GOLPH3與非小細胞肺癌上皮間質轉化的相關性研究

郝 琳 康 娟 宋 英

非小細胞肺癌是源自支氣管黏膜、支氣管腺體以及肺泡上皮累的惡性腫瘤，在顯微鏡下主要表現為細胞漿大和胞漿豐富，是我國較為多見的腫瘤[1]。盡管近些年，對于肺癌的治療方案有了較大的提升，但是肺癌的發生機制仍不明確，更需要進一步進行探索[2]。上皮間質轉化是在生理和病理的基礎下出現上皮細胞表型細胞喪失極性后活動性升高，能夠在細胞間質活動，自上皮樣細胞到間充質細胞轉變為特點的變化[3]。研究認為上皮間質轉化與癌細胞的轉移和遷徙等有關。高爾基磷酸化蛋白3(golgi protein phosphorylation 3,GOLPH3)屬于高爾基體基質蛋白的一種，是一種新型癌基因，主要分布于高爾基體反面網絡機構內，能夠對雷帕霉素靶蛋白信號通路進行調控，從而影響腫瘤的分化和增生[4-5]。研究認為，GOLPH3與癌組織上皮間質轉化存在一定相關性[6]。因此本研究選取我院2019年10月至2021年10月收治的72例非小細胞肺癌患者臨床資料進行分析，以研究GOLPH3與非小細胞肺癌上皮間質轉化的相關性研究。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院 2019年10月至2021年10月收治的72例非小細胞肺癌患者作為研究對象。納入標準：①患者符合《肺癌診斷治療學》[7]中非小細胞肺癌診斷標準；②患者術后經病理學明確非小細胞肺癌診斷；③患者入院前未接受治療；排除標準：①患者合并其他部位惡性腫瘤；②患者合并嚴重肝腎功能衰竭；③患者合并顱內感染、全身感染以及心血管疾病；④患者臨床資料不完整；⑤患者合并其他傳染性疾病。

1.2 方法

采用免疫組化法對患者肺癌組織和癌旁正常組織中GOLPH3蛋白進行檢測，其中試劑主要選取上海一研生物科技有限公司的GOLPH3抗體系多克隆抗體，北京中山金橋公司的即用型SP試劑盒、二苯甲、PBS以及DAB顯示液。將獲取的組織標本石蠟以4 μm 厚連續切片，攤片，并在60 ℃的烤片箱內連續烘烤60 min，在常規二甲苯脫蠟后，以梯度酒精水化，采用蒸餾水連續沖洗3次，每次3 min；將獲得的切片浸泡在pH為7.0的檸檬酸緩沖液內，放于高壓鍋中對抗原連續修復20 min，隨后放于室溫內冷卻，在用蒸餾水以及PBS沖洗2次，每次3 min；清晰PBS液體，隨后加入50 μl牛血清在各個切片上，封閉后在室溫內孵育5 min，將血清去除后，滴入第一抗體兔抗人GOLPH3多克隆抗體，放于濕盒內部，在室溫中靜置45 min，再次采用PBS連續沖洗3次，注入第三抗體，濕盒內在室溫下靜置45 min，PBS連續沖洗3次后將PBS去除，滴入50 μl DAB顯色液顯色，顯微鏡下反應時間3.5 min，采用自來水沖洗并終止反應，蘇木精復染后，采用鹽酸酒精分化，以自來水西返藍，隨后脫水封片，在顯微鏡下讀片。評定標準：GOLPH3陽性細胞質主要為棕黃色或者黃色，染色強度評分:未著色以及陽性細胞數<10%記為0分；著色低于背景色，陽性細胞數在10%～50%記為1分；中度著色，且明顯深于背景色，陽性細胞數在51%～75%記為2分；強著色，主要表現為棕黃色，陽性細胞數>75%記為3分。陰性為0～1分，陽性為≥2分。E-cadherin和vimentin以同樣方式進行切片和染色，E-cadherin評定標準：細胞膜或者細胞質發現棕黃色顆粒狀為陽性，細胞數<10%記陰性，≥10%記為陽性。Vimentin：評定標準：胞質染色發現棕黃色則記為陽性，每個切片內可觀察陽性細胞數目<10%記陰性，≥10%記為陽性。

1.3 觀察指標

對比患者肺癌組織和癌旁正常組織GOLPH3表達、上皮間之轉化標志物E-cadherin以及vimentin；對比患者不同臨床特征(病理類型、分化程度、淋巴結轉移情況)GOLPH3、E-cadherin以及vimentin表達情況，同時分析GOLPH3與E-cadherin和vimentin相關性。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 肺癌組織和癌旁正常組織GOLPH3、E-cadherin以及vimentin表達情況對比

肺癌組織GOLPH3和vimentin陽性率均顯著高于癌旁正常組織，E-cadherin陽性率顯著低于癌旁正常組織，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 肺癌組織和癌旁正常組織中GOLPH3表達情況對比/例

2.2 不同臨床特征GOLPH3表達情況

不同病理類型患者GOLPH3表達陽性差異無統計學意義(P>0.05)；不同分化程度、是否存在淋巴結轉移以及不同TNM分期患者GOLPH3陽性表達率差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同臨床特征患者GOLPH3表達情況/例

2.3 不同臨床特征E-cadherin表達情況

不同病理類型患者E-cadherin表達陽性差異無統計學意義(P>0.05)；不同分化程度、是否存在淋巴結轉移以及不同TNM分期患者E-cadherin表達陽性差異具有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同臨床特征患者E-cadherin表達情況/例

2.4 不同臨床特征vimentin表達情況

不同病理類型患者vimentin表達陽性差異無統計學意義(P>0.05)；不同分化程度、是否存在淋巴結轉移以及不同TNM分期患者vimentin表達陽性差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同臨床特征患者vimentin表達情況/例

2.5 非小細胞肺癌患者GOLPH3與E-cadherin和vimentin表達相關性分析

經過相關性分析得出：GOLPH3陽性表達與E-cadherin表達呈負相關，與vimentin表達呈正相關(P<0.05)，見表5。

表5 非小細胞肺癌患者GOLPH3與E-cadherin和vimentin表達相關性分析

3 討論

肺癌是全球較為常見的惡性腫瘤，其中更是以非小細胞肺癌較為多見，且發病率和死亡率正逐年升高[8]。雖然近些年對于肺癌的治療已取得了較大的進步，但患者的生存率仍不高，且術后容易出現轉移[9-10]。上皮間質轉化是完全分化的上皮細胞轉變的過程，主要以上皮細胞失去活性為特點，導致與周圍細胞接觸以及細胞的粘附力降低[11]。有研究發現，非小細胞肺癌的侵襲和轉移與上皮間質轉化存在一定相關性[12]。因此本研究選取我院收治的42例非小細胞肺癌患者臨床資料進行分析，以研究GOLPH3與非小細胞肺癌上皮間質轉化的相關性。

GOLPH3是一種全新致癌基因，負責囊泡轉運的腫瘤蛋白。與PI4-P相結合，能夠保持高爾基囊泡的轉運，以MY0184和肌動蛋白骨架連接能夠穩定高爾基形態以及轉運，同時在囊泡運輸、蛋白糖基化以及線粒體功能中也發揮重要的作用[13]。GOLPH3能夠以mTORC1和mTORC2對mTOR信號通路進行刺激，引起細胞內部S6K1升高，促進了蛋白合成、細胞的分裂，對細胞的凋亡進行抑制[14-15]。本研究發現，患者肺癌組織GOLPH3陽性率均顯著高于癌旁正常組織。這說明，GOLPH3在非小細胞肺癌的發生發展中發揮著重要的作用。非小細胞肺癌難以治療的原因也是因為容易出現轉移和侵襲。上皮間質轉化不僅能夠增強腫瘤細胞自身的侵襲能力，還能夠對癌細胞所處患者進行改變，誘發癌細胞躲避機體免疫的監視，進而增強侵襲能力[16-17]。本研究發現，患者肺癌組織vimentin陽性率均顯著高于癌旁正常組織，E-cadherin陽性率顯著低于癌旁正常組織。說明，上皮間質轉化在非小細胞肺癌中發揮著重要的作用。本研究發現，不同分化程度、是否存在淋巴結轉移以及不同TNM分期患者GOLPH3陽性表達率差異具有統計學意義。這是因為，分化程度較高、存在淋巴結轉移以及TNM分期較高的患者往往存在明顯的癌細胞擴散以及增殖，其中GOLPHS的突變都能夠引起正常調控細胞增殖途徑出現異變，導致細胞增生異常進而促進腫瘤的發生和發展[18-19]。上皮間質轉化能夠賦予肺癌細胞干細胞特性，增強肺癌干細胞的生成[20]。本研究發現，不同分化程度、是否存在淋巴結轉移以及不同TNM分期患者E-cadherin和vimentin陽性表達率差異具有統計學意義。這是因為肺癌干細胞在上皮表型以及間質表型的轉換能力，這也是肺癌轉移和增生的基礎。本研究發現，GOLPH3陽性表達率與E-cadherin表達呈負相關，與vimentin呈正相關。這說明，GOLPH3與非小細胞肺癌上皮間質轉化存在明顯的相關性。本研究發現，GOLPH3與患者上皮間質轉化存在關系，能夠作為患者預后的評估指標，臨床價值較高。但本次研究可能因為病例收集較少等因素，導致實驗存在一定偏差。

綜上所述，GOLPH3與非小細胞肺癌患者E-cadherin表達呈負相關，與vimentin呈正相關，與患者上皮間質轉化存在明顯的相關性。