基于數(shù)據(jù)挖掘和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)腹瀉型腸易激綜合征的方證探討

王璐 饒穎 周佳林 戴琦

1.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 330000 2.江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 3.江西省中醫(yī)消化病臨床研究基地

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是一種以腹痛、腹脹為主要癥狀，與排便相關(guān)或伴有排便習(xí)慣改變的疾病[1]，臨床常規(guī)檢查尚無(wú)法解釋這些癥狀。羅馬Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)將IBS的糞便性狀，稀水樣便的比例大于25%，塊狀便的比例小于25%的定義為腹瀉型腸易激綜合征（irritable bowel syndrome with predominant diarrhea，IBS-D）[2-3]。 中醫(yī)認(rèn)為IBS-D屬于“泄瀉”“腹痛”的范疇，其病位在腸，與肝、脾、腎等多臟腑有關(guān)；病性可由實(shí)轉(zhuǎn)虛，虛實(shí)夾雜；病機(jī)為肝失疏泄，橫逆犯脾，脾失健運(yùn)，濕從中生，脾虛日久，脾陽(yáng)不足，累及腎陽(yáng)，脾腎兩虛，并將其分為肝郁脾虛型、脾虛濕盛型、脾腎陽(yáng)虛型、脾胃濕熱型和寒熱錯(cuò)雜型[4]。中醫(yī)以整體觀念和辨證論治為治療原則，證型之間多有聯(lián)系，為了進(jìn)一步探索證型、方藥之間的關(guān)聯(lián)，本研究以數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)為基礎(chǔ)，對(duì)中藥治療脾虛濕盛型和脾腎陽(yáng)虛型IBS-D的方證關(guān)系進(jìn)行探討分析。

1 材料和方法

1.1 資料收集 對(duì)中國(guó)知網(wǎng)（China National Knowledge Infrastructure，CNKI）、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)服務(wù)系統(tǒng) （Chinese Biomedical Literature Service system，SinoMed）、萬(wàn)方期刊數(shù)據(jù)庫(kù)（Wanfang Database）、維普中文期刊數(shù)據(jù)庫(kù)（VIP Database for Chinese Technical Periodicals）四大中文數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。以“腹瀉型腸易激綜合征”“腸易激綜合征”“腹瀉”等為關(guān)鍵詞或主題詞，搜索從建庫(kù)至2020年12月的相關(guān)文獻(xiàn)，提取相關(guān)的證型、方藥等信息。根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)剔除不符合要求的文獻(xiàn)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 采用中藥內(nèi)治法治療脾虛濕盛型或脾腎陽(yáng)虛型IBS-D的文獻(xiàn)，且治療有效，文獻(xiàn)有明確的方劑及藥物組成。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）個(gè)案報(bào)道、綜述類、動(dòng)物類或?qū)嶒?yàn)類文獻(xiàn)；（2）資料來(lái)源不清，方劑、藥物不具體或信息嚴(yán)重缺失，且研究對(duì)象除IBS-D外合并有其他疾病的文獻(xiàn)；（3）重復(fù)發(fā)表、研究數(shù)據(jù)雷同者，只收錄其中發(fā)表時(shí)間最近的文獻(xiàn)。

1.3 名詞術(shù)語(yǔ)規(guī)范化 以衛(wèi)生部“十二五”規(guī)劃教材人民衛(wèi)生出版社（第二版）《中藥學(xué)》和2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》為參照，對(duì)因用藥部位不同、存在別名、炮制方式等導(dǎo)致藥物名稱不統(tǒng)一情況進(jìn)行規(guī)范，如：當(dāng)歸、當(dāng)歸身、當(dāng)歸尾等統(tǒng)稱為當(dāng)歸，金鈴子規(guī)范為川楝子，半夏曲、姜半夏統(tǒng)稱半夏；若功效有異，則保留原名，如生地黃和熟地黃等。

1.4 數(shù)據(jù)處理 通過(guò)雙人分別錄入的方法將文獻(xiàn)數(shù)據(jù)規(guī)范導(dǎo)入WPS Office Excel工作表，進(jìn)行數(shù)據(jù)整理后篩選出高頻中藥，并利用IBM SPSS Modeler 18.1軟件對(duì)脾虛濕盛型和脾腎陽(yáng)虛型相關(guān)處方進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析。

1.5 中藥活性成分及靶點(diǎn)收集 利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP） 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://tcmspw.com/tcmsp.php）、中醫(yī)藥百科全書（The Encyclopedia of Traditional Chinese Medicine，ETCM）數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.tcmip.cn/ETCM）對(duì)整理出的中藥進(jìn)行活性成分收集，在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中設(shè)置口服利用度（oral bioavailability，OB）≥30%、類藥性（drug-likeness，DL）≥0.18。 利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.uniprot.org/）對(duì)收集到的活性成分進(jìn)行靶點(diǎn)比對(duì)。

1.6 疾病靶點(diǎn)收集 利用基因疾病關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)庫(kù)（Gene-Disease Association Database，DisGeNET）（https://www.disgenet.org/）、 人類基因綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（Human Gene Comprehensive Database，GeneCards） （https://www.genecards.org/）、人類孟德爾遺傳在線（Online Mendelian Inheritance in Man，OMIM）數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.omim.org/）檢索IBS-D相關(guān)靶點(diǎn)，篩重后進(jìn)行記錄整理。

1.7 靶點(diǎn)整理和可視化 對(duì)脾虛濕盛型和脾腎陽(yáng)虛型IBS-D中的核心中藥活性成分與疾病的交集靶點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并利用Cytoscape 3.9.0軟件構(gòu)建成分-靶點(diǎn)圖。

1.8 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（protein-protein interactions，PPI）構(gòu)建 將所得關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)（https://string-db.org/），設(shè)置物種為人，置信度≥0.400，運(yùn)用Cytoscape 3.9.0軟件進(jìn)行可視化處理。

1.9 基因本體（gene ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）富集分析 將關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)（https://david.ncifcrf.gov/），設(shè)置物種為人，進(jìn)行GO和KEGG富集分析，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行可視化處理。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索和數(shù)據(jù)匯總 文獻(xiàn)檢索提示脾虛濕盛型文獻(xiàn)182篇，處方188個(gè)，中藥145味，共使用2 149次；脾腎陽(yáng)虛型文獻(xiàn)133篇，處方135個(gè)，中藥122味，共使用1 571次。

2.2 高頻中藥與關(guān)聯(lián)規(guī)則

2.2.1 脾虛濕盛型 脾虛濕盛型IBS-D的前10味高頻中藥分別為白術(shù)（171次）、甘草（155次）、茯苓（150次）、黨參（122次）、薏苡仁（87次）、陳皮（84次）、山藥（81次）、白芍（69次）、砂仁（69次）、白扁豆（63次）。 見(jiàn)表1。將數(shù)據(jù)導(dǎo)入IBM SPSS Modeler 18.1軟件，設(shè)置鏈接大小連續(xù)變化，其中線條粗細(xì)代表關(guān)聯(lián)強(qiáng)度，繪制關(guān)聯(lián)規(guī)則網(wǎng)絡(luò)圖，結(jié)果顯示白術(shù)、甘草、茯苓、黨參4味中藥互為關(guān)聯(lián)，且關(guān)聯(lián)度較強(qiáng)。見(jiàn)圖1。使用Apriori算法進(jìn)行建模，進(jìn)一步分析不同中藥的配伍關(guān)系，設(shè)置支持度≥45.00%（前后項(xiàng)藥物在所有處方中同時(shí)出現(xiàn)的概率），置信度≥90.00%（前項(xiàng)出現(xiàn)時(shí)后項(xiàng)藥物出現(xiàn)的概率），最大前項(xiàng)數(shù)5，提升度≥1（大于1表明前后項(xiàng)藥物之間的關(guān)聯(lián)有效），按置信度排序，得到11條結(jié)果。見(jiàn)表2。結(jié)合高頻藥物和關(guān)聯(lián)規(guī)則所示結(jié)果，推測(cè)白術(shù)、甘草、茯苓、黨參為脾虛濕盛型IBS-D的核心中藥配伍。

表1 治療脾虛濕盛型IBS-D前10味高頻中藥

圖1 中藥治療脾虛濕盛型IBS-D關(guān)聯(lián)規(guī)則網(wǎng)絡(luò)圖

表2 中藥治療脾虛濕盛型IBS-D關(guān)聯(lián)規(guī)則

2.2.2 脾腎陽(yáng)虛型 脾腎陽(yáng)虛型IBS-D的高頻中藥前10位分別為白術(shù)（111次）、補(bǔ)骨脂（94次）、肉豆蔻（91次）、茯苓（86次）、甘草（85次）、黨參（74次）、吳 茱萸（70次）、白芍（67次）、五味子（60次）、山藥（55次）。見(jiàn)表3。將數(shù)據(jù)導(dǎo)入IBM SPSS Modeler 18.1軟件進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析，結(jié)果顯示補(bǔ)骨脂-肉豆蔻、白術(shù)-補(bǔ)骨脂、白術(shù)-茯苓、白術(shù)-肉豆蔻、白術(shù)-甘草、白術(shù)-黨參、補(bǔ)骨脂-吳茱萸、補(bǔ)骨脂-甘草、肉豆蔻-吳茱萸關(guān)聯(lián)性強(qiáng)。見(jiàn)圖2。設(shè)置支持度≥45.00%，置信度≥90.00%，最大前項(xiàng)數(shù)5，提升度≥1，得到4條關(guān)聯(lián)規(guī)則結(jié)果，其中2藥2條，3藥2條，分別為黨參-白術(shù)；吳茱萸-補(bǔ)骨脂；吳茱萸+肉豆蔻-補(bǔ)骨脂；吳茱萸+補(bǔ)骨脂-肉豆蔻。見(jiàn)表4。結(jié)合高頻藥物和關(guān)聯(lián)規(guī)則結(jié)果，推測(cè)中藥治療脾腎陽(yáng)虛型IBS-D核心配伍或?yàn)檠a(bǔ)骨脂、吳茱萸、肉豆蔻，并根據(jù)臨床情況辨證加入白術(shù)、甘草、黨參、茯苓等藥物。

圖2 中藥治療脾腎陽(yáng)虛型IBS-D關(guān)聯(lián)規(guī)則網(wǎng)絡(luò)圖

表3 治療脾腎陽(yáng)虛型IBS-D前10味高頻中藥

表4 中藥治療脾腎陽(yáng)虛型IBS-D關(guān)聯(lián)規(guī)則

2.3 靶點(diǎn)收集 數(shù)據(jù)挖掘顯示脾虛濕盛型核心配伍或?yàn)榘仔g(shù)、甘草、黨參、茯苓，脾腎陽(yáng)虛型或?yàn)檠a(bǔ)骨脂、吳茱萸、肉豆蔻，利用TCMSP、ETCM數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)以上中藥進(jìn)行活性成分和靶點(diǎn)收集。見(jiàn)表5。檢索DisGeNET、GeneCards、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)中IBS-D的相關(guān)靶點(diǎn)，去重后共收集到靶點(diǎn)554個(gè)。

表5 中藥有效活性成分和靶點(diǎn)數(shù)

2.4 交集靶點(diǎn) 統(tǒng)計(jì)兩個(gè)證型對(duì)應(yīng)中藥與疾病IBS-D的交集靶點(diǎn)，結(jié)果顯示白術(shù)、甘草、茯苓、黨參與IBS-D交集靶點(diǎn)tar-one共78個(gè)，補(bǔ)骨脂、吳茱萸、肉豆蔻與IBS-D交集靶點(diǎn)tar-two共80個(gè)， 對(duì)tar-one和tar-two的交集靶點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得到tar-common靶點(diǎn)54個(gè)。見(jiàn)圖3。應(yīng)用Cytoscape 3.9.0軟件制作中藥成分-疾病靶點(diǎn)圖，并進(jìn)行拓?fù)浞治觥Ｒ?jiàn)圖4～5。

圖3 tar-one和tar-two交集靶點(diǎn)

圖4 tar-one中藥成分-疾病靶點(diǎn)可視化

圖5 tar-two中藥成分-疾病靶點(diǎn)可視化

圖4為白術(shù)、茯苓、甘草、黨參4味藥對(duì)IBS-D的中藥成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖。淺紅色三角形為共有靶點(diǎn)tar-common，藍(lán)色v形為除外共有靶點(diǎn)的其他靶點(diǎn)，黃色圓形為茯苓的有效成分，紅色圓形為白術(shù)的有效成分，紫色圓形為黨參的有效成分，綠色圓形為甘草的有效成分。圖5為吳茱萸、補(bǔ)骨脂、肉豆蔻三味藥對(duì)IBS-D的中藥成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，淺紅色三角形為靶點(diǎn)tar-common，紫色v形為除外共有靶點(diǎn)的其他靶點(diǎn)，綠色圓形為補(bǔ)骨脂有效成分，藍(lán)色圓形為肉豆蔻有效成分，黃色圓形為吳茱萸有效成分。結(jié)合兩圖可發(fā)現(xiàn)，藥物治療IBS-D的關(guān)鍵靶點(diǎn)或?yàn)閠ar-one和tar-two交集靶點(diǎn)，即tar-common。

拓?fù)浞治鲲@示，白術(shù)中3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮（3β-acetoxyatractylone）， 甘草中槲皮素（quercetin），茯苓中常春藤皂苷元（hederagenin），黨參中木犀草素（luteolin），補(bǔ)骨脂中二十四烷酸（lignoceric acid），肉豆蔻中β-谷甾醇 （β-sitosterol），吳茱萸中槲皮素（quercetin）為藥物治療IBS-D的核心成分。

2.5 PPI結(jié)果可視化分析 分別將tar-one、tar-two、tar-common導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)，應(yīng)用Cytoscape 3.9.0軟件將得到的結(jié)果進(jìn)行可視化分析，按節(jié)點(diǎn)度值（degree）排序，節(jié)點(diǎn)越大、顏色越深表明度值越高。見(jiàn)圖6～8。 由圖可知，tar-one、tar-two中的關(guān)鍵靶點(diǎn)與tar-common相似，主要為細(xì)胞腫瘤抗原p53（tumor protein p53，TP53）、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）、 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA）、白介素-1B（interleukin-1B，IL-1B）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）。

圖6 tar-one PPI網(wǎng)絡(luò)

圖7 tar-two PPI網(wǎng)絡(luò)

圖8 tar-common PPI網(wǎng)絡(luò)

2.6 GO和KEGG富集分析 將tar-one、tar-two、tarcommon導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行GO和KEGG富集分析，設(shè)P≤0.05，GO富集分析中得到生物過(guò)程（biological process，BP） 條目tar-one共277條，tar-two共293條，tar-common共271條；KEGG分析結(jié)果tar-one共83條，tar-two共81條，tar-common共76條。對(duì)三組結(jié)果進(jìn)行交集分析，發(fā)現(xiàn)按P值排列，tar-common中有228條GO分析和69條KEGG分析的條目均存在于tar-one和tar-two中。 見(jiàn)圖9～10。 對(duì)tar-common中GO分析及KEGG分析的前20條結(jié)果以及tar-one、tar-two的非交集部分進(jìn)行可視化分析，其中非交集部分的GO富集分析條目較多，只取前10條。見(jiàn)圖11～12。

圖9 tar-one、tar-two和tar-common的GO交集分析

圖10 tar-one、tar-two和tar-common的KEGG交集分析

圖11 GO富集分析

圖12 KEGG富集分析

tar-common中GO富集分析主要為基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)脂多糖的反應(yīng)、一氧化氮生物合成過(guò)程等。tar-common中KEGG通路富集分析主要為癌癥途徑、癌癥中蛋白聚糖、胰腺癌、膀胱癌、甲型流感、南美錐蟲病（美洲錐蟲病）、利什曼病、弓形蟲病、結(jié)核、丙型肝炎、乙型肝炎、炎癥性腸病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、瘧疾、阿米巴病、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、Toll樣受體（Toll-like receptors，TLR）信號(hào)通路、缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）信號(hào)通路、T細(xì)胞受體信號(hào)通路、NOD樣受體（NOD-like receptors，NLR）信號(hào)通路等。

tar-one中GO分析的非交集條目主要與γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）信號(hào)通路、激活磷脂酶C的G蛋白偶聯(lián)乙酰膽堿受體信號(hào)通路、腺苷酸環(huán)化酶抑制G蛋白偶聯(lián)乙酰膽堿受體信號(hào)通路、G蛋白偶聯(lián)乙酰膽堿受體信號(hào)通路、離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、氯化物的運(yùn)輸轉(zhuǎn)運(yùn)、膽固醇代謝、平滑肌收縮正向調(diào)節(jié)等通路有關(guān)。KEGG分析包括逆行內(nèi)源性大麻素信號(hào)、神經(jīng)活性配體-受體相互作用、嗎啡成癮、尼古丁成癮、GABA能突觸、藥物代謝-細(xì)胞色素P450、脂肪細(xì)胞因子信號(hào)通路、膽堿能突觸、腎細(xì)胞癌、甲狀腺癌、細(xì)胞色素P450對(duì)異生素的代謝等。

tar-two中GO分析為疼痛的感官知覺(jué)、IL-6產(chǎn)生的負(fù)調(diào)節(jié)、IL-10產(chǎn)生的正向調(diào)節(jié)、對(duì)革蘭陰性菌的防御反應(yīng)、平滑肌收縮的調(diào)節(jié)、血管收縮的調(diào)節(jié)、皮質(zhì)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架組織、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1（extracellular regulated protein kinases 1，ERK1）和ERK2級(jí)聯(lián)的調(diào)節(jié)、黏膜的先天免疫反應(yīng)等。KEGG分析為醛固酮調(diào)節(jié)的鈉重吸收、胰島素分泌、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號(hào)通路、環(huán)鳥苷酸-蛋白激酶G（cyclicguanosine-protein kinase G，cGMP-PKG）信號(hào)通路、 p53信號(hào)通路、催乳素信號(hào)通路、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、EB病毒感染、胃酸分泌等。

3 討論

IBS是一種在全世界廣泛分布的疾病，研究表明全球IBS患病率約為11.2%[5]，其中IBS-D是一種重要亞型。目前認(rèn)為，IBS發(fā)病與胃腸動(dòng)力異常、內(nèi)臟高敏感、腦腸軸調(diào)節(jié)異常、腸道菌群紊亂、腸道低度炎癥等有關(guān)，以對(duì)癥治療為主，如止瀉劑、益生菌等[1]。中醫(yī)認(rèn)為該病涉及多個(gè)臟腑，脾胃虛弱或肝失疏泄是其重要病機(jī)[4]，從五臟辨證進(jìn)行治療，常能取得不錯(cuò)療效[6]。

本文對(duì)脾虛濕盛和脾腎陽(yáng)虛兩證型進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘分析，發(fā)現(xiàn)脾虛濕盛型的前10味高頻藥物為白術(shù)、甘草、茯苓、黨參、薏苡仁、陳皮、山藥、白芍、砂仁、白扁豆，大多為益氣健脾祛濕之藥，且前4味藥白術(shù)、甘草、茯苓、黨參為四君子湯的基本組成。關(guān)聯(lián)規(guī)則結(jié)果亦顯示這四味藥關(guān)聯(lián)性強(qiáng)，考慮為中藥治療脾虛濕盛型IBS-D的核心配伍。四君子湯是補(bǔ)氣健脾的經(jīng)典方，白術(shù)健脾益氣、燥濕利水，黨參補(bǔ)脾益肺、養(yǎng)血生津，茯苓利水滲濕、健脾寧心安神，甘草甘平、炙用甘溫，有補(bǔ)脾益氣、緩急止痛、調(diào)和諸藥之效。網(wǎng)絡(luò)藥理結(jié)果顯示，白術(shù)中3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮，甘草中槲皮素，茯苓中常春藤皂苷元，黨參中木犀草素為中藥治療IBS-D的重要成分。蒼術(shù)酮是白術(shù)揮發(fā)油中一種重要成分，其性質(zhì)不穩(wěn)定，易于轉(zhuǎn)化，產(chǎn)物如白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等有抗炎、促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)等作用[7]。劉麗娜等[8]發(fā)現(xiàn)，槲皮素可減輕IBS模型大鼠結(jié)腸黏膜炎癥，增強(qiáng)腸屏障功能，改善內(nèi)臟敏感性。另有研究顯示，常春藤皂苷元、木犀草素有抗炎、抗菌、抗抑郁等作用[9-11]。

脾腎陽(yáng)虛型IBS-D的高頻藥物前10味為白術(shù)、補(bǔ)骨脂、肉豆蔻、茯苓、甘草、黨參、吳茱萸、白芍、五味子、山藥。補(bǔ)骨脂、吳茱萸、肉豆蔻、五味子為四神丸的基本組成，善溫脾暖腎、澀腸止瀉。白術(shù)、甘草、茯苓、黨參組成四君子湯，白芍柔肝止痛，山藥健脾祛濕。關(guān)聯(lián)規(guī)則分析表明，吳茱萸、肉豆蔻、補(bǔ)骨脂或?yàn)楹诵呐湮椋页＜狱h參、白術(shù)等健脾益氣之藥增強(qiáng)療效。由此可知，臨床上治療脾腎陽(yáng)虛型IBS-D時(shí)或以溫補(bǔ)脾腎為基礎(chǔ)，辨證加予健脾益氣、柔肝祛濕等藥，這與IBS-D病機(jī)相符。魏良兵等[12]發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)骨脂-肉豆蔻對(duì)IBS有治療作用，能調(diào)節(jié)結(jié)腸組織中促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子-環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白信號(hào)通路，降低內(nèi)臟高敏感性。本研究顯示，補(bǔ)骨脂中二十四烷酸、肉豆蔻中β-谷甾醇、吳茱萸中槲皮素或?yàn)橹委烮BS-D的核心成分。研究顯示，β-谷甾醇有抗炎抗菌等作用[13]。有關(guān)上述化合物對(duì)IBS-D影響的文獻(xiàn)研究尚不多見(jiàn)，尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)支持。

PPI網(wǎng)絡(luò)顯示，IL-6、TP53、TNF、VEGFA、IL-1B為中藥治療IBS-D關(guān)鍵靶點(diǎn)。IL-6、TNF、IL-1B是促炎細(xì)胞因子，與IBS-D發(fā)病機(jī)制有一定聯(lián)系。Seyedmirzaee等[14]對(duì)74名IBS患者和75名健康者進(jìn)行血清細(xì)胞因子比對(duì)，發(fā)現(xiàn)IBS患者血清中IL-6、TNF-α較健康者高。一項(xiàng)薈萃分析顯示，IBS患者IL-6水平高于對(duì)照組，且在IBS-D中更顯著[15]。另有研究發(fā)現(xiàn)，IL-1B能夠誘導(dǎo)腸道通透性增加，導(dǎo)致腸道炎癥的發(fā)生[16]。低度腸道炎癥是IBS發(fā)病機(jī)制之一，可能與腸道菌群紊亂，產(chǎn)生毒素刺激腸黏膜，導(dǎo)致炎癥因子生成有關(guān)。

tar-common的GO和KEGG富集分析顯示白術(shù)、茯苓、黨參、白術(shù)、補(bǔ)骨脂、吳茱萸、肉豆蔻7味中藥參與基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)脂多糖的反應(yīng)、一氧化氮生物合成過(guò)程的正調(diào)控等多項(xiàng)途徑，并通過(guò)多種疾病通路、信號(hào)通路發(fā)揮治療作用。研究表明，一氧化氮參與多種信號(hào)傳導(dǎo)，具有調(diào)節(jié)胃動(dòng)力的作用[17]，并與內(nèi)臟超敏反應(yīng)相關(guān)[18]。脂多糖會(huì)誘發(fā)腸道炎癥和內(nèi)臟高敏感性，富含可發(fā)酵寡糖、二糖、單糖和多元醇的食物可通過(guò)這一途徑加劇IBS-D的癥狀[19-20]。TLR信號(hào)通路與炎癥因子表達(dá)有關(guān)，通過(guò)影響腸道通透性，介導(dǎo)IBS-D炎癥反應(yīng)[21-23]。

tar-one的GO和KEGG分析顯示，四君子湯還可以通過(guò)GABA通路、激活或抑制G蛋白偶聯(lián)乙酰膽堿受體信號(hào)通路、離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、氯化物的運(yùn)輸轉(zhuǎn)運(yùn)、平滑肌收縮正向調(diào)節(jié)等途徑發(fā)揮治療作用，并與多種疾病通路、信號(hào)通路、代謝通路、突觸通路密切相關(guān)。GABA、乙酰膽堿受體（acetylcholine receptor，Ach）為重要的中樞神經(jīng)遞質(zhì)，能夠通過(guò)腦腸軸完成腸-腦信號(hào)雙向交流，調(diào)節(jié)IBS-D癥狀。GABA是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，腸神經(jīng)細(xì)胞通過(guò)鈉-鉀-氯化物轉(zhuǎn)運(yùn)體增高細(xì)胞內(nèi)氯化物濃度，從而激活腸神經(jīng)系統(tǒng)中GABA受體[24]。胃腸道的GABA受體可調(diào)節(jié)胃腸道的分泌與運(yùn)動(dòng)，影響內(nèi)臟高敏性感[25]；并能通過(guò)改變促炎因子的表達(dá)，起到抗炎作用[26]。Ach是一種重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，研究顯示IBS患者結(jié)腸黏膜中的肥大細(xì)胞數(shù)量有所增加，其可激活肌腸神經(jīng)元，通過(guò)釋放Ach，調(diào)控平滑肌收縮[27]。

tar-two的GO和KEGG分析顯示，補(bǔ)骨脂、肉豆蔻、吳茱萸治療IBS-D與疼痛的感官知覺(jué)、炎癥因子的表達(dá)、平滑肌收縮、血管收縮、免疫反應(yīng)等生物過(guò)程有關(guān)，還有醛固酮調(diào)節(jié)的鈉重吸收、胰島素分泌以及多種信號(hào)通路參與。醛固酮主要作用于腎臟，通過(guò)促進(jìn)腎臟對(duì)鈉的重吸收來(lái)維持水鈉平衡，Xiong等[28]研究表明補(bǔ)骨脂、肉豆蔻可通過(guò)調(diào)控鈉/氫交換因子3重組蛋白來(lái)維持水、電解質(zhì)穩(wěn)態(tài)，抑制腹瀉的發(fā)生。胰島素分泌與糖尿病密切相聯(lián)，中醫(yī)常從脾對(duì)其進(jìn)行論治[29]。有研究表明，IBS可能是糖尿病發(fā)病的一項(xiàng)高危因素[30]，且患有代謝性脂肪性肝病的糖尿病患者更易患IBS[31]。筆者推測(cè)，IBS-D尤其是脾腎陽(yáng)虛型IBS-D與胰島素分泌有一定聯(lián)系，但具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

綜上可知，脾虛濕盛型與脾腎陽(yáng)虛型雖皆為虛證，但前者陽(yáng)氣微耗，尚以氣虛為主，其型經(jīng)久不愈，耗損脾陽(yáng)，累及腎陽(yáng)，導(dǎo)致脾腎兩虛，漸以陽(yáng)虛為導(dǎo)向。數(shù)據(jù)挖掘分析顯示，中藥治療脾虛濕盛型IBS-D的關(guān)鍵為健脾益氣，核心方藥為四君子湯；治療脾腎陽(yáng)虛型IBS-D則在溫陽(yáng)的同時(shí)顧護(hù)脾氣，核心方藥為四君子湯合四神丸加減。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析表明，脾虛濕盛型和脾腎陽(yáng)虛型的兩組核心藥物在治療靶點(diǎn)、通路上多有相似，都具有“多成分、多靶點(diǎn)、多通路”的特點(diǎn)，且作用機(jī)制大都與炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)有關(guān)。四君子湯治療脾虛濕盛型IBS-D還與腦腸軸中相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放有關(guān)，補(bǔ)骨脂、肉豆蔻、吳茱萸三藥治療脾腎陽(yáng)虛型IBS-D還涉及到胰島素分泌、醛固酮調(diào)節(jié)的鈉重吸收等信號(hào)通路。