不同免疫劑量與次數對蛋雞禽流感抗體效價的影響

饒 希 清流縣畜牧獸醫水產中心 福建 清流 365300

禽流感（Avian influenza，AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）感染家禽后引起的病毒性疫病，其中高致病性禽流感具有發病急、傳播快、發病率和病死率高等特征，不僅對家禽業危害巨大，而且具有重要公共衛生學意義[1]，我國將其列入一類病種。接種疫苗是目前我國控制禽流感的重要措施，2018年以來全國強制免疫使用重組禽流感三價滅活疫苗（H5N1 Re-11+Re-12株+H7N9 Re-2株），但禽流感病毒具有基因型復雜、變異快等特點，隨著時間推移，禽流感流行毒株已發生變異。2022年3月，全國決定統一采用新的禽流感重組三價疫苗（H5N6 H5-Re13株+H5N8 H5-Re14株+H7N9 H7-Re4株），目前尚未見對新疫苗免疫效果的報道。本試驗旨在研究不同劑量和免疫次數對蛋雞禽流感抗體消長規律的影響，為新毒株禽流感疫苗免疫程序的優化提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 試驗在清流縣鑫鴻盛生態養殖有限公司蛋雞養殖場進行，選擇35日齡蛋雞160羽（AIV母源抗體衰減至4log2以下）進行試驗。

1.2 免疫疫苗 重組禽流感病毒三價滅活疫苗（H5N6 H5-Re13株+H5N8 H5-Re14株+H7N9 H7-Re4株），青島易邦生物工程有限公司生產（批號：獸藥生字150132368）。

1.3 免疫分組與免疫劑量 試驗蛋雞隨機分為單次免疫組（Ⅰ組、Ⅱ組）和兩次免疫組（Ⅲ組、Ⅳ組），共4組，每組40羽。Ⅰ組免疫接種0.5 mL（疫苗說明書推薦劑量）；Ⅱ組免疫接種1.0 mL；Ⅲ組首免接種0.5 mL，二免接種0.5 mL；Ⅳ組首免接種0.5 mL，二免接種1.0 mL。免疫接種部位為頸部皮下。

1.4 檢測試劑 禽流感病毒H5亞型（Re-13株、Re-14株）、H7亞型（Re-4株）血凝抑制試驗抗原及陰陽對照血清，均由哈爾濱國生生物科技服份有限公司生產（批號：20220316，規格：2 mL/瓶）。

1.5 抗體檢測方法 根據《高致病性禽流感診斷技術》（GB/T18936-2020），待檢樣品血清以完全抑制（完全流淌）4個HAU抗原的血清最高稀釋倍數作為HI滴度。HI值小于或等于3log2時判定HI試驗陰性；HI值等于4log2時為可疑；HI值大于或等于5log2時判定HI試驗陽性。免疫合格率（免疫合格個體數占群體總數）大于或等于70%為群體免疫合格。

1.6 采血 各組（40羽）在首免接種后第21 d、90 d、150 d、180 d分別進行翅下靜脈采血。

2 結 果

2.1 抗體效價 疫苗免疫后，不同日齡蛋雞血清中H5亞型（Re-13株、Re-14株）、H7亞型（Re-4株）3種抗體滴度見圖1-圖3。各組21 d時抗體滴度水平最高，HI值均達7.9log2以上，隨著時間延長，HI值呈逐漸下降趨勢。單次免疫組（Ⅰ組、Ⅱ組）90 d時開始下降，180 d時Ⅰ組的3種抗體HI值分別為3.8log2、4.1log2、3.6log2，Ⅱ組的3種抗體HI值均為3.9log2。

圖1 各組H5Re-13株抗體消長情況

圖3 各組H7Re-4株抗體消長情況

兩次免疫組（Ⅲ組、Ⅳ組）150 d時開始下降，180 d時Ⅲ組的3種抗體HI值分別為7.5log2、7.3log2、7.2log2，Ⅳ組 的3種 抗 體HI值 分 別 為7.6log2、7.4log2、7.3log2。

圖2 各組H5Re-14株抗體消長情況

2.2 抗體平均合格率 疫苗免疫后，不同日齡蛋雞血清中H5亞型（Re-13株、Re-14株）、H7亞型（Re-4株）3種抗體的平均合格率見圖4-圖6。各組21 d時合格率均達95%以上，單次免疫組（Ⅰ組、Ⅱ組）的合格率從90 d逐漸下降，150 d時合格率處于保護臨界值，180 d時低于國家要求的最低標準（70%）；兩次免疫組（Ⅲ組、Ⅳ組）的合格率從150 d逐漸下降，180 d時合格率仍達80%以上。

圖4 各組H5Re-13株抗體平均合格率

圖5 各組H5Re-14株抗體平均合格率

圖6 各組H7Re-4株抗體平均合格率

3 討 論

1）通過抗體監測，首免后21 d，Ⅳ組3種抗體滴度水平均達7.9log2以上，群體合格率95%以上，表明新型重組禽流感三價滅活疫苗具有良好免疫原性。通過比較，Ⅰ組與Ⅱ組的抗體滴度和合格率差異不顯著，表明加大劑量并不能顯著提高免疫效果，在實際中免疫劑量按疫苗說明要求即可達到免疫效果，與楊飛燕等[2]研究結果一致。

單次免疫組的免疫有效期較短，90 d時抗體滴度、合格率均開始下降，150 d時抗體滴度處于保護臨界值，180 d時低于國家標準（小于70%）。兩次免疫組180 d時抗體滴度、合格率仍高于國家標準，下一步還應延長檢測時間，確定有效抗體滴度持續程度。通過單次免疫組（Ⅰ組、Ⅱ組）與兩次免疫組（Ⅲ組、Ⅳ組）的比較，結果顯示兩次免疫的抗體持續時間比單次免疫更長，與陳淵泉[3]對麻鴨和番鴨禽流感免疫的研究結果一致。兩次免疫劑量加強組（Ⅳ組）的免疫效果與兩次免疫常規劑量組間無明顯差異，生產實際中，考慮疫苗成本、藥物殘留、安全性等因素，建議蛋雞場按說明劑量免疫2次是最優的免疫程序。

2）做好禽流感防控，除了接種免疫，還應做好生物安全、飼養管理、日常消毒等工作，建議每間隔2個月定期按比例進行抗體監測，要求群體抗體滴度要大于或等于4log2，但江斌等[4]認為群體抗體滴度要大于或等于6log2才能抵擋病毒傳染。

3）本試驗為制定免疫程序提供參考依據，各養殖場在具體免疫時，應根據養殖品種、母源抗體等情況，制定具體的免疫程序。