油，但相同稀釋倍數下無顯著性差異，和相同稀釋倍數的吡唑醚菌酯防效相比較卻有顯著性提高。

該藥劑在果實上的整體防效低于葉片上的防效，但防治趨勢基本一致。最高防效為40%苯醚甲環唑乳油2000倍液，防效為84.408%±6.91%，與苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯質量比1∶1的混合物2000倍液的防效無顯著性差異，說明其防效接近。根據防效及其顯著性差異分析可得，苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯質量比1∶1的混合物在相同稀釋倍數下，其防效略低于苯醚甲環唑，但無顯著性差異，和相同稀釋倍數的吡唑醚菌酯相比較，也無顯著性差異，但防效升高。

3 結論與討論

柑橘炭疽病是柑橘管理過程中的重大病害，發病幾率大，可通過加強栽培管理，如開溝排濕、配方施肥、修剪枝條等方式減少炭疽病的發生和蔓延[12]，但化學農藥防治仍然是目前主要的防治方式。長期單一地使用化學農藥容易誘導病原菌對其產生抗性，導致防效下降。植物病原物抗藥性的進化已經成為農作物病害防治中的重大威脅[13]。因此，篩選活性高的單劑農藥或復配劑已經成為防治病蟲害的重要方式，復配劑不僅能增加防效、擴大防治譜，還能延緩或克服抗藥性[14]。

苯醚甲環唑是一種廣譜的三唑類殺菌劑，是甾醇脫甲基化抑制劑，具有高效、安全、低毒等特點，廣泛用于真菌病害的防治[15]。吡唑醚菌酯屬于甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，其廣譜、高效、毒性低，對卵菌、真菌等引起的植物病害均有效，對非靶標生物安全，對使用者和環境均安全友好[16]。在本次室內毒力測定中，苯醚甲環唑的EC50實測值為0.593 mg/L，姜于蘭等[17]研究發現10%苯醚甲環唑水分散粒劑對柑橘炭疽病原菌的EC50值為0.0212 μg/mL，其毒性遠高于本研究，可能在于不同采集地的病原菌對同一藥劑的抗性有所差異，而楊媚等[7]研究結果為0.3599 mg/L，與本研究結果接近；吡唑醚菌酯的EC50實測值為1.635 mg/L，與蒲占湑等[8]研究得到的0.81 mg/L相比，是其2倍。苯醚甲環唑與吡唑醚菌酯以1∶1的質量比混合時，在室內毒力測定中具有明顯的增效作用。因此，本文進行了苯醚甲環唑單劑、吡唑醚菌酯單劑及兩者質量比1∶1混合物的田間藥效試驗，以此來評價2種單劑與其混合物的防效關系。

在田間藥效試驗中，陳怡志等[18]發現將咪鮮胺與苯醚甲環唑混配后，其對柑橘炭疽病的防效均優于2種單劑的單獨防效；宋曉兵等[19]研究發現將吡唑醚菌酯和二氰蒽醌混配后，其對香蕉炭疽病的防效高于2種單劑。些說明在田間試驗中，2種成分的混用、混配同樣也具有一定的增效作用。在本研究中，綜合葉片及果實上炭疽病的防效發現，相同稀釋倍數下，苯醚甲環唑單劑的防效最好，吡唑醚菌酯單劑的防效最差，兩者質量比1∶1混合物的防效居中，但通過差異顯著性分析發現，其與苯醚甲環唑單劑的防效無顯著性差異（P＜0.05），說明相同倍液下，混合物與苯醚甲環唑能達到相近的防效，在2000倍液時，其對葉和果的防效均超過80%。此外，本次田間藥效試驗只進行2次施藥，若采用3次施藥，苯醚甲環唑與吡唑醚菌酯混合物的防效會更好。推薦對柑橘炭疽病采用3次施藥[18]、每次間隔7 d來進行防治。綜上所述，苯醚甲環唑與吡唑醚菌酯質量比1∶1時，增效明顯，且防效較好，能避免長期單一大量使用某一藥劑而引起病原菌產生抗性可以推廣使用。與此同時，和使用單劑相比較，混配劑在同樣的防效條件下還能減少各成分的使用劑量，減少對環境的污染。