孕婦血清IgG型抗A(B)抗體效價(jià)聯(lián)合新生兒網(wǎng)織紅細(xì)胞水平在新生兒溶血病診斷中的應(yīng)用價(jià)值

黃 進(jìn)，吳海燕，汪光斌

新生兒溶血病(hemolytic disease of newborn， HDN)是因母體與新生兒血型不合導(dǎo)致的溶血，母體產(chǎn)生抗體后通過胎盤輸入胎兒體內(nèi)，引起胎兒紅細(xì)胞破壞，以ABO溶血較為常見。HDN可引起患兒貧血、黃疸、肝脾大、水腫等癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥或死亡[1]。目前HDN的常規(guī)治療以補(bǔ)液、藍(lán)光照射、靜脈注射免疫球蛋白等為主，嚴(yán)重者需要接受換血治療[2]。早期預(yù)測(cè)HDN的發(fā)生有助于臨床早期給予積極的治療，對(duì)患兒預(yù)后有益。血清IgG抗A(B)抗體是紅細(xì)胞膜上抗原簇誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體，可形成免疫性復(fù)合物，誘導(dǎo)紅細(xì)胞膜的破壞、溶解，與HDN的發(fā)生密切相關(guān)[3]。網(wǎng)織紅細(xì)胞是外周血中尚未成熟的紅細(xì)胞，溶血發(fā)生時(shí)，骨髓造血細(xì)胞代償性增生，導(dǎo)致血液循環(huán)中網(wǎng)織紅細(xì)胞增多，因此在HDN早期網(wǎng)織紅細(xì)胞水平會(huì)升高[4]。既往研究只針對(duì)單一指標(biāo)，而二者聯(lián)合檢測(cè)的研究報(bào)道較少，故本研究探討孕婦血清IgG型抗A(B)抗體效價(jià)聯(lián)合新生兒網(wǎng)織紅細(xì)胞水平檢測(cè)在HDN診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2021年1月—2022年1月在我院進(jìn)行全程產(chǎn)檢的O型血孕婦270例，年齡21～40(29.92±4.11)歲；胎齡37～41(39.20±1.21)周；配偶血型A型105例，B型91例，AB型74例。納入標(biāo)準(zhǔn)：?jiǎn)翁ト焉铮慌渑糀BO血型為A型、B型或AB型；夫妻Rh血型均為陽(yáng)性；孕婦無輸血史；孕婦及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：有妊娠高血壓綜合征等并發(fā)癥；合并有肝腎功能障礙、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病等嚴(yán)重疾病。

1.2IgG型抗A(B)抗體效價(jià)檢查 采用微柱凝膠法檢測(cè)孕婦IgG型抗A(B)抗體效價(jià)。入院后當(dāng)日或次日清晨抽取孕婦空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血標(biāo)本3 ml，置于EDTA抗凝管，離心處理，轉(zhuǎn)速3000 r/min，離心10 min，取上層血清50 μl，加入巰基乙醇50 μl。充分混勻后密封放置于37 ℃水浴，充分破壞IgM抗體。吸取經(jīng)2-ME處理后的血清，加入生理鹽水稀釋，稀釋度分別為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024、1∶2048，采用微柱凝膠抗人球蛋白檢測(cè)卡檢測(cè)IgG抗體效價(jià)，采用DiaMed公司的空白微柱，將生理鹽水稀釋的血清加入微柱孔，25 ℃孵育30 min，離心、洗滌，加入50 μl MASPAT抗人IgG，加入指示細(xì)胞，震蕩、離心后觀察結(jié)果。將效價(jià)≥1∶64定義為陽(yáng)性。

1.3網(wǎng)織紅細(xì)胞水平檢查 于新生兒娩出后次日采集新生兒末梢血標(biāo)本檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞水平，取試管加入堿性染料2滴，加入新鮮全血2滴混勻，室溫放置15 min，取染色血標(biāo)本1滴制成薄血涂片，自然干燥后于顯微鏡低倍鏡下選擇紅細(xì)胞分布均勻、著色好的部位。將Miller窺盤放置于目鏡內(nèi)，在Miller窺盤的小格A內(nèi)計(jì)數(shù)成熟紅細(xì)胞，在大格B內(nèi)計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞。

2 結(jié)果

2.1HDN發(fā)生情況 270例新生兒中，最終確診HDN 22例，發(fā)生率為8.15%。HDN組和非HDN組產(chǎn)婦年齡、新生兒胎齡、性別、出生體質(zhì)量、出生時(shí)C反應(yīng)蛋白、白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、總膽紅素、血紅蛋白水平等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；HDN組出生時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞水平高于非HDN組(P<0.01)。見表1。

表1 發(fā)生和未發(fā)生HDN新生兒一般資料比較

2.2不同血清IgG型抗A(B)抗體效價(jià)產(chǎn)婦HDN發(fā)生情況比較 IgG型抗A(B)抗體效價(jià)<1∶64、1∶64、1∶128、≥1∶256的產(chǎn)婦HDN發(fā)生率分別為2.22%(4/180)、12.50%(7/56)、27.27%(6/22)、41.67%(5/12)。IgG型抗A(B)抗體效價(jià)<1∶64的產(chǎn)婦HDN發(fā)生率低于IgG型抗A(B)抗體效價(jià)1∶64、1∶128和≥1∶256的產(chǎn)婦(P<0.05)；IgG型抗A(B)抗體效價(jià)1∶64、1∶128和≥1∶256的產(chǎn)婦HDN發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3IgG型抗A(B)抗體陽(yáng)性的影響因素 經(jīng)產(chǎn)婦IgG型抗A(B)抗體陽(yáng)性率高于初產(chǎn)婦(P<0.05)；年齡≥30歲孕婦IgG型抗A(B)抗體陽(yáng)性率高于年齡<30歲孕婦(P<0.01)；不同體質(zhì)量指數(shù)、母-父血型組孕婦IgG型抗A(B)抗體陽(yáng)性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 孕婦IgG型抗A(B)抗體陽(yáng)性的影響因素[例(%)]

2.4HDN發(fā)生的影響因素 不同產(chǎn)次、年齡、體質(zhì)量指數(shù)及母-父血型產(chǎn)婦HDN發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 HDN發(fā)生的影響因素分析[例(%)]

2.5IgG型抗A(B)抗體效價(jià)聯(lián)合網(wǎng)織紅細(xì)胞水平預(yù)測(cè)HDN的價(jià)值 IgG型抗A(B)抗體效價(jià)聯(lián)合網(wǎng)織紅細(xì)胞水平預(yù)測(cè)HDN的ROC曲線下面積為0.981，明顯大于二者單獨(dú)預(yù)測(cè)的0.764[IgG型抗A(B)抗體效價(jià)]和0.876(網(wǎng)織紅細(xì)胞水平)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其預(yù)測(cè)HDN的敏感度和特異度分別為91.00%和96.00%，見圖1。

圖1 IgG型抗A(B)抗體效價(jià)聯(lián)合網(wǎng)織紅細(xì)胞水平預(yù)測(cè)HDN價(jià)值的ROC曲線

3 討論

HDN屬于同種免疫性溶血性疾病，輕癥者癥狀不明顯或僅出現(xiàn)黃疸，嚴(yán)重者可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)永久性損傷[5]。分析原因，由于溶血發(fā)生后過量的紅細(xì)胞被破壞，產(chǎn)生大量的膽紅素等代謝產(chǎn)物，而新生兒肝臟功能尚不成熟，不能及時(shí)將代謝產(chǎn)物排出體外，可引起高膽紅素血癥。而血液中膽紅素水平過高時(shí)，會(huì)沉積在腦干、基底核等中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要部位，損傷神經(jīng)細(xì)胞[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，270例O型血孕婦中確診HDN 22例，發(fā)生率為8.15%。提示HDN在臨床中比較常見。

HDN的發(fā)生機(jī)制與抗原抗體反應(yīng)有關(guān)，胎兒從父體得到母體沒有的紅細(xì)胞抗原，經(jīng)胎盤進(jìn)入母體血液循環(huán)，誘導(dǎo)母體產(chǎn)生IgG類抗體。IgG類抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，引起胎兒紅細(xì)胞發(fā)生抗原抗體反應(yīng)而遭到破壞[7]。鄧虹艷等[8]研究認(rèn)為，隨著孕婦血清IgG抗A(B)抗體效價(jià)的升高，HDN的發(fā)生率隨之增高，本研究結(jié)果與其報(bào)道一致。有報(bào)道認(rèn)為，與初產(chǎn)婦相比，經(jīng)產(chǎn)婦HDN的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)更高[9]。本研究還發(fā)現(xiàn)，IgG型抗A(B)抗體陰性孕婦HDN發(fā)生率明顯低于IgG型抗A(B)抗體陽(yáng)性孕婦。經(jīng)產(chǎn)婦IgG型抗A(B)抗體陽(yáng)性率明顯高于初產(chǎn)婦，年齡≥30歲孕婦IgG型抗A(B)抗體陽(yáng)性率明顯高于年齡<30歲孕婦。提示妊娠次數(shù)、孕婦年齡與血清IgG抗A(B)抗體效價(jià)具有一定的相關(guān)性，也可能與HDN的發(fā)生有關(guān)。這可能是由于每次妊娠結(jié)束，胎盤絨毛膜受損，胎兒紅細(xì)胞進(jìn)入母體血液循環(huán)中，并刺激其產(chǎn)生抗體，而多次妊娠可受到抗原的反復(fù)刺激，導(dǎo)致IgG類抗體水平較高，引起胎兒紅細(xì)胞抗原抗體反應(yīng)更加嚴(yán)重[10-11]。對(duì)于本研究中得出的高齡產(chǎn)婦血清IgG抗A(B)抗體陽(yáng)性率更高的結(jié)果，推測(cè)可能與高齡產(chǎn)婦機(jī)體免疫功能較差、接觸抗原的機(jī)會(huì)較多有關(guān)，但目前有關(guān)年齡對(duì)血清IgG型抗A(B)抗體陽(yáng)性率影響的相關(guān)報(bào)道較少，確切機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究闡釋。

網(wǎng)織紅細(xì)胞是反映骨髓造血能力的常規(guī)指標(biāo)，臨床常用于貧血、骨髓抑制后造血功能的評(píng)估[12]。有研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)HDN發(fā)生時(shí)，其網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有所升高[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，HDN患兒出生時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞水平明顯高于非HDN患兒。這是由于溶血發(fā)生時(shí)，可導(dǎo)致骨髓造血細(xì)胞代償性增生，未成熟細(xì)胞參與血液循環(huán)，從而引起血中網(wǎng)織紅細(xì)胞水平升高[14-15]。

本研究采用ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，IgG型抗A(B)抗體效價(jià)聯(lián)合網(wǎng)織紅細(xì)胞水平預(yù)測(cè)HDN的ROC曲線下面積高于二者單獨(dú)預(yù)測(cè)，其預(yù)測(cè)HDN的敏感度和特異度分別為91.00%和96.00%。提示IgG型抗A(B)抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)聯(lián)合新生兒網(wǎng)織紅細(xì)胞水平檢測(cè)有助于預(yù)測(cè)HDN，具有較高的敏感度和特異度。在今后的臨床工作中，應(yīng)對(duì)O型血孕婦進(jìn)行IgG型抗A(B)抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)，并對(duì)新生兒進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞水平檢測(cè)，以便及早發(fā)現(xiàn)HDN風(fēng)險(xiǎn)，并及時(shí)處理。

綜上所述，IgG型抗A(B)抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)聯(lián)合新生兒網(wǎng)織紅細(xì)胞水平檢測(cè)有助于預(yù)測(cè)HDN，同時(shí)IgG型抗A(B)抗體效價(jià)與孕婦年齡、產(chǎn)次有關(guān)。