沙蔥總酚含量測定及抗氧化活性分析

張山佳，韓雪怡

(許昌學院，河南 許昌 461000)

沙蔥風味獨特，具有較強的抗寒性和較高的營養(yǎng)價值，對人體代謝、抗氧化以及血管舒張具有明顯的作用[1]。人體代謝過程中會產(chǎn)生各種氧化性自由基，沙蔥干粉水溶液中含有的總酚物質(zhì)能夠抑制這種氧化性自由基的生成，同時對已經(jīng)存在的氧化性自由基進行消除，使氧化性自由基的活性逐漸降低[2]。沙蔥干粉水提取物中具有這種抗氧化功能的成分為總酚，其抗氧化能力與沙蔥干粉水提取物濃度為近似線性關(guān)系，濃度越高，總抗氧化能力越強[3]。沙蔥干粉水提取物中的總酚是生長過程中產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，能夠?qū)θ梭w產(chǎn)生多種生物學效應(yīng)，同時降低人體內(nèi)活性氧含量水平，并且具有消炎、抗過敏和防止血栓形成的作用。沙蔥干粉水提取物總酚物質(zhì)含量水平是評價沙蔥營養(yǎng)價值和綜合品質(zhì)的重要參數(shù)指標[4]。沙蔥干粉水提取物中的總酚是一種包含多個酚羥基的化合物，可分為低分子量的單聚體酚類和分子量較大的多聚體酚類，酚羥基容易被氧化，能夠有效捕捉活性氧自由基，因此植物總酚能夠清除機體氧化自由基，沙蔥中的總酚物質(zhì)含量和特性與沙蔥的生長狀態(tài)和外界條件有密切關(guān)系[5]。

本文以沙蔥為原材料，對其進行水解后提取，測定沙蔥水提取物中的總酚含量，同時對總酚抗氧化活性進行實驗測定，為沙蔥的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 待檢測樣品制備

實驗原材料采用阿拉善沙蔥，將其放置于真空冷凍機中進行冷凍干燥處理，粉碎后在60目過濾網(wǎng)中進行篩選，使用四氯甲烷對過濾后的沙蔥干粉進行24 h脫脂，過濾后置于通風陰涼處晾干備用[6-7]。沙蔥干粉水溶液中含有大量的纖維素，利用超聲波提取會導致細胞壁的破壞，影響實驗測定的準確性[8]。因此，本文在進行沙蔥干粉水溶液中總酚物質(zhì)含量測定時，選用水解的方式制備待檢測樣品。

稱取10 g脫脂處理后的沙蔥干粉，加入100 mL的蒸餾水，浸泡24 h后過濾，再加入100 mL的蒸餾水，浸泡24 h后過濾，將兩次濾液合并在一起，采用循環(huán)水蒸發(fā)儀對濾液進行濃縮處理，濃縮至20 mL，于4 ℃條件下保存，作為待檢測沙蔥干粉提取物水溶液備用。

2 沙蔥干粉水溶液中總酚含量測定與抗氧化活性分析方法

采用Folin-Ciocalteu比色法測定沙蔥干粉提取物溶液中的總酚物質(zhì)含量，實驗過程中以沒食子酸為標準檢測樣品，繪制標準檢測曲線[9-10]。測定過程中，量取0.1 mL沙蔥干粉提取物溶液，放置于2 mL離心管中，加入濃度為10%的Folin-Ciocalteu試劑0.2 mL，對其進行渦旋處理，使沙蔥干粉提取物溶液與Folin-Ciocalteu試劑能夠充分混合均勻，混勻后加入0.8 mL濃度為0.7 mol/L的Na2CO3溶液，在25 ℃條件下放置2 h作為總酚待檢測樣品溶液[11]。將混合完成的總酚待檢測樣品溶液放置于96微孔板中，加入濃度分別為0，0.05，0.1，0.15，0.2，0.25 mg/mL的沒食子酸0.2 mL，在765 nm波長處測定溶液的吸光度值。待檢測沙蔥干粉提取物水溶液的總酚含量使用沒食子酸為標準參數(shù)進行定量，沙蔥干粉提取物溶液的總酚含量為每1 g沙蔥干粉中的沒食子酸當量。

利用二銨鹽原液與過硫酸鉀在室溫條件下反應(yīng)12 h來測定沙蔥干粉提取物溶液總酚的ABTS自由基清除能力[12]。將濃度為0.07 mol/mL的ABTS溶液0.2 mL和0.025 mol/mL的過硫酸鉀溶液0.2 mL進行混合，在室溫條件下充分反應(yīng)12 h，使用乙醇對混合溶液進行稀釋，乙醇添加量要求能夠確保混合溶液在734 nm處的吸光度為0.7。將混合溶液放置于96微孔板中，在734 nm波長處測定溶液的吸光度值，作為對照組吸光度。將濃度為0.07 mol/mL的ABTS溶液放置于96微孔板中，加入待檢測沙蔥干粉提取物水溶液0.2 mL，沙蔥干粉提取物水溶液濃度分別為1.56，3.13，6.25，12.5，25，50 mg/mL，在室溫條件下放置2 min，在734 nm波長處測定溶液的吸光度值，作為待檢測沙蔥干粉提取物水溶液在ABTS溶液中的吸光度值。將95%的乙醇溶液放置于96微孔板中，加入待檢測沙蔥干粉提取物水溶液0.2 mL，沙蔥干粉提取物水溶液濃度分別為1.56，3.13，6.25，12.5，25，50 mg/mL，在室溫條件下放置2 min，在734 nm波長處測定溶液的吸光度值，作為待檢測沙蔥干粉提取物水溶液在乙醇中的吸光度值。根據(jù)下式計算沙蔥干粉水溶液中總酚的ABTS自由基清除能力：

式中：Ac為對照組的吸光度；Ai為待檢測沙蔥干粉提取物水溶液在ABTS溶液中的吸光度；Aj為待檢測沙蔥干粉提取物水溶液在乙醇中的吸光度。

沙蔥干粉提取物中總酚對鐵離子的還原能力測定過程中，向96微孔板中加入濃度分別為0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mol/L的沙蔥干粉提取物水溶液0.4 mL，加入濃度為0.3 mol/L的醋酸鹽緩沖液0.2 mL，加入濃度為0.01 mol/L的TPTZ溶液0.02 mL，加入濃度為0.02 mol/L的氯化鐵溶液0.02 mL，在37 ℃條件下孵育30 min，孵育完成后，在595 nm波長處測定溶液的吸光度值[13-14]。

沙蔥總酚水提取物對超氧陰離子自由基的清除率可以用來表示自身的抗氧化活性[15]。實驗測定過程中，使用鄰苯三酚自氧化法生成超氧陰離子，使用pH值為8.3的磷酸鹽溶液4.5 mL，加入相同體積的乙醇，乙醇質(zhì)量濃度分別為0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mol/L，振蕩搖勻后在30 ℃條件下進行水浴保溫，保溫時間20 min，保溫完成后加入1 mL濃度為0.02 mol/L的鄰苯三酚溶液，搖勻后在波長325 nm處測定吸光度，每次間隔30 s，計算每分鐘范圍內(nèi)溶液的吸光度增加值，作為對照組。同理，使用pH值為8.3的磷酸鹽溶液4.5 mL，加入相同體積的沙蔥干粉水溶液中總酚濃度分別為0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mol/L，振蕩搖勻后在30 ℃條件下進行水浴保溫，保溫時間為20 min，保溫完成后加入濃度為0.02 mol/L的鄰苯三酚溶液1 mL，搖勻后在波長325 nm處測定吸光度，每次間隔30 s，計算每分鐘范圍內(nèi)溶液的吸光度增加值，作為待檢測組。沙蔥總酚水提取物對超氧陰離子自由基的清除率計算公式為：

超氧陰離子自由基的清除率=(ΔA0-ΔAi)/ΔA0×100%。

式中：ΔA0為對照組溶液的吸光度增加值，ΔAi為待檢測組溶液的吸光度增加值。

3 實驗測定結(jié)果與數(shù)據(jù)分析

采用Folin-Ciocalteu比色法測定總酚含量，使用沒食子酸為標準參數(shù)對總酚含量進行定量，沙蔥干粉水溶液中總酚含量(沒食子酸定量數(shù)據(jù))見表1。

表1 沙蔥干粉水溶液中總酚含量(沒食子酸定量數(shù)據(jù))

由表1可知，當沒食子酸濃度小于0.25 mg/mL時，溶液吸光度與沒食子酸濃度之間具有較好的線性關(guān)系，可擬合出標準近似曲線方程為y=4x+0.07，定量測定得出沙蔥干粉水溶液中總酚含量為10.2 mg/g。

ABTS溶液是一種穩(wěn)定的機體自由基，待檢測樣品的抗氧化能力越強，表明其反應(yīng)過程中提供反應(yīng)電子的能力越強，ABTS溶液與待檢測樣品溶液的反應(yīng)量也就越大，反應(yīng)過程中表現(xiàn)出較快的反應(yīng)速率，對待檢測樣品的吸光度變化過程進行檢測，能夠直接反映出待檢測樣品的自由基清除率。沙蔥干粉水溶液中總酚自由基清除率實驗數(shù)據(jù)見表2。

表2 沙蔥干粉水溶液中總酚自由基清除率實驗數(shù)據(jù)

續(xù) 表

由表2可知，當待檢測樣品濃度小于12.5 mg/mL時，待檢測樣品的自由基清除率快速上升，自由基清除能力隨著待檢測樣品濃度的增大而增加，當待檢測樣品濃度大于12.5 mg/mL時，待檢測樣品的自由基清除率趨于穩(wěn)定，當濃度為50 mg/mL時，自由基清除率達到100%。

沙蔥總酚對鐵離子的還原能力主要用來反映其抗氧化能力，在酸性環(huán)境下，將高價鐵離子還原為低價鐵離子，在595 nm處檢測溶液的吸光度，吸光度越大，表明待檢測樣品鐵離子還原能力越強，用來反映待檢測沙蔥干粉提取物水溶液的抗氧化能力。沙蔥干粉水溶液中總酚對鐵離子還原后溶液吸光度實驗數(shù)據(jù)見表3。

表3 沙蔥干粉水溶液中總酚對鐵離子溶液吸光度實驗數(shù)據(jù)

由表3可知，沙蔥干粉水溶液中總酚與鐵離子溶液在波長595 nm處的吸光度與溶液濃度呈線性關(guān)系，隨著待檢測樣品溶液質(zhì)量濃度的逐漸增大，溶液的吸光度逐漸增大，表明沙蔥總酚水提取物具有較強的抗氧化能力。

沙蔥干粉水溶液中總酚對超氧陰離子自由基清除率實驗結(jié)果見表4。

表4 沙蔥干粉水溶液中總酚對超氧陰離子自由基清除率

由表4可知，沙蔥干粉水溶液中總酚具有較強的超氧陰離子自由基清除能力，隨著沙蔥干粉水溶液中總酚濃度的增加，對超氧陰離子自由基的清除能力明顯提高。

4 結(jié)論

沙蔥水提取物中含有豐富的總酚，具有較好的抗氧化性和氧化自由基清除能力，對鐵離子的還原能力顯著。本文所研究的沙蔥干粉水溶液中總酚成分測定和抗氧化活性分析，為沙蔥資源的綜合利用與開發(fā)奠定了理論基礎(chǔ)。