種雞場沙門氏菌監(jiān)控方法*

趙瑋，郭龍宗，李燕，張孝蘭，王雪梅，石海春，侯珍珍，徐東紅

（山東益生畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院，山東 煙臺 264680）

沙門氏菌在自然界中分布十分廣泛，能夠引起家畜、家禽以及其它動物發(fā)生急性、慢性或隱性感染。在公共衛(wèi)生學(xué)中，沙門氏菌也占有重要地位，能夠感染人并導(dǎo)致嘔吐、腹瀉等中毒癥狀，重癥者甚至死亡。因此，沙門氏菌可嚴重威脅人類健康，給養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展埋下重大隱患。近幾年來沙門氏菌感染越來越嚴重，存在于養(yǎng)殖、產(chǎn)品銷售等各個環(huán)節(jié)，造成很大經(jīng)濟損失，因此及早發(fā)現(xiàn)沙門氏菌并采取防治措施，有利于提高畜禽養(yǎng)殖的經(jīng)濟效益。

在養(yǎng)殖場中控制沙門氏菌感染，首先要保證它的上一代種雞處于沙門氏菌陰性狀態(tài)，因此維持種雞場沙門氏菌陰性狀態(tài)至關(guān)重要，這就需要我們對種雞場進行程序化的監(jiān)控，及時掌握種雞群的健康狀態(tài)。雞群感染沙門氏菌的途徑有兩個，一個是經(jīng)種蛋傳播，即垂直傳播；另一個是經(jīng)呼吸道或者消化道進入雞體內(nèi)，即水平傳播。在種雞場，較為常見的致病性沙門氏菌群主要是B、C、D群沙門氏菌，例如：D群的雞白痢沙門氏菌，垂直傳播能力較強，也能夠水平傳播，垂直傳播能力大于水平傳播；D群的腸炎沙門氏菌，具備較強的水平與垂直傳播能力，水平傳播能力大于垂直傳播；B群的鼠傷寒沙門氏，既能夠垂直傳播也能夠水平傳播；C群的肯塔基沙門氏菌，在種雞場環(huán)境、種雞泄殖腔拭子中較為常見，垂直傳播能力相對較弱。在種雞場監(jiān)測時，我們主要關(guān)注對雞群影響較大的雞白痢沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌及肯塔基沙門氏菌，通過合理的監(jiān)測和防控來維持種雞場沙門氏菌的陰性狀態(tài)。

1 種雞場沙門氏菌監(jiān)測的主要方法

1.1 血清學(xué)檢測

沙門氏菌抗體檢測可以使用平板凝集或者ELISA方法進行。不同品種的雞血清可能對沙門氏菌抗原有一定干擾，造成假陽性。我們把血清稀釋后平板凝集與ELISA檢測結(jié)果相對比，發(fā)現(xiàn)血清8倍稀釋后與ELISA檢測結(jié)果吻合度較高，也可排除一部分假陽性的干擾，因此可以采用血清8倍稀釋后進行平板凝集的方法對雞群沙門氏菌進行評估，檢測頻率一般為3周一次。對檢測為陽性的雞再進行病原分離、培養(yǎng)、鑒定，最后確定血清型。

1.2 與垂直性傳播相關(guān)樣品檢測

主要通過檢測種雞泄殖腔、公雞精液和種雞產(chǎn)品來評估種雞的健康狀況。以上樣品采用常規(guī)生化鑒定方法或PCR方法進行病原檢測，一般以常規(guī)生化鑒定法為主，將常規(guī)生化鑒定法的結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)。對于污染性樣本如泄殖腔、胎糞、死胚等，可再用PCR方法檢測存在假陽性和假陰性結(jié)果。若有陽性將追溯種雞。

1.2.1 種雞泄殖腔檢測 一般用棉拭子采集泄殖腔，對泄殖腔拭子進行常規(guī)生化鑒定方法檢測病原。該方法與雞只是否排毒、樣品采集是否合格息息相關(guān)，雞只不排毒的時候一般檢測不到，樣品采集不合格的時候也會呈現(xiàn)一個陰性結(jié)果，所以通過泄殖腔拭子檢測容易出現(xiàn)假陰性結(jié)果。為有效評估雞群感染狀況，必須要保證泄殖腔樣品合格并要經(jīng)過多次采樣檢測。

1.2.2 種公雞精液檢測 產(chǎn)蛋雞群中，精液檢測較為重要。如果精液檢測為陽性，則產(chǎn)蛋期母雞在人工受精或自然交配時很容易感染，因此雞群開產(chǎn)前對精液進行沙門氏菌檢測是有必要的。

1.2.3 種蛋檢測 主要是檢測蛋黃，蛋表面也可以檢測，但是首先要排除是否為環(huán)境污染造成。

1.2.4 種雞后代1日齡雛雞和孵化18 d落盤死胚（也稱為毛蛋）檢測 主要是檢測卵黃囊，能夠有效評估種雞的沙門氏菌感染狀況。

1.2.5 種雞后代1日齡雛雞胎糞檢測，同時也可以檢測雛雞運輸盒的墊紙 檢測胎糞、墊紙時要排除外界環(huán)境污染的可能性。

上述與垂直性傳播相關(guān)樣品檢測中，從檢出率高低來看：毛蛋檢出率較高，依次是泄殖腔拭子、胎糞，雛雞卵黃囊、種蛋、精液中檢出沙門氏菌的比例最低。毛蛋、胎糞、泄殖腔拭子能夠較早的檢測到沙門氏菌，因此能夠及時對種雞發(fā)出預(yù)警。一般雞群陽性比例較高時，才能在雛雞卵黃囊中檢測到沙門氏菌。從我們分離到的沙門氏菌菌株血清分型結(jié)果來看：毛蛋、雛雞、種蛋中使用常規(guī)生化鑒定方法能夠檢測到雞白痢、腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌，主要是以腸炎沙門氏菌為主。胎糞、泄殖腔拭子中沙門氏菌的類別較多，B、C、D群都有，以B、D群中的腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌為主，C群沙門氏菌少一些，主要以肯塔基沙門氏菌為主；白痢在污染物如泄殖腔拭子、胎糞中很難檢測到，特別是白痢在泄殖腔拭子、胎糞中不是優(yōu)勢菌群時，容易被其它細菌掩蓋，不易分離到，這與白痢的生長特性有關(guān)。在對垂直性傳播樣品中檢測沙門氏菌的方法能夠有效識別出正在排毒的雞只。

1.3 日常病死雞的病料檢測

雞場每天都會對死亡雞只進行剖檢，在剖檢過程中將有疑似沙門氏菌病變（如肝臟有白色壞死點、卵巢液化或卵巢炎等）的病死雞，無菌取肝、卵巢等組織進行沙門氏菌分離鑒定。該方法能夠有效確定感染的陽性雞舍，特別是籠養(yǎng)雞舍，能夠識別出感染沙門氏菌的陽性區(qū)域。

1.4 種雞場環(huán)境檢測

1.4.1 雞舍內(nèi)環(huán)境檢測 主要包括墊料（主要針對平養(yǎng)雞群）、籠具、料槽、水線、風(fēng)機、糞道/帶等檢測。墊料取樣時要對雞舍進行多點位采集，籠具、料槽、水線取樣點要分布到雞舍的前、中、后端，風(fēng)機、糞帶/道采集面積要盡可能大，雞舍環(huán)境一般用約（30×30）cm大小的無菌略濕潤的紗布進行采樣，以保證大面積采樣。種雞場可1月檢測1次。

1.4.2 雞場內(nèi)蒼蠅、甲殼蟲、老鼠等有害生物檢測 有害生物作為傳播媒介，有攜帶和傳播沙門氏菌的可能，可以每半年抽檢1次，蒼蠅、甲殼蟲每次采集20只以上，老鼠視情況送檢，也可以清場后送檢老鼠3～5只。

1.4.3 雞場中水的檢測 可每半年對雞場的水源抽檢沙門氏菌一次。

總之，從目前來看，環(huán)境中沙門氏菌的種類較多，分離到的沙門氏菌以C、D群為主，C群的比例稍高，D群比例稍低于C群，同時還分離到B、E、F群沙門氏菌以及未知型沙門氏菌；其中D、C、B群沙門氏菌在目前檢測結(jié)果來看與雞群健康密切相關(guān)。從整體來看，環(huán)境中沙門氏菌檢測結(jié)果與泄殖腔拭子及毛蛋中沙門氏菌檢測結(jié)果存在一定的相關(guān)性，但是由于環(huán)境中沙門氏菌類別較為復(fù)雜，當(dāng)雞群中感染沙門氏菌比例較低時，沙門氏菌不是優(yōu)勢菌群，加之采樣抽檢的局限性，可能檢測不到沙門氏菌，造成環(huán)境與毛蛋或泄殖腔拭子沙門氏菌檢測結(jié)果不一定同步，存在差異。因此，環(huán)境采樣點要盡可能廣泛。我們通過大量的環(huán)境檢測工作發(fā)現(xiàn)風(fēng)機、墊料檢出沙門氏菌的比例較高，其次是籠具、糞帶/道。種雞場日常環(huán)境監(jiān)測中，我們可以通過檢測風(fēng)機、墊料、籠具、糞帶/道這些高風(fēng)險點來評估雞群健康狀態(tài)。

1.5 孵化環(huán)境檢測

孵化環(huán)境經(jīng)常存在沙門氏菌污染的現(xiàn)象，特別是孵化陽性雞群的種蛋時很容易對孵化環(huán)境造成污染，并污染其它陰性雞群的種蛋，造成后代雛雞感染沙門氏菌。我們可以每半月進行1次孵化器、出雛器、孵化廳、出雛廳的環(huán)境監(jiān)測，來評估孵化環(huán)境；陽性雞場出、入孵化場的物資也是重點抽檢對象，特別是要對陽性雞場轉(zhuǎn)入孵化場的種蛋蛋筐、蛋盤進行抽檢，采樣頻率最好是每月1～2次,使用面積大小為（30×30）cm略濕潤的無菌紗布采樣。采集蛋盤時注意應(yīng)采集到蛋盤的內(nèi)側(cè)與種蛋接觸的地方。

1.6 種雞場周轉(zhuǎn)物資環(huán)節(jié)檢測

1.6.1 飼料檢測 對不同批次的飼料進行抽檢，使用常規(guī)生化鑒定方法進行沙門氏菌分離鑒定。

1.6.2 車輛檢測 來往雞場的運輸次品蛋車、飼料車檢測，可以每月2次，車內(nèi)車外都采用（30×30）cm略濕潤無菌紗布涂抹采樣，使用常規(guī)生化鑒定方法進行沙門氏菌分離鑒定。

1.6.3 轉(zhuǎn)雞籠 消毒后、使用前，對轉(zhuǎn)雞籠進行抽檢，使用（30×30）cm無菌紗布采樣，采集點要覆蓋雞籠內(nèi)、外，使用常規(guī)生化鑒定方法進行沙門氏菌分離鑒定。

1.6.4 蛋盤檢測 蛋盤在進雞場消毒前后進行抽檢，同樣使用上述紗布采樣檢測病原。

總之，以上6個方面的沙門氏菌檢測是相互補充的，血清學(xué)檢測、與垂直性傳播相關(guān)樣品檢測、日常病死雞的病料檢測這是針對種雞進行的診斷性檢測，其它環(huán)境檢測是對群體的一個監(jiān)控，也是對現(xiàn)場管理的一個警示性檢測，防止外源性沙門氏菌進入種雞場造成污染，達到一個切斷傳播途徑的目的。當(dāng)我們懷疑種雞場有沙門氏菌感染的時候，可以血清學(xué)檢測和病原學(xué)檢測同時進行。

2 種雞場沙門氏菌防控措施

目的主要是保護易感雞群、切斷傳播途徑。

2.1 對于種雞群可以使用腸炎沙門氏菌疫苗免疫保護種雞群，對陽性雞只及時淘汰處理，日常使用保護腸道的抑菌產(chǎn)品，減少沙門氏菌在腸道定植的幾率。

2.2 雞場做好生物安全工作，防止外界沙門氏菌進入種雞場，雞舍內(nèi)、外的環(huán)境做好消毒工作。

2.3 種雞場分凈區(qū)、污區(qū)，規(guī)定凈區(qū)與污區(qū)人員、物資的路線走向，并禁止飼養(yǎng)員之間亂串雞舍。

2.4 雞場水源保持干凈，可在雞舍飲水中添加二氧化氯進行消毒。

2.5 飼料盡可能使用密封的罐裝車運輸，直接打入場區(qū)料塔，避免中間接觸環(huán)節(jié)的污染，也避免漏撒而吸引鳥類、老鼠造成污染。

2.6 進入雞場的墊料做好消毒，避免帶入沙門氏菌。

2.7 雞場做好有害生物控制，如滅鼠工作，并對雞舍內(nèi)的甲殼蟲、蒼蠅、蚊子做好消殺工作，雞場地面硬化，減少綠植，以減少鼠類、鳥類的活動。

2.8 加強孵化環(huán)境衛(wèi)生的消毒控制，做好上孵前種蛋衛(wèi)生消毒工作，對蛋盤、蛋筐等物資做好消毒工作，避免污染后再流轉(zhuǎn)入其它種雞場。

3 小結(jié)

種雞場沙門氏菌防控涵蓋了種雞飼養(yǎng)管理和孵化管理的各個環(huán)節(jié)，做好生物安全是重中之重，結(jié)合實驗室檢測對種雞場的沙門氏菌進行監(jiān)控，能夠及時有效的對種雞群健康進行評估，及早地發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，才能維持種雞群沙門氏菌的陰性狀態(tài)。