2017-2021年順昌縣牛羊O型口蹄疫免疫抗體檢測與分析

張玉巧 順昌縣動物疫病預防控制中心 福建 順昌 353200

口蹄疫（Foot-and-mouth disease，FMD）是一種由 口 蹄 疫 病 毒 （Foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的可感染偶蹄類動物如豬、牛、羊等的高度傳染水泡性疫病[1]。不同年齡的動物感染口蹄疫后，出現的癥狀也不一樣。一般成年動物感染時體溫不斷上升，口腔黏膜、蹄部和胸部皮下等許多部位都產生水泡，最嚴重時可致死；幼齡動物感染口蹄疫后，則會在出現水泡前，發生一系列疾病如急性心肌炎、心肌梗死等導致提前死亡，所以，幼齡動物感染后的病死率會比成年動物高，病死率接近100%[2]。成年動物感染口蹄疫后雖然病死率低，但是發病率極高，如果一個養殖場有病例出現，基本會導致全場豬100%發病。它不但會嚴重影響感染動物的正常生長發育，而且還會造成生產能力大幅減少，從而嚴重抑制畜牧業發展，給畜牧業生產和對外貿易帶來巨大損失。所以，我國把口蹄疫定為一類動物疫病[3-5]。

本研究對2017-2021年南平市順昌縣抽檢的1 670份血清樣品進行O型口蹄疫（FMD）抗體檢測并加以統計分析，以期為順昌縣當地動物疫病防控管理部門提供科學精準的疫病防控技術支撐和決策參考。同時為“春防秋控”建立標準化采樣體系，對各地區、各養殖場臨床生產的疾病預防、疾病控制與免疫程序調整提出科學的建議，推動當地畜牧業健康快速發展。

1 材料與方法

1.1 樣品來源及處理 本中心于2017-2021年采集南平市順昌縣牛羊血液樣本共1 670份，每年采樣情況見表1。樣品采集后將采血管傾斜45°放置，室溫靜置2～4 h，待血液完全凝固后血清自然析出，3 000 r/min離心5 min，將上清轉移至無菌離心管中，做好標記，置-20℃保存、備用。

表1 2017-2021年順昌縣牛羊血液樣本采集情況

1.2 試劑 本研究所使用的O型FMD抗體ELISA檢測試劑盒購自韓國金諾。試劑盒中含有標準陽性血清、標準陰性血清、樣品稀釋液、辣根過氧化物酶（HRPO）、已包被好抗原的96孔酶聯反應板、洗滌液、TMB底物溶液和終止液等。

1.3 方法與結果判定 將O型FMD抗體ELISA檢測試劑盒從4℃冰箱中提前取出，恢復至室溫（25℃左右）。檢測操作步驟及結果判定均按照抗體檢測試劑盒說明書進行。

1.4 數據處理與分析 用Excel軟件對2017-2021年南平市順昌縣牛羊血清樣品中O型口蹄疫抗體檢測結果按不同年份、不同季節和不同養殖場類型進行統計分析。使用IBM SPSS Statistics 21統計學軟件對不同年份、不同季節和不同養殖場類型的抗體陽性率進行卡方檢驗，統計分析其差異性，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結 果

2.1 不同年份O型口蹄疫抗體檢測結果 由表2可知，2017-2021年南平市順昌縣牛羊O型FMD抗體每年的陽性率分別為69.7%、80.0%、78.1%、95.4%和97.2%，除2019年外，其余年份的合格率呈現逐年上升趨勢。經卡方檢驗，2017年與2018年相比，存在極顯著差異（P＜0.01）；2018年與2019年相比，不存在顯著差異（P＞0.05）；2019年與2020年相比，存在極顯著差異（P＜0.01）；2020年與2021年相比，不存在顯著差異（P＞0.05）。

表2 2017-2021年O型口蹄疫抗體年度檢測結果

表3 2017-2021年O型口蹄疫抗體春秋季檢測結果

2.2 不同季節O型口蹄疫抗體檢測結果 根據表3的統計結果，繪制不同季節抗體合格率柱狀圖，圖1A和圖1B分別為2017-2021年春季和秋季的抗體檢測結果。2017-2021年春季的平均合格率為85.5%，秋季的平均合格率為84.0%，經卡方檢驗，春季和秋季的合格率不存在顯著性差異（P＞0.05）。

圖1 2017-2021年春秋季抗體合格率柱狀圖

2.3 不同養殖場類型O型口蹄疫抗體檢測結果根據表4進行統計分析，結果顯示2017-2021年散養戶的平均合格率為81.3%，規模場的平均合格率為90.5%，經卡方檢驗，散養戶和規模場的合格率存在極顯著性差異（P＜0.01）。

表4 2017-2021年不同養殖場類型抗體檢測結果

3 分析與討論

3.1 影響血清學檢測的因素 牛羊血清學抗體檢測結果的可信度受到個體差異、不同抗原的特性、母源抗體、感染或免疫后的時間、免疫次數或再次感染等多種因素的影響，因此，在血清學標準采樣中應該對養殖場的存欄情況、生產情況、免疫情況、歷史抗體檢測情況、養殖場常見問題等進行全面了解并登記，采樣比例需根據各方面情況綜合評定后才能制定針對各階段、各類型牛羊的科學采樣方案。例如口蹄疫疫苗免疫后，一般是在21 d左右抗體效價達到高峰期，在檢測牛羊口蹄疫抗體時，如果采樣過早或過晚，可能會導致抗體檢測結果偏低，因此，建議在免疫后21 d左右進行采樣檢測，效果最佳。

3.2 FMD抗體檢測在牛羊生產中的重要性 目前，多半的發達國家已經根除了口蹄疫，口蹄疫的發病國家主要集中在發展中國家[6]。國際上，對口蹄疫的防控，主要包括通過免疫、撲殺和監測等各種措施來防范和遏制口蹄疫的傳入[7]。血清學檢測技術是各個養殖生產領域中疾病診斷和防控的關鍵技術手段，定期有計劃地對牛羊開展FMD抗體檢測，對檢測結果進行統計分析，既能夠掌握牛羊口蹄疫抗體的消長變化規律，為制定最佳的免疫規劃，及時加強免疫，從而提升牛羊的抗體水平，也可以評估牛羊的免疫效果，改善和優化現有的免疫程序，同時對檢測結果進行建檔，了解牛羊群體健康情況，可作為疫病防控的重要依據。根據抗體檢測結果，可以分析養殖場當前的實際生產問題以及可能由哪些因素所引起，進而提出具體的優化方法，最后目的就是實現對相關疾病的凈化，從而緩解養殖場的實際生產問題，并提高養殖場生產業績。通過對FMD抗體進行監測，可以避免牛羊出現免疫空白期，提高群體免疫保護力，即使養殖場出現零星病例，也能夠有效防止大規模疫情暴發。另外，通過對未免疫的牛羊進行FMD抗體水平檢測，能夠及時發現隱形感染病例，進而精確地掌握養殖場的污染情況，進一步制定疫情防控措施。

3.3 抗體低下情況下的補免及預防保健建議 血清學ELISA檢測法具有性價比高、高效安全、特異靈敏度好等優勢，養殖場平常應定期進行各種疾病抗體的檢測，防重于治，要巧用檢測來降低或消除風險。平常的抗體檢測是最重要的，不要等發病了才去采血檢測。特別是當養殖場發展到一定規模，要做好可持續經營發展，必須重視抗體檢測。不管養殖場大小，科學的做法就是每季度給牛羊群做一次健康體檢。同時要注意抗體監測樣品要有相當的數量才具有統計意義，數量太少時不能代表整個養殖場的抗體水平，數量過多時不經濟，小型及散養戶各階段建議按10%～30%比例進行采樣。

通過科學的方式分析牛羊免疫狀況，為養殖場管理人員提供數字化的免疫學信息，并指導養殖場科學規劃整體生產流程。2017-2021年，順昌縣抽檢的1 670份血清樣品，除2017年的O型口蹄疫抗體合格率較低外，其他年份均達到78%以上，免疫效果達到我國最低標準（抗體陽性率≥70%）。通過對比發現，春秋兩個季節的抗體合格率不存在顯著性差異，春季的合格率略高于秋季。但是散養戶的合格率與規模場存在極顯著性差異，而且2017年的散養戶合格率為67.3%，明顯低于國家最低標準，表明可能出現漏免或免疫不合格的狀況，所以，應該強化管理，并適時進行免疫。按照我國最低標準，建議進一步完善免疫程序，以提高牛羊的免疫合格率，以減少口蹄疫發生的可能性。

在我國，針對口蹄疫的防治措施主要是通過免疫技術來加以控制，同時采取一系列其他防控措施。如制定多種偶蹄獸動物的衛生防疫制度，定期對進出養殖場的車輛、養殖場環境、料槽和棚舍等進行多重消毒，阻止病原的傳播，消毒劑可以選用過氧乙酸、石灰乳和燒堿等。為動物提供較好的生長環境，平時注重圈舍的衛生和消毒；普及和提高養殖戶的疫病防控意識，促進防控工作的實施；養殖場內盡量做到自繁自養，非必要不引種；免疫工作認真進行，合理規范使用疫苗[8-10]。雖然我國對口蹄疫的防控措施到位，但是目前仍有部分地區出現散發性病例，主要原因是從國外引種，導致國外毒株不斷傳入，因此，針對口蹄疫進行快速診斷必不可少。

結果分析表明順昌縣牛羊O型口蹄疫免疫情況與免疫效果總體上較為理想，雖然2017年的免疫效果較差，但隨后幾年合格率顯著提高，都能達到標準。由于各個年份、季節以及不同養殖場的免疫水平都有一定差異，所以，各地各場要針對養殖場自身情況，對口蹄疫的流行狀況建立科學合理的免疫程序，并運用ELISA方法定期對牛羊進行常見疾病的普查，以有效消除隱性感染動物，定期對進 出養殖場的車輛和其他相關用品進行消毒，預防疾病于未然，最大限度減少因動物疾病所造成的經濟損失。