自身免疫性早發性卵巢功能不全患者血清免疫指標分析

陳依柔， 王袁， 謝嘉欣， 楊雨濤， 付霞霏

(南方醫科大學珠江醫院婦產科，廣東省廣州市510282)

早發性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)指女性40歲前出現月經紊亂，伴有內分泌功能異常及圍絕經期癥狀，可影響女性妊娠甚至導致不孕。POI病因包括遺傳、免疫、醫源性因素及代謝、環境等因素，其發病機制尚未明確，約4%～30%POI是由自身免疫引起[1]，自身免疫紊亂引發卵泡缺失，或誘發卵泡對卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)反應降低從而導致卵巢功能下降[2]。有研究發現，POI患者中抗核抗體(antinuclear antibody,ANA)陽性率和卵巢功能下降者的甲狀腺過氧化物酶抗體(antithyroid peroxidase antibody,TPOAb)陽性率均升高，POI患者CD3+HLA-DR細胞水平與自身免疫功能密切相關[3-5]。因自身免疫性POI發病機制復雜，導致缺乏診斷自身免疫性POI特異免疫指標，既往研究中并無公認的統一診斷標志物。本研究分析自身免疫性POI患者血清多種相關免疫指標水平，以期找出較為特異的免疫性指標，為自身免疫性POI臨床診斷和治療提供參考。

1 資料和方法

1.1 研究對象

選擇2019年12月—2021年12月本院門診自身免疫性POI患者46例為POI組，同期門診<40歲健康女性46例為正常組。POI納入標準：①年齡<40歲；②閉經或月經稀發≥4個月；③連續2次檢查(間隔4周)FSH>25 IU/L；④伴有自身免疫性疾病和(或)自身免疫性指標陽性。排除標準：染色體異常；盆腹腔手術病史；惡性腫瘤病史；妊娠或哺乳期；嚴重內外科疾病病史；處于急性感染或慢性炎癥期。所有研究對象均知情同意，本研究已通過本院倫理審查委員會審查。與正常組比較，POI組孕次、產次、經期及月經周期減少(P<0.05)，兩組BMI和年齡差異無顯著性(P>0.05；表1)。

表1 兩組一般資料的比較(n=46)

1.2 血清免疫指標的檢測

POI組于診斷當天，正常組于月經周期第2～3天清晨空腹采集外周靜脈血量，離心分離血清。使用羅式全自動電化學發光分析儀和E602電化學發光免疫分析儀，采用化學發光法檢測性激素雌二醇(estradiol，E2)、FSH、黃體生成素(luteinising hormone，LH)、抗苗勒氏管激素(anti-müllerian hormone，AMH)；甲狀腺功能游離三碘甲狀腺原氨酸(free triiodothyronine，fT3)、游離甲狀腺素(free thyroxine，fT4)、促甲狀腺激素(thyroid stimulating hormone，TSH)、促甲狀腺素受體抗體(thyrotropin receptor antibody，TRAb)、抗甲狀腺球蛋白抗體(thyroglobulin antibody，TGAb)、甲狀腺過氧化物酶抗體(antithyroid peroxidase antibody，TPOAb)。使用BN ProSpec全自動特定蛋白分析儀，采用免疫散射比濁法檢測體液免疫指標κ輕鏈(kappa)、λ輕鏈(lambda)、免疫球蛋白G(immunoglobulinG，IgG)、IgA、IgM、IgE、補體3(complement3，C3)、C4。使用重慶科斯邁生物科技有限公司SMART6500型全自動化學發光測定儀，采用化學發光法檢測自身抗體抗核抗體(antinuclear antibody，ANA)、抗雙鏈DNA抗體(anti-double strand dNA，ds-DNA)；采用ELISA法檢測抗心磷脂IgA抗體(IgA anticardiolipin，ACA-IgA)、ACA-IgM、ACA-IgG、抗β2糖蛋白1 IgM抗體(IgM anti-β2 glycoprotein I antibody，β2GP1-IgM)、β2GP1-IgG。以上所有項目均由本院檢驗科完成。

1.3 統計學分析

2 結 果

2.1 兩組性激素水平的比較

與正常組比較，POI組FSH、LH水平升高，E2、AMH水平降低(P<0.05；表2)。

表2 兩組性激素水平的比較(n=46)

2.2 兩組體液免疫指標的比較

與正常組比較，POI組κ輕鏈、λ輕鏈、IgG、IgM、IgE升高，C4降低，且上述指標陽性率兩組間比較差異有顯著性(P<0.05；表3)。

表3 兩組體液免疫指標水平、陽性率的比較(n=46)

2.3 兩組抗心磷脂綜合征指標的比較

與正常組比較，POI組ACA-IgA、ACA-IgG、β2GP1-IgM水平及陽性率升高(P<0.05；表4)。

表4 兩組抗心磷脂綜合征指標水平、陽性率的比較(n=46)

2.4 兩組甲狀腺功能指標的比較

與正常組比較，POI組fT3、fT4、TRAb、TPOAb水平及陽性率升高(P<0.05；表5)。

表5 兩組甲狀腺功能指標水平、陽性率的比較(n=46)

2.5 兩組自身免疫指標的比較

POI組自身抗體ANA的陽性率為21.7%，與正常組(4.3%)比較差異有顯著性(P<0.05)，dsDNA陽性率(10.0%)與正常組(4.3%)比較差異無顯著性(P>0.05)。

2.6 POI組各類免疫指標陽性率的比較

POI組內與自身免疫指標陽性率比較，體液免疫指標陽性率和甲狀腺功能指標陽性率差異均有顯著性(P<0.007)，其余指標陽性率間比較差異均無顯著性(P>0.007；圖1)。

圖1 POI組各類指標陽性率的比較(n=46)

3 討 論

機體的免疫系統是一個多方面相互作用的復雜系統，免疫因素是導致機體出現POI的一個重要因素。免疫反應會導致血清游離免疫球蛋白輕鏈數量異常，因此血清游離輕鏈可用于監測機體免疫反應活動[6]。IgG、IgM、IgE為機體重要的免疫分子，其水平可間接反映機體免疫應答情況[7]。體液免疫增強，免疫復合物形成增多，連接免疫反應的補體C4大量消耗導致其水平降低。本研究發現，POI患者Ig輕鏈、Ig水平升高，C4水平降低，其陽性率也升高，提示POI患者體液免疫反應活動增強。ANA是自身真核細胞中所有抗原成分自身抗體的總稱，血清ANA高滴度陽性提示自身免疫性疾病，ANA與POI關系密切[8]，本研究發現，POI患者自身抗體ANA陽性率升高，與既往研究結果一致。

抗心磷脂抗體(ACA)是一種以血小板和內皮細胞膜上的心磷脂為靶抗原的自身抗體,常見于各種免疫性疾病，可與卵巢血管內皮相互作用使卵巢供血減少，從而影響卵細胞的生長發育。本研究發現，POI患者血清ACA-IgA、ACA-IgG水平及陽性率均明顯升高，與既往研究結果一致[9]。抗β2糖蛋白1是一類抗磷脂抗體，是自身免疫性疾病的重要標志物，通過與多種細胞表面受體結合介導細胞炎癥反應、內皮細胞損傷、凝血功能異常等病理改變[10]。本研究顯示POI患者中血清抗心磷脂綜合征指標中的抗β2糖蛋白IgM水平及陽性率顯著升高，表明抗β2糖蛋白IgM與POI患者中存在的免疫失調有一定關系。

甲狀腺是人體重要的免疫器官，甲狀腺激素可促進FSH誘導顆粒細胞表面LH/hCG受體的生成及孕酮分泌，甲狀腺激素分泌減少可使卵泡質量明顯降低[11]。既往研究發現，甲狀腺自身免疫患者與免疫性卵巢功能減退患者在組織學上均表現為炎癥細胞浸潤及組織損傷，卵巢功能減退患者中亦可以檢測到甲狀腺自身抗體的存在[12]。有研究提出，下丘腦-垂體-甲狀腺軸可直接影響下丘腦-垂體-卵巢軸的功能，兩軸間主要由卵巢中存在的多種甲狀腺激素受體介導[13]。本研究發現，POI患者游離甲狀腺激素及甲狀腺自身抗體水平和陽性率均升高，提示甲狀腺功能及其抗體指標與POI患者免疫功能密切相關。

IgA與相關組織抗原結合，抑制相關抗原所誘導的炎癥或自身免疫反應。本研究發現，POI患者免疫水平升高，但起抑制作用的IgA未下降，考慮可能因POI患者免疫反應增強，而不是負向調控因子減少所致。本研究中兩組補體3水平無統計學意義，考慮因為補體C3是作為補體系統激活過程的急性反應蛋白從而啟動炎癥反應，而入組人員均排除急性炎癥疾病。POI患者可伴發自身免疫性疾病系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)[14]，支持了POI和SLE疾病之間的聯系。抗dsDNA抗體在SLE患者血清中早期出現，且其滴度高低與疾病的活動性及預后明確相關[15]，但本研究中POI組dsDNA與正常組比較差異無統計學意義，考慮與本研究樣本量較少、樣本偏差有一定關系。

綜上，本研究發現，自身免疫性POI患者體液免疫指標、自身抗體指標、抗心磷脂綜合征指標、甲狀腺功能指標均存在異常表達，其中體液免疫指標和甲狀腺功能指標更容易發生異常。本研究為單中心回顧性研究，樣本量較小，未來需擴大樣本量，納入更多指標進行分析，以期為POI患者早期診斷和治療提供一定的參考。