多藥耐藥相關(guān)蛋白2對(duì)漢黃芩素及其主要II相代謝產(chǎn)物藥動(dòng)學(xué)特征的影響

鄭 蓉，張淇淞，胡雪黎，徐 睿，彭國(guó)爽，昌冰琳，胡澤華，胥鑫林，楊 寶, 4*

多藥耐藥相關(guān)蛋白2對(duì)漢黃芩素及其主要II相代謝產(chǎn)物藥動(dòng)學(xué)特征的影響

鄭 蓉1, 2，張淇淞2, 3, 4，胡雪黎1, 2，徐 睿1, 2，彭國(guó)爽1, 2，昌冰琳1, 2，胡澤華1, 2，胥鑫林1, 2，楊 寶1, 2, 4*

1. 湖北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)部，湖北 恩施 445000 2. 湖北民族大學(xué)，風(fēng)濕性疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 恩施 445000 3. 廣西大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣西 南寧 530004 4. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006

研究多藥耐藥相關(guān)蛋白2（multidrug resistance protein 2，MRP2）對(duì)漢黃芩素及其主要II相代謝產(chǎn)物藥動(dòng)學(xué)特征的影響。FVB野生型和?/?小鼠ig漢黃芩素β-環(huán)糊精包合物后，于不同時(shí)間點(diǎn)眼眶取血。采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)漢黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素-7--硫酸酯的血藥濃度，采用DAS 2.0軟件以非房室模型計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。3個(gè)成分的線性關(guān)系良好，準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性、回收率等符合要求。漢黃芩素主要以II相代謝產(chǎn)物漢黃芩苷和漢黃芩素-7--硫酸酯存在，均在30 min內(nèi)達(dá)到最大血藥濃度。漢黃芩苷的達(dá)峰濃度（max）和藥時(shí)曲線下面積（AUC0～t）最高，漢黃芩素-7--硫酸酯次之，漢黃芩素最低。與FVB野生型組比較，?/?組漢黃芩苷和漢黃芩素-7--硫酸酯的max和AUC0～t顯著增加（＜0.05、0.01）。MRP2介導(dǎo)了漢黃芩苷和漢黃芩素-7--硫酸酯的外排過(guò)程，顯著影響漢黃芩素的體內(nèi)處置過(guò)程。

漢黃芩素；漢黃芩苷；漢黃芩素-7--硫酸酯；藥動(dòng)學(xué)；多藥耐藥相關(guān)蛋白2；II相代謝產(chǎn)物

漢黃芩素因具有多種藥理活性而受到廣泛關(guān)注[1-3]。藥動(dòng)學(xué)研究是中藥活性成分臨床前研究的重要部分，對(duì)于評(píng)估成藥性、揭示作用途徑發(fā)揮著重要作用。漢黃芩素的口服生物利用度僅為1.1%[4]，血藥濃度遠(yuǎn)低于其體外活性的有效濃度。黃酮類化合物的口服生物利用度較低可能是由于其容易被肝、腸中的代謝酶代謝，發(fā)生葡萄糖醛酸化和磺酸化等II相代謝反應(yīng)[5]。部分黃酮類化合物的II相代謝產(chǎn)物是肝臟和小腸外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（如多藥耐藥相關(guān)蛋白和乳腺癌耐藥蛋白）的底物，能夠被外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白外排入膽汁或者腸腔，進(jìn)而影響其體內(nèi)過(guò)程[5-6]。因此，研究外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對(duì)黃酮類化合物的藥動(dòng)學(xué)行為的影響具有重要意義。

研究發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素在體內(nèi)主要發(fā)生葡萄糖醛酸化和磺酸化代謝，生成漢黃芩苷和漢黃芩素-7--硫酸酯，以漢黃芩苷的含量最高[4,7-8]。但是目前未見多藥耐藥相關(guān)蛋白2（multidrug resistance protein 2，MRP2）對(duì)漢黃芩素及其主要II相代謝產(chǎn)物的藥動(dòng)學(xué)行為影響的報(bào)道，尚不能全面地闡述其體內(nèi)處置過(guò)程。另外，由于缺乏漢黃芩素-7--硫酸酯商業(yè)對(duì)照品，相關(guān)漢黃芩素的藥動(dòng)學(xué)研究也未準(zhǔn)確定量其血藥濃度。?/?小鼠是以野生型FVB小鼠為基因背景鼠，敲除基因建立的基因敲除小鼠模型，目前廣泛應(yīng)用于藥物的攝取和消除機(jī)制研究。基于此，本研究擬采用酶催化法合成漢黃芩素-7--硫酸酯對(duì)照品，建立測(cè)定血漿中漢黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素-7--硫酸酯的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（UPLC-MS/MS）方法，并以FVB野生型和?/?小鼠為受試對(duì)象，研究MRP2對(duì)漢黃芩素及其主要II相代謝產(chǎn)物藥動(dòng)學(xué)行為的影響。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性?/?小鼠，體質(zhì)量20～30 g，購(gòu)自上海南方模式生物科技發(fā)展有限公司，合格證號(hào)312024300004357。SPF級(jí)雄性FVB野生型小鼠，體質(zhì)量24～30 g，購(gòu)自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)SCXK（京）2019-0010。動(dòng)物在恒溫、自然光暗周期條件下飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)湖北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)202148）。

1.2 藥品與試劑

對(duì)照品漢黃芩素（批號(hào)RP200729，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.0%）、漢黃芩苷（批號(hào)RP210215，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.0%）購(gòu)自成都麥德生科技有限公司；甘草苷對(duì)照品（批號(hào)wkq21021901，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.0%）購(gòu)自四川省維克奇生物科技有限公司；漢黃芩素-7--硫酸酯根據(jù)本課題組前期報(bào)道方法[6,9]采用酶催化法合成，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98.0%；色譜乙腈、二甲基亞砜、β-環(huán)糊精購(gòu)自默克公司；色譜級(jí)甲酸購(gòu)自麥克林生化科技有限公司。

1.3 儀器

Xevo G2-XS Q/TOF質(zhì)譜儀、UNIFI軟件（美國(guó)Waters公司）；Concentrator plus真空離心濃縮儀（德國(guó)Eppendoff公司）；TGL-20M型高速冷凍離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；ME204型電子分析天平（梅特勒-托利多公司）；Milli-Q超純水系統(tǒng)（美國(guó)密理博公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Waters HSS T3色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動(dòng)相為0.05%甲酸乙腈（A）-0.05%甲酸水溶液（B），梯度洗脫：0～3.5 min，20%～58% A；3.5～5.0 min，58%～90% A；5.0～6.0 min，90%～100% A；6.0～6.5 min，100%～20% A；6.5～9.5 min，20% A。體積流量0.4 mL/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣體積7 μL。

2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧電離源負(fù)離子模式；毛細(xì)管電壓?3.0 kV；離子源溫度130 ℃；脫溶劑氣體積流量900 L/h，溫度500 ℃；掃描范圍/200～600。采用一級(jí)質(zhì)譜定量，漢黃芩素（R＝4.04 min，/284.068 5）、漢黃芩素-7--硫酸酯（R＝3.12 min，/364.025 3）、漢黃芩苷（R＝2.53 min，/460.100 6）、甘草苷（內(nèi)標(biāo)，R＝1.77 min，/417.118 6）。

2.3 溶液的配制

精密稱取漢黃芩苷、漢黃芩素-7--硫酸酯、漢黃芩素對(duì)照品適量，加甲醇溶解，配制成濃度分別為100.0、38.0、100.0 μmol/L的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密移取各對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，配制成漢黃芩苷、漢黃芩素-7--硫酸酯、漢黃芩素濃度為8.0、1.0、1.0 μmol/L的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，臨用前稀釋為系列濃度的混合對(duì)照品工作液。

精密稱取甘草苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解，配制成濃度為80 nmol/L的內(nèi)標(biāo)工作液。

2.4 血漿樣品的處理

精密吸取10 μL血漿，加入10 μL內(nèi)標(biāo)溶液和80 μL甲醇后渦旋2 min，13 000 r/min離心15 min，吸取上清并真空干燥。用30 μL甲醇復(fù)溶，13 000 r/min離心15 min，吸取上清液待測(cè)。

2.5 漢黃芩素β-環(huán)糊精包合物混懸液的制備

參照本課題組前期報(bào)道的方法[6]制備漢黃芩素β-環(huán)糊精包合物混懸液，稱取7.5 g β-環(huán)糊精，加入30 mL 0.9%氯化鈉溶液，攪拌至溶解。分別精密稱取10、5 mg漢黃芩素，用1.0 mL DMSO-EtOH混合溶劑按1∶1比例溶解，緩慢滴入9.0 mL 25% β-環(huán)糊精溶液，40 ℃恒溫?cái)嚢瑁?50 r/min）2 h，即得質(zhì)量濃度分別為1.0、0.5 mg/mL的漢黃芩素β-環(huán)糊精包合物混懸液。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 專屬性試驗(yàn) 空白血漿、空白血漿＋混合對(duì)照品＋內(nèi)標(biāo)、ig給藥后血漿樣品按“2.4”項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果見圖1。3個(gè)待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)的分離度和響應(yīng)較好，無(wú)明顯干擾。

2.6.2 線性關(guān)系與定量下限 在空白血漿中加入不同濃度的混合對(duì)照品工作液，配制成漢黃芩素和漢黃芩素-7--硫酸酯濃度為1.9、3.9、7.8、15.6、31.3、62.5、125.0、250.0、500.0 nmol/L，漢黃芩苷濃度為3.9、7.8、15.6、31.3、62.5、125.0、250.0、500.0、1 000.0、2 000.0、4 000.0 nmol/L的含藥血漿樣品，按“2.4”項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣檢測(cè)。以待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值（）對(duì)濃度（）進(jìn)行線性回歸，權(quán)重為1/2。根據(jù)信噪比/＝10計(jì)算定量下限。漢黃芩苷的回歸方程為＝0.032＋0.019，2＝0.995 5，線性范圍為1.5～4 000.0 nmol/L，定量下限為1.5 nmol/L；漢黃芩素-7--硫酸酯的回歸方程為＝0.075＋0.001，2＝0.996 5，線性范圍為1.4～500.0 nmol/L，定量下限為1.4 nmol/L；漢黃芩素的回歸方程為＝0.026－0.004，2＝0.996 0，線性范圍為1.5～500.0 nmol/L，定量下限為1.5 nmol/L。各成分在相應(yīng)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，靈敏度較高。

2.6.3 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn) 在空白血漿中加入不同濃度的混合對(duì)照品工作液，配制成漢黃芩苷濃度為3.9、500.0、4 000.0 nmol/L，漢黃芩素和漢黃芩素-7--硫酸酯濃度為3.9、31.3、500.0 nmol/L的含藥血漿樣品，按“2.4”項(xiàng)下方法處理，配制成低、中、高濃度的質(zhì)控樣品，連續(xù)測(cè)定3 d，計(jì)算準(zhǔn)確度和精密度。結(jié)果見表1，日內(nèi)和日間精密度的RSD均小于12.3%，準(zhǔn)確度的RE為?10.9%～11.1%。

2.6.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 低、中、高濃度的質(zhì)控樣品按25 ℃放置24 h、?20 ℃反復(fù)凍融3次、?80 ℃儲(chǔ)存30 d考察穩(wěn)定性，結(jié)果見表2，3個(gè)成分的RSD均小于13.0%，RE為?11.3%～8.7%。

圖1 空白血漿 (A)、空白血漿＋對(duì)照品＋內(nèi)標(biāo)(B)、給藥后血漿樣品(C) 中3個(gè)待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)的提取離子流圖

表1 3個(gè)待測(cè)成分的精密度、準(zhǔn)確度、基質(zhì)效應(yīng)和回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n= 6)

Table 1 Precision, accuracy, matrix effect and recovery tests of three compounds (n= 6)

成分濃度/(nmol·L?1)精密度RSD/%準(zhǔn)確度RE/%回收率/%基質(zhì)效應(yīng)/% 日內(nèi)日間日內(nèi)日間 漢黃芩苷4 000.04.33.9?4.1?3.592.8±5.593.8±6.7 500.07.36.8?2.8?4.191.0±6.991.6±4.9 3.96.18.5?1.9?6.689.6±10.391.1±8.0 漢黃芩素-7-O-硫酸酯500.04.24.9?1.6?3.4104.6±8.796.5±10.6 31.38.19.3?2.27.299.5±8.694.7±10.7 3.912.211.511.17.194.4±7.188.1±5.0 漢黃芩素500.04.14.2?3.5?3.998.0±4.998.5±3.1 31.33.03.6?2.6?3.4102.1±6.489.4±6.8 3.97.912.3?5.4?10.999.7±4.490.9±4.3

表2 3個(gè)待測(cè)成分的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(n= 6)

Table 2 Stability test results of three compounds (n= 6)

成分濃度/(nmol·L?1)25 ℃放置4 h?80 ℃儲(chǔ)存30 d凍融3次循環(huán) 精密度RSD/%準(zhǔn)確度RE/%精密度RSD/%準(zhǔn)確度RE/%精密度RSD/%準(zhǔn)確度RE/% 漢黃芩苷4 000.02.61.63.94.97.5?2.7 500.02.9?5.23.4?0.17.0?5.3 3.97.4?8.38.91.113.0?11.3 漢黃芩素-7-O- 硫酸酯500.01.8?3.85.5?2.27.00.3 31.39.13.87.4?7.88.86.9 3.99.1?6.49.9?2.47.73.3 漢黃芩素500.04.20.72.8?3.53.9?6.6 31.32.4?3.04.5?3.29.0?2.9 3.98.28.77.0?7.46.17.8

2.6.5 基質(zhì)效應(yīng)和提取回收率試驗(yàn) 在空白血漿中加入不同濃度的混合對(duì)照品工作液，按“2.4”項(xiàng)下方法處理后配制成低、中、高濃度的質(zhì)控樣品（A）；另取空白血漿（B）和超純水（C）各6份，按“2.4”項(xiàng)下方法處理后取上清液，加入不同濃度的混合對(duì)照品工作液和內(nèi)標(biāo)，配制成相當(dāng)于質(zhì)控樣本濃度的低、中、高濃度的含藥樣品。進(jìn)樣分析，記錄樣品與內(nèi)標(biāo)的峰面積。以A與B的比值計(jì)算提取回收率，以B與C的比值計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果見表1，3個(gè)待測(cè)成分的提取回收率為89.6%～104.6%，基質(zhì)效應(yīng)為88.1%～98.5%。

2.7 藥動(dòng)學(xué)研究

將10只?/?小鼠和10只FVB野生型小鼠隨機(jī)分為高、低劑量（10、5 mg/kg）組，每組5只，ig漢黃芩素β-環(huán)糊精包合物混懸液（10 mL/kg），給藥前禁食12 h，自由飲水。于給藥前及給藥后3、7、15、30、60、90、120、180、300、480、720 min眼眶取血約50 μL，4 ℃、4500 r/min離心10 min，取全部血漿保存。測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度，采用DAS 2.0軟件以非房室模型處理血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，并計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，結(jié)果見表3和圖2。FVB野生型和?/?小鼠的大多數(shù)時(shí)間點(diǎn)血漿樣品中均能檢測(cè)到3個(gè)待測(cè)成分。漢黃芩素在FVB野生型和?/?小鼠的胃腸道內(nèi)吸收迅速，30 min內(nèi)血藥濃度達(dá)到峰值，但達(dá)峰血藥濃度（max）較低，小于55.0 nmol/L，且消除速度較快。漢黃芩苷的max和藥時(shí)曲線下面積（AUC0～t）最高，漢黃芩素-7--硫酸酯次之，漢黃芩素最低。另外，3個(gè)待測(cè)成分的max和AUC0～t呈劑量相關(guān)性增長(zhǎng)。部分待測(cè)成分的藥時(shí)曲線呈現(xiàn)了明顯的雙峰現(xiàn)象，可能是與肝腸循環(huán)有關(guān)。

3 討論

血漿樣品前處理是藥動(dòng)學(xué)研究中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，本研究選擇了有機(jī)溶劑沉淀蛋白法，考察了甲醇和乙腈作為溶劑時(shí)對(duì)待測(cè)成分的選擇性和回收率的影響，結(jié)果表明均滿足生物樣本分析要求。內(nèi)標(biāo)選擇了二氫黃酮類成分甘草苷，其性質(zhì)穩(wěn)定，與漢黃芩素的理化性質(zhì)相似，且對(duì)待測(cè)成分無(wú)干擾。

本研究首先采用超高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)分析了小鼠ig漢黃芩素后血漿中的代謝產(chǎn)物，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道[4,7-8]，發(fā)現(xiàn)主要是以II相代謝產(chǎn)物形式存在，含量最高的是漢黃芩苷，其次是漢黃芩素-7--硫酸酯，其他代謝物的含量非常低。與許多黃酮類成分一樣，漢黃芩素的生物利用度較低，主要是與其在體內(nèi)廣泛存在的II相代謝反應(yīng)有關(guān)[7]。由于缺乏漢黃芩素-7--硫酸酯商用對(duì)照品，目前對(duì)于漢黃芩素II相代謝產(chǎn)物的體內(nèi)過(guò)程研究主要集中在漢黃芩苷，未見漢黃芩素-7--硫酸酯的研究報(bào)道。

表3 3個(gè)待測(cè)成分的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(, n = 5)

與相應(yīng)劑量的FVB野生型小鼠比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01corresponding dose of FVB wild-type mice

圖2 FVB野生型小鼠(A) 和MRP2?/?小鼠(B) 血漿中3個(gè)待測(cè)成分的血藥濃度-時(shí)間曲線圖(, n = 5)

文獻(xiàn)報(bào)道了多藥耐藥蛋白參與了黃酮類成分的體內(nèi)過(guò)程，對(duì)其生物利用度有不同程度的影響，且部分黃酮類成分的葡萄糖醛酸化和磺酸化產(chǎn)物是外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的底物[5-6]。因此，多藥耐藥蛋白在黃酮類成分的體內(nèi)過(guò)程中的作用受到了廣泛的關(guān)注。金合歡素、槲皮素、毛蕊異黃酮等黃酮類成分的葡萄醛酸化和磺酸化代謝產(chǎn)物的外排過(guò)程受到多藥耐藥相關(guān)蛋白和乳腺癌耐藥蛋白的調(diào)控[5-6,10-12]，其中以多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP1和MRP2為主。MRP2表達(dá)于腸道和肝臟細(xì)胞的頂膜側(cè)，理論上會(huì)將漢黃芩苷和漢黃芩素-7--硫酸酯排入膽汁和腸腔，降低血藥濃度。

本研究結(jié)果顯示，ig低劑量（5 mg/kg）的漢黃芩素β-環(huán)糊精包合物混懸液后，漢黃芩苷在FVB野生型小鼠中的max和AUC0～t分別是漢黃芩素的18.1、15.4倍，是漢黃芩素-7--硫酸酯的21.5、22.0倍；漢黃芩苷在?/?小鼠中的max和AUC0～t是漢黃芩素的40.3、41.6倍，是漢黃芩素-7--硫酸酯的20.4、18.4倍。ig高劑量（10 mg/kg）的漢黃芩素β-環(huán)糊精包合物混懸液后，漢黃芩苷在FVB野生型小鼠中的max和AUC0～t分別是漢黃芩素的35.0、24.5倍，是漢黃芩素-7--硫酸酯的35.9、31.3倍；漢黃芩苷在?/?小鼠中的max和AUC0～t是漢黃芩素的54.3、100.7倍，是漢黃芩素-7--硫酸酯的15.3、18.6倍。提示漢黃芩素的生物利用度較低，在體內(nèi)主要發(fā)生C-7位葡萄醛酸化反應(yīng)，其次是C-7位磺酸化反應(yīng)。

與FVB野生型小鼠比較，2個(gè)給藥劑量下?/?組的漢黃芩苷和漢黃芩素-7--硫酸酯的max和AUC0～t均顯著升高，與理論趨勢(shì)相符[10]。其中低劑量下漢黃芩苷max和AUC0～t分別升高了1.7、0.8倍，高劑量下升高了0.4、0.5倍；低劑量下漢黃芩素-7--硫酸酯的max和AUC0～t分別升高了1.8、1.2倍，高劑量下升高了2.4、1.5倍。

與FVB野生型小鼠比較，?/?組漢黃芩素的max變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，AUC0～t有所降低。提示MRP2對(duì)漢黃芩素的體內(nèi)過(guò)程有著重要影響，可能參與調(diào)控其II相代謝產(chǎn)物漢黃芩苷和漢黃芩素-7--硫酸酯的外排過(guò)程，其中對(duì)磺酸化代謝的影響更加明顯。

本研究采用?/?小鼠研究了MRP2對(duì)漢黃芩素及其主要II相代謝產(chǎn)物漢黃芩苷和漢黃芩素-7--硫酸酯藥動(dòng)學(xué)行為的影響。結(jié)果顯示漢黃芩素ig給藥后主要以漢黃芩苷和漢黃芩素-7--硫酸酯存在，MRP2介導(dǎo)了漢黃芩苷和漢黃芩素-7--硫酸酯的外排過(guò)程，顯著影響漢黃芩素的體內(nèi)處置過(guò)程。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 韋磊, 王絢, 陳雄, 等. 漢黃芩素緩解高脂飲食喂養(yǎng)?/?小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化和NF-κB介導(dǎo)的動(dòng)脈炎癥反應(yīng) [J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2021, 33(5): 750-757.

[2] Hong M, Almutairi M M, Li S Y,. Wogonin inhibits cell cycle progression by activating the glycogen synthase kinase-3 beta in hepatocellular carcinoma [J]., 2020, 68: 153174.

[3] Bei W, Jing L, Chen N. Cardio protective role of wogonin loaded nanoparticle against isoproterenol induced myocardial infarction by moderating oxidative stress and inflammation [J]., 2020, 185: 110635.

[4] Talbi A, Zhao D, Liu Q W,. Pharmacokinetics, tissue distribution, excretion and plasma protein binding studies of wogonin in rats [J]., 2014, 19(5): 5538-5549.

[5] Zheng L, Zhu L J, Zhao M,.exposure of kaempferol is driven by phase II metabolic enzymes and efflux transporters [J]., 2016, 18(5): 1289-1299.

[6] Zhang Q S, Zhu L J, Gong X,. Sulfonation disposition of acacetin:and[J]., 2017, 65(24): 4921-4931.

[7] 謝利霞, 周娟, 柳茜, 等. 漢黃芩素在FVB小鼠體內(nèi)的磺酸化代謝特征研究 [J]. 世界臨床藥物, 2012, 33(7): 406-411.

[8] Liu W Y, Feng F. Metabolite identification and the development of a simultaneous quantification method for wogonin and wogonin-7--glucuronide: Application to a distribution study in mice liver [J]., 2011, 20(3): 282-289.

[9] Li Q, Wang L P, Dai P M,. A combined strategy of mass fragmentation, post-column cobalt complexation and shift in ultraviolet absorption spectra to determine the uridine 5′-diphospho-glucuronosyltransferase metabolism profiling of flavones after oral administration of a flavone mixture in rats [J]., 2015, 1395: 116-128.

[10] Yu J, Zhu L, Zheng H,. Sulfotransferases and breast cancer resistance protein determine the disposition of calycosinand[J]., 2017, 14(9): 2917-2929.

[11] Jiang H Y, Yu J, Zheng H H,. Breast cancer resistance protein and multidrug resistance protein 2 regulate the disposition of acacetin glucuronides [J]., 2017, 34(7): 1402-1415.

[12] Zhen Y, Wei Z, Song G,. Breast cancer resistance protein (ABCG2) determines distribution of genistein phase II metabolites: Reevaluation of the roles of ABCG2 in the disposition of genistein [J]., 2012, 40(10): 1883.

Effect of multidrug resistance protein 2 on pharmacokinetics of wogonin and its major phase Ⅱ metabolites

ZHENG Rong1, 2, ZHANG Qi-song2, 3, 4, HU Xue-li1, 2, XU Rui1, 2, PENG Guo-shuang1, 2, CHANG Bing-lin1, 2, HU Ze-hua1, 2, XU Xin-lin1, 2, YANG Bao1, 2, 4

1. Medical School, Hubei Minzu University, Enshi 445000, China 2. Hubei Provincial Key Laboratory of Occurrence and Intervention of Rheumatic Diseases, Hubei Minzu University, Enshi 445000, China 3. Medical College, Guangxi University, Nanning 530004, China 4. School of Pharmaceutical Sciences, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, China

To study the effect of multidrug resistance protein 2 (MRP2) on pharmacokinetic behaviors of wogonin and its major phase Ⅱ metabolites.FVB wild-type and?/?mice were taken blood from eye sockets at different time points after ig wogonin with β-cyclodextrin. The plasma concentrations of wogonin, wogonoside and wogonin-7--sulfate were determined by ultra-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (UPLC-MS) method. The pharmacokinetic parameters were calculated by non-compartmental models with DAS 2.0 software.The linearity of three components was good, and accuracy, precision, stability and recovery rate met the requirements. Wogonin was mostly biotransformed to wogonoside and wogonin-7--sulfate and these analytes reached peak concentration (max) within 30 min. The plasmamaxandarea under the curve(AUC0～t) of wogonoside were the highest, followed by wogonin-7--sulfate, and wogonin was the lowest. Compared with FVB wild-type group,maxand AUC0～tof wogonoside and wogonin-7--sulfate in?/?group were significantly increased (< 0.05, 0.01).MRP2 mediated the efflux of wogonoside and wogonin-7--sulfate, significantly affected the disposal process of wogonin.

wogonin; wogonoside; wogonin-7--sulfate; pharmacokinetics; multidrug resistance protein 2; phase II metabolites

R285.61

A

0253 - 2670(2022)21 - 6779 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.21.015

2022-07-31

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81560703）；湖北民族大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（S202110517027）；廣西大學(xué)高層次人才基金項(xiàng)目（A3370051006）；風(fēng)濕性疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（湖北民族大學(xué)）項(xiàng)目（PT022202）

鄭 蓉，女，本科，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)。E-mail: 2219251481@qq.com。

楊 寶，博士，講師，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)。E-mail: ybsept@qq.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]