板藍根乙醇提取物化學成分及其抑制一氧化氮釋放活性研究

張東東，孫 玉，李婧伊，阮德清，陳凱先, 3，李醫(yī)明，王 瑞*

板藍根乙醇提取物化學成分及其抑制一氧化氮釋放活性研究

張東東1, 2，孫 玉1，李婧伊2，阮德清2，陳凱先2, 3，李醫(yī)明2，王 瑞2*

1. 陜西中醫(yī)藥大學藥學院，陜西 咸陽 712046 2. 上海中醫(yī)藥大學中藥學院，上海 201203 3. 中國科學院上海藥物研究所，上海 201203

研究板藍根的化學成分及其抑制一氧化氮（NO）釋放活性。采用硅膠、反相ODS C18、葡聚糖凝膠、半制備液相等色譜技術(shù)分離純化，結(jié)合理化性質(zhì)，NMR、MS等波譜數(shù)據(jù)解析結(jié)構(gòu)，CCK-8法測定化合物抑制NO釋放活性。從板藍根中共分離鑒定了17個化合物，分別為(7,8,7′,8′)-3,4,3′,4′-tetramethoxy-9,7- dihydroxy-8.8′,7..9′-lignan（1）、(?)-(7,7′,8,8′)-4-β--吡喃葡萄糖基-4′-羥基-3,3′,5′-三甲氧基-7,9′:7′,9-雙環(huán)氧木脂烷（2）、liballinol（3）、2-amino-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propane-1,3-diol（4）、對羥基苯丙醇（5）、3-甲氧基-4-羥基苯丙醇（6）、3-羥基-1-(3-甲氧基-4-羥基-苯基)-丙基-1-酮（7）、3,4,5-三甲氧基肉桂酸（8）、()-4-(3,4)-3,4-dihydroxy-2,6,6- trimethylcyclohex-1-en-1-yl)but-3-en-2-one（9）、對羥基苯甲醛（10）、香草酸（11）、3,4-二羥基苯乙酸（12）、苯甲酰胺（13）、苯乙酰胺（14）、-焦谷氨酸（15）、-焦谷氨酸甲酯（16）和(4,5)-5-hydroxyhexan-4-olide（17）。化合物7和8具有抑制NO釋放活性，半數(shù)抑制濃度（median inhibition concentration，IC50）值分別為98.5、58.3 μmol/L。化合物9為新天然產(chǎn)物，化合物1～4、9、12～17為首次從板藍根中分離鑒定，化合物7和8表現(xiàn)出抑制NO釋放活性。

板藍根；菘藍；一氧化氮抑制活性；苯丙素；苯甲酸衍生物；3,4,5-三甲氧基肉桂酸

板藍根是十字花科（Cruciferae）菘藍屬L.植物菘藍Fort.的干燥根[1]，主產(chǎn)于我國北方地區(qū)。其味苦性寒，具有清熱解毒、涼血利咽等功效，常治療流行性感冒、流行性腮腺炎、流行性乙型肝炎等疾病[2-5]。近年來板藍根備受國際青睞，2019年板藍根國際質(zhì)量標準的發(fā)布，進一步促進了其國際化，也展現(xiàn)出板藍根優(yōu)越的市場前景和研究價值。對板藍根近40年的文獻綜述研究發(fā)現(xiàn)，雖然已經(jīng)有300多個化合物及其相關的藥理活性被報道，但是相比于板藍根復雜的化學成分和廣泛的藥理活性，這些研究基礎并不足以闡明板藍根的藥效物質(zhì)。為進一步科學開發(fā)利用板藍根資源，本實驗在前期的研究基礎上[5-15]，繼續(xù)對其80%乙醇提取物進行系統(tǒng)分離純化，通過理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)共鑒定了17個化合物，分別為(7,8,7′,8′)- 3,4,3′,4′-tetramethoxy-9,7-dihydroxy-8.8′,7..9′-lignan（1）、(?)-(7,7′,8,8′)-4-β--吡喃葡萄糖基-4′-羥基-3,3′,5′-三甲氧基-7,9′:7′,9-雙環(huán)氧木脂烷[(?)-(7,7′,8,8′)-4-β--glucopyranosyloxy-3,3′,5′- trimethoxy-7,9′:7′,9-diepoxy-lignane，2]、liballinol（3）、2-amino-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) propane-1,3-diol（4）、對羥基苯丙醇（-hydroxyl benzyl propanol，5）、3-甲氧基-4-羥基苯丙醇（3-methoxy-4-hydroxyphenylpropanol，6）、3-羥基- 1-(3-甲氧基-4-羥基-苯基)-丙基-1-酮（4-β-hydroxy- propiovanillone，7）、3,4,5-三甲氧基肉桂酸（3,4,5- trimethoxy-cinnammic acid，8）、()-4-(3,4)-3,4- dihydroxy-2,6,6-trimethylcyclohex-1-en-1-yl) but-3- en-2-one（9）、對羥基苯甲醛（-hydroxy- benzaldehyde，10）、香草酸（vanillic acid，11）、3,4-二羥基苯乙酸（3,4-dihydroxyphenylacetic acid，12）、苯甲酰胺（benzamide，13）、苯乙酰胺（phenylacetamide，14）、-焦谷氨酸（- pyroglutamate，15）、-焦谷氨酸甲酯（methyl-- pyroglutamate，16）和(4,5)-5-hydroxyhexan- 4-olide（17）。其中，化合物9為新天然產(chǎn)物，化合物1～4、9、12～17為首次從板藍根中分離鑒定。一氧化氮（NO）抑制活性結(jié)果顯示，化合物7和8具有抑制NO釋放活性。

1 儀器與材料

Bruker Avance 400核磁共振儀（德國 Bruker公司）；BT 125D型電子分析夭平（德國賽多利斯有限公司）；1260Infinity II半制備液相、1260Infinity分析液相（美國安捷倫科技有限公司）；CAPCELLPAK半制備色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm），資生堂（中國）投資有限公司；乙腈和甲醇（阿達瑪斯試劑有限公司，HPLC純）；葡聚糖凝膠LH-20（美國GE公司）；反相ODS C18柱填料（日本島津公司）；Multiskan go 酶標儀（美國賽默飛公司）；Thermo HERH細胞培養(yǎng)箱（美國賽默飛公司）；氨基胍鹽酸鹽（Sigma公司）。

板藍根藥材于2017年7月采自黑龍江省大慶市，經(jīng)上海中醫(yī)藥大學王瑞教授鑒定為十字花科松藍屬植物松藍Fort. 的干燥根，標本（20170716SL）保存于上海中醫(yī)藥大學中藥化學教研室。

2 提取與分離

干燥的板藍根藥材45 kg，經(jīng)80%乙醇加熱回流提取3次，減壓回收乙醇，分別用石油醚、二氯甲烷、正丁醇萃取，得到石油酰部位20 g、二氯甲烷部位170 g、正丁醇部位800 g。二氯甲烷部位（l70 g）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（100∶0～10∶1）得到11個組分（F1～F11）。F3（16 g）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（100∶1～100∶5）系統(tǒng)洗脫，得到F3-1～F3-6，6個組分。F3-5（2.9 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物7（4.5 mg）和8（3.6 mg）。F3-6（1.7 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物9（4.0 mg）；F4（14 g）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（100∶1～100∶5）系統(tǒng)洗脫，得到F4-1～F4-5，5個組分。F4-4（0.8 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，合并相同流分后，再經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水 22∶78）洗脫，得到化合物3（2.8 mg，R＝18.6 min）。F4-5（2.3 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物14（5.4 mg）；F7（5 g）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（100∶5～100∶10）系統(tǒng)洗脫，得到F7-1～F7-4，4個組分。F7-2（3.1 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到F7-2-1～F7-2-4，4個組分，F(xiàn)7-2-3（0.4 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水28∶72）洗脫，得到化合物5（4.9 mg，R＝24.2 min）和6（2.5 mg，R＝32.1 min）；F8（4 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、30%、60%）洗脫，得到3個組分F8-1～F8-3。F8-3（2.7 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到F8-3-1～F8-3-3，3個組分，F(xiàn)8-3-2（0.5 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水15∶85）洗脫，得到化合物10（4.4 mg，R＝9.4 min）和11（5.2 mg，R＝17.3 min）；F9（6 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、30%、50%、70%）洗脫，得到F9-1～F9-4，4個組分。F9-4（3.6 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到4個組分F9-4-1～F9-4-4。F9-4-4（0.8 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水18∶82）洗脫，得到化合物12（2.3 mg，R＝9.2 min）；F10（6 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、20%、40%、60%）洗脫，得到4個組分F10-1～F10-4。F10-2（0.2 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水21∶79）洗脫，得到化合物2（4.6 mg，R＝25.1 min）。F10-4（3.6 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物1（2.8 mg）；F11（9 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜甲醇-水（1∶1）洗脫，得到F11-1～F11-8，8個組分。F11-5（0.3 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水25∶75）洗脫，得到化合物4（9.4 mg，R＝14.9 min）。F11-7（0.4 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜甲醇-水（1∶1）洗脫，得到化合物17（6.7 mg）；F13（87 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、30%、50%、70%）洗脫，得到F13-1～F13-4，4個組分。F13-4（10.5 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物13（3.1 mg）；F14（22 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、30%、50%、70%）洗脫，得到F14-1～F14-4，4個組分。F14-3（3.2 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、30%、50%、70%）洗脫，得到F14-3-1～F14-3-4，4個組分。F14-3-3（0.9 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水32∶68）洗脫，得到化合物15（5.6 mg，R＝10.3 min）和16（2.7 mg，R＝13.9 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無定形粉末，ESI-MS/: 405 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 6.88 (1H, d,= 1.3 Hz, H-2), 6.91 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 6.84 (1H, dd,= 1.3, 8.0 Hz, H-6), 4.55 (1H, d,= 7.3 Hz, H-7), 2.37 (1H, m, H-8), 3.10 (2H, m, H-9), 6.84 (1H, d,= 1.3 Hz, H-2′), 6.84 (1H, d,= 7.7 Hz, H-5′), 6.74 (1H, dd,= 1.3, 7.7 Hz, H-6′), 4.33 (1H, dd,= 3.4, 8.1 Hz, H-7′), 1.73 (1H, m, H-8′), 3.72 (2H, overlapped, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 137.3 (C-1), 110.1 (C-2), 148.9 (C-3), 148.1 (C-4), 111.7 (C-5), 118.6 (C-6), 83.2 (C-7), 49.7 (C-8), 60.7 (C-9), 135.7 (C-1′), 110.5 (C-2′), 148.8 (C-3′), 148.1 (C-4′), 119.2 (C-5′), 111.5 (C-6′), 74.1 (C-7′), 52.4 (C-8′), 69.9 (C-9′), 55.8 (3-OCH3), 55.7 (3′-OCH3), 55.9 (4-OCH3), 55.8 (4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[16]，化合物1鑒定為(7,8,7′,8′)- 3,4,3′,4′-tetramethoxy-9,7-dihydroxy-8.8′,7..9′-lignan。

化合物2：無色膠狀物，ESI-MS: 551 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.88 (1H, d,= 1.3 Hz, H-2), 6.71 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5), 6.74 (1H, dd,= 1.3, 8.1 Hz, H-6), 4.65 (1H, d,= 4.6 Hz, H-7), 3.04 (1H, overlapped, H-8), 4.15 (1H, m, H-9a), 3.76 (1H, overlapped, H-9b), 6.65 (2H, s, H-2′, 6′), 4.60 (1H, d,= 4.8 Hz, H-7′), 3.04 (1H, overlapped, H-8′), 4.15 (1H, m, H-9′a), 3.76 (1H, overlapped, H-9′b), 4.88 (1H, m, H-1′′), 3.17～3.11 (4H, m, H-2′′～5′′), 3.60 (1H, d,= 11.3 Hz, H-6′′a), 3.40 (1H, m, H-6′′b), 3.76 (9H, s, 3, 3′, 5′-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 137.6 (C-1), 110.9 (C-2), 148.0 (C-3), 146.4 (C-4), 115.6 (C-5), 119.1 (C-6), 85.6 (C-7), 54.2 (C-8), 71.7 (C-9), 132.6 (C-1′), 104.7 (C-2′), 153.1 (C-3′), 134.2 (C-4′), 153.1 (C-5′), 104.7 (C-6′), 85.6 (C-7′), 54.0 (C-8′), 71.5 (C-9′), 103.2 (C-1′′), 74.6 (C-2′′), 77.0 (C-3′′), 70.4 (C-4′′), 77.7 (C-5′′), 61.4 (C-6′′), 56.1 (3-OCH3), 56.9 (3′, 5′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[17]，化合物2鑒定為(?)-(7,7′,8,8′)-4-β--吡喃葡萄糖基- 4′-羥基-3,3′,5′-三甲氧基-7,9′:7′,9-雙環(huán)氧木脂烷。

化合物3：白色粉末，ESI-MS/: 299 [M＋H]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.18 (4H, d,= 8.6, H-2, 2′, 6, 6′), 6.75 (4H, d,= 8.6 Hz, H-3, 3′, 5, 5′), 4.68 (2H, d,= 4.2 Hz, H-7, 7′), 3.11 (2H, m, H-8, 8′), 3.81 (2H, dd,= 8.7, 3.9 Hz, H-9a, 9a′), 4.19 (2H, dd,= 8.7, 2.2 Hz, H-9b, 9b′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 133.1 (C-1, 1′), 128.8 (C-2, 2′, 6, 6′), 116.3 (C-3, 3′, 5, 5′), 158.3 (C-4, 4′), 87.4 (C-7, 7′), 55.3 (C-8, 8′), 72.5 (C-9, 9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[18]，故鑒定化合物3為liballinol。

化合物4：白色無定形粉末，ESI-MS: 212 [M－H]－。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.89 (1H, d,= 1.5 Hz, H-2), 6.74 (1H, dd,= 1.5, 8.0 Hz, H-6), 6.72 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 4.60 (1H, d,= 4.1 Hz, H-7), 4.10 (1H, m, H-9a), 3.76 (3H, s, OCH3), 3.70 (1H, dd,= 3.4, 9.1 Hz, H-9b), 3.39 (2H, brs, NH2), 3.03 (1H, dd,= 2.0, 4.2 Hz, H-8)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 132.2 (C-1), 110.4 (C-2), 147.6 (C-3), 146.0 (C-4), 115.2 (C-5), 118.7 (C-6), 85.2 (C-7), 53.6 (C-8), 70.9 (C-9), 55.6 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[19]，故化合物4鑒定為2-amino-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) propane-1,3- diol。以上數(shù)據(jù)通過DEPT 135、HSQC、HMBC和1H-1H COSY譜圖進行歸屬驗證。

化合物5：白色粉末，ESI-MS/: 151 [M－H]?。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.96 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2, 6), 6.65 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3, 5), 3.39 (2H, t,= 6.5 Hz, H-9), 2.48 (2H, t,= 6.5 Hz, H-7), 1.65 (2H, m, H-8)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 155.2 (C-4), 132.2 (C-1), 129.1 (C-2, 6), 115.0 (C-3, 5), 60.1 (C-9), 34.7 (C-8), 30.8 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[20]，化合物5鑒定為對羥基苯丙醇。

化合物6：白色粉末，ESI-MS/: 183 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.74 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2), 6.68 (1H, d,7.9 Hz, H-5), 6.58 (1H, dd,= 7.9, 1.8 Hz, H-6), 3.76 (3H, s, 3-OCH3), 3.41 (2H, t,= 6.5 Hz, H-9), 2.52 (2H, t,= 7.3 Hz, H-7), 1.68 (2H, m, H-8)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 133.0 (C-1), 112.5 (C-2), 147.4 (C-3), 144.4 (C-4), 115.3 (C-5), 120.3 (C-6), 31.3 (C-7), 34.7 (C-8), 60.2 (C-9), 55.5 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[21]，化合物6鑒定為3-甲氧基-4-羥基苯丙醇。

化合物7：無定形白色粉末，ESI-MS: 195 [M－H]?。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 7.44 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 7.51 (1H, dd,= 8.2, 2.0 Hz, H-6′), 6.86 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5′), 3.82 (3H, s, OCH3), 3.81 (1H, m, H-2a), 3.05 (1H, m, H-2b), 3.74 (2H, t,= 6.2 Hz, H-3)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 197.3 (C-1), 40.9 (C-2), 57.2 (C-3), 128.9 (C-1′), 111.0 (C-2′), 147.5 (C-3′), 151.6 (C-4′), 114.9 (C-5′), 123.1 (C-6′), 55.6 (3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[22]，化合物7鑒定為3-羥基- 1-(3-甲氧基-4-羥基-苯基)-丙基-1-酮。

化合物8：無色針狀結(jié)晶（甲醇），ESI-MS: 237 [M－H]?。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.59 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7), 6.91 (2H, s, H-2, 6), 6.37 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8), 3.88 (6H, s, 3, 5-OCH3), 3.77 (3H, s, 4-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 126.5 (C-1), 107.1 (C-2, 6), 149.7 (C-3, 5), 140.3 (C-4), 147.3 (C-7), 115.6 (C-8), 169.8 (C-9), 52.2 (3, 5-OCH3), 57.0 (4-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[23]，化合物8鑒定為3,4,5-三甲氧基肉桂酸。

化合物9：白色粉末，ESI-MS/: 387 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 1.76 (1H, dd,= 3.1, 12.4 Hz, H-2a), 2.26 (1H, dd,= 12.4, 12.4 Hz H-2b), 3.63 (1H, ddd,= 12.4, 3.8, 3.4 Hz, H-3), 3.74 (1H, d,= 3.4 Hz, H-4), 7.15 (1H, d,= 16.4 Hz, H-7), 6.03 (1H, d,= 16.4 Hz, H-8), 2.27 (3H, s, H-10), 1.80 (3H, s, H-11), 1.06 (3H, s, H-12), 1.01 (3H, s, H-13)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 36.8 (C-1), 41.5 (C-2), 65.8 (C-3), 71.0 (C-4), 134.0 (C-5), 138.0 (C-6), 142.4 (C-7), 133.3 (C-8), 198.4 (C-9), 27.6 (C-10), 20.2 (C-11), 27.8 (C-12), 30.2 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[24]，化合物9鑒定為()-4-(3,4)-3,4-dihydroxy-2,6,6-trimethyl- cyclohex-1-en-1-yl)but-3-en-2-one。

化合物10：白色粉末，ESI-MS/: 123 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 9.79 (1H, s, COH), 7.75 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2, 6), 6.79 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3, 5), 10.63 (1H, brs, OH)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 128.9 (C-1), 136.1 (C-2, 6), 116.3 (C-3, 5), 163.8 (C-4), 191.4 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[25]，化合物10鑒定為對羥基苯甲醛。

化合物11：白色粉末，ESI-MS/: 169 [M＋H]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.15 (1H, brs, COOH), 7.44 (1H, overlapped, H-2), 6.79 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5), 6.79 (1H, overlapped, H-6), 3.81 (3H, s, OCH3), 10.13 (1H, brs, OH)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 122.3 (C-1), 115.5 (C-2), 147.6 (C-3), 151.5 (C-4), 113.2 (C-5), 123.9 (C-6), 167.8 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[26]，化合物11鑒定為香草酸。

化合物12：白色粉末，ESI-MS/: 169 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.66 (1H, d,= 2.2 Hz, H-2), 6.56 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5), 6.61 (1H, dd,= 8.3, 2.2 Hz, H-6), 2.16 (2H, s, H-7), 8.94 (1H, brs, OH), 10.07 (1H, brs, OH)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 127.3 (C-1), 109.8 (C-2), 135.9 (C-3), 152.7 (C-4), 112.8 (C-5), 113.7 (C-6), 36.6 (C-7), 176.6 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[27-28]，化合物12鑒定為3,4-二羥基苯乙酸。

化合物13：白色粉末，ESI-MS/: 122 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 7.43 (2H, m, H-2, 6), 7.88 (2H, m, H-3, 5), 7.51 (1H, m, H-4), 8.02 (1H, brs, NH), 7.41 (1H, brs, NH)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 131.3 (C-1), 127.5 (C-2, 6), 128.3 (C-3, 5), 134.3 (C-4), 168.0 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[29]，化合物13鑒定為苯甲酰胺。

化合物14：白色粉末，ESI-MS/: 136 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 7.26 (2H, m, H-2, 6), 7.28 (2H, m, H-3, 5), 7.20 (1H, m, H-4), 6.91 (1H, brs, NH), 7.51 (1H, brs, NH), 3.18 (2H, s, H-7)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 126.7 (C-1), 128.6 (C-2, 6), 129.5 (C-3, 5), 136.9 (C-4), 42.7 (C-7), 172.8 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[29]，化合物14鑒定為苯乙酰胺。

化合物15：白色粉末，ESI-MS/: 130 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 7.93 (1H, brs, NH), 4.08 (1H, dd,= 4.2, 9.0 Hz, H-2), 2.10 (1H, m, H-3a), 2.35 (1H, m, H-3b), 1.96 (1H, m, H-4a), 2.13 (1H, m, H-4b)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 52.5 (C-2), 24.9 (C-3), 29.3 (C-4), 180.0 (C-5), 174.9 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[30]，化合物15鑒定為-焦谷氨酸。

化合物16：白色粉末，ESI-MS/: 144 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.00 (1H, brs, NH), 4.18 (1H, dd,= 4.2, 9.0 Hz, H-2), 2.11 (1H, m, H-3a), 2.34 (1H, m, H-3b), 1.96 (1H, m, H-4a), 2.12 (1H, m, H-4b), 3.67 (3H, s, OCH3)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 52.3 (C-2), 25.1 (C-3), 29.5 (C-4), 177.5 (C-5), 173.8 (C-6), 55.1 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[31]，化合物16鑒定為-焦谷氨酸甲酯。

化合物17：白色粉末，ESI-MS/: 131 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.44 (2H, m, H-2), 1.95 (1H, m, H-3a), 2.14 (1H, m, H-3b), 4.30 (1H, m, H-4), 3.62 (1H, m, H-5), 1.08 (3H, d,= 4.2 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 177.9 (C-1), 28.7 (C-2), 23.9 (C-3), 84.0 (C-4), 68.2 (C-5), 19.4 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[32]，化合物17鑒定為(4,5)-5-hydroxyhexan-4-olide。

4 NO抑制活性測定

參考課題組前期文獻報道[6-8]，化合物1～17采用CCK8法測定其NO抑制活性，實驗方法分別設置空白組（FBS）、脂多糖（LPS）組（LPS 1 μg/mL）、LPS（1 μg/mL）＋陽性藥氨基胍鹽酸鹽（0.1、1、5、25、50、100 μmol/L）組和LPS（1 μg/mL）＋化合物1～17（0.1、1、5、25、50、100 μmol/L）組，每組實驗重復3次，IC50取平均值。結(jié)果顯示，化合物7和8具有抑制活性，IC50值分別為（98.5±6.4）和（58.3±2.8）μmol/L，其余化合物的IC50值均＞100 μmol/L，陽性藥氨基胍鹽酸鹽IC50值為（22.7±0.4）μmol/L。

5 討論

本實驗通過系統(tǒng)分離純化得到了17個化合物，其中11個為首次從板藍根中報道，進一步豐富了其化學成分，但NO抑制活性結(jié)果顯示僅化合物7和8具有溫和的抑制活性。因此，關于其抗炎作用的藥效物質(zhì)基礎仍需要大量系統(tǒng)的研究工作來支撐。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Chemical constitutes from alcohol extract ofand their nitric oxide inhibitory activities

ZHANG Dong-dong1, 2, SUN Yu1, LI Jing-yi2, RUAN De-qing2, CHEN Kai-xian2, 3, LI Yi-ming2, WANG Rui2

1. School of Pharmacy, Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712046, China 2. School of Pharmacy, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China 3. Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Science, Shanghai 201203, China

To study the chemical constitutes from the alcohol extract ofroots and their nitric oxide inhibitory activities.The chemical components were isolated and purified by silica gel, ODS C18gel, sephadex LH-20 and semi preparative-HPLC chromatographic techniques while the structures were deduced by NMR and MS spectral data analysis, the NO inhibitory activities were tested by CCK-8 methods.Seventeen compounds were obtained and elucidated as (7,8,7′,8′)-3,4,3′,4′-tetramethoxy-9,7-dihydroxy-8.8′,7..9′-lignan (1), (?)-(7,7′,8,8′)-4-β--glucopyranosyloxy-3,3′,5′- trimethoxy-7,9′:7′,9-diepoxy-lignane (2), liballinol (3), 2-amino-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propane-1,3-diol (4),-hydroxyl benzyl propanol (5), 3-methoxy-4-hydroxyphenylpropanol (6), 4-β-hydroxypropiovanillone (7), 3,4,5-trimethoxy-cinnammic acid (8), ()-4-(3,4)-3,4-dihydroxy-2,6,6-trimethylcyclohex-1-en-1-yl)but-3-en-2-one (9),-hydroxybenzaldehyde (10), vanillic acid (11), 3,4-dihydroxyphenylacetic acid (12), benzamide (13), phenylacetamide (14),-pyroglutamate (15), methyl--pyroglutamate (16), and (4,5)-5-hydroxyhexan-4-olide (17). Compounds 7 and 8 exhibited NO inhibitory activities with IC50values of 98.5 and 58.3 μmol/L, respectively.Compound 9 was a new natural product, compounds 1—4, 9 and 12—17 were isolated fromroot for the first time, compounds 7 and 8 showed NO inhibitory activities.

;Fort.; nitric oxide inhibitory activities; phenylpropanine; benzoic acid derivatives; 3,4,5- trimethoxy-cinnammic acid

R284.1

A

0253 - 2670(2022)07 - 1943 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.07.003

2021-08-15

國家自然科學基金項目（81573571）；國家自然科學基金項目（81673570）；上海市進一步加快中醫(yī)藥傳承創(chuàng)新發(fā)展三年行動計劃項目 [ZY(2021-2023)-0215]；陜西中醫(yī)藥大學學科創(chuàng)新團隊項目（2019-YL12）

張東東，男，博士，講師，主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎研究。Tel: (029)38185165 E-mail: zhangnatprod@163.com

王 瑞，女，教授，博士生導師。Tel: (021)51322181 E-mail: wr@shutcm.edu.cn

[責任編輯 王文倩]