64例淋巴瘤細胞白血病患者的病理免疫組化及骨髓流式免疫分型分析及臨床意義

宋麗娜 王 沖 洪英霞 王 瑞

淋巴瘤指起源于淋巴結和淋巴組織的惡性腫瘤，包括非霍奇金和霍奇金淋巴瘤，以非霍奇金淋巴瘤較為常見，約占90%左右，無痛性、進行性淋巴結轉移為主要特征，部分高侵襲性淋巴瘤可侵犯骨髓，甚至發展為淋巴瘤細胞白血病(LCL)[1-2]。據相關資料顯示，在所有非霍奇金淋巴瘤患者中，LCL約占15%～63%[3]。LCL是指淋巴樣細胞侵入骨髓，致使外周和骨髓血發生繼發性的改變，并伴有正常血細胞的減少，預后極差。臨床應對加強對LCL的認識，從而為臨床治療及預后評估提供指導。組織病理學一直被認為是診斷該病的金標準，但對于侵犯骨髓而細胞形態學不典型或骨髓已經受累的患者，病理組織學檢查則存在一定的局限性[4]。隨著近年來診療水平的發展，流式細胞術(FC)已逐漸被應用于淋巴瘤檢測中，與組織病理學檢查相結合可在一定程度上提高診斷價值。鑒于此，本研究分析LCL患者病例免疫組化及骨髓流式免疫結果及臨床指導意義。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入我院2014年6月至2016年10月收治的LCL患者64例，其中男性38例，女性26例；年齡20～68歲，平均年齡(42.34±5.06)歲；體重指數(BMI )18～30 kg/m2，平均BMI(23.87±1.08)kg/m2；25例T淋巴細胞型，39例B淋巴細胞型；文化程度：16例初中及以下，34例高中，14例大專及以上。納入標準：①均符合LCL的診斷標準；②臨床資料完整；③語言、認知功能正常；④能配合完成各項檢查；⑤患者對研究知悉，資源簽訂知情同意書。排除標準：①合并其他惡性腫瘤者；②伴有肝腎功能損壞者；③存有精神疾病者。

1.2 方法

1.2.1 病理免疫組化 取淋巴結或淋巴組織活檢標本，依次采用75%、80%、95%×2、100%×3酒精及二甲苯處理組織，并將其放入60℃恒溫烤箱中過夜，其中內源性過氧化物酶經甲醇-雙氧水處理，之后使用PBS液和蒸餾水清晰，再對抗原進行修復，將一抗和二抗滴入其中，室溫下孵育30min后加入顯色劑，復染(蘇木素)，依次采用75%、80%、95%×2、100%×4酒精及二甲苯處理，分析CD3、TDT、CD5、CD7、CD10、CD20、CD21、CD34、CD43、CD79a、LCA、BCL-2、BCL-6、PAX-5抗原的表達。檢測中所使用的病理免疫組化儀器(benchMark-ULTRA)及試劑盒均購自美國Ventana公司。

1.2.2 骨髓流式免疫 抽取骨髓標本1～2 ml，肝素抗凝，經淋巴細胞液分離獲取單個核細胞，調整細胞數為(0.5～1.0)×106/ml，然后將其溶于磷酸鹽緩沖液中，以CD45/SSC設門分出成熟細胞群和幼稚細胞群進行檢測，分析CD2、CD3、CD5、CD7、CD11c、CD19、CD20、CD22、CD23、CD79a、CD38、FMC-7、HLA-DR、sKappa抗原的表達。檢測中所使用的流式細胞儀(FC500)與試劑盒均購自美國貝克曼公司。

1.3 觀察指標

分析免疫組化及骨髓流式免疫分型各抗原表達情況，同時進行隨訪，分析LCL患者生存周期特點。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 免疫組化及骨髓流式免疫分型結果

免疫組化及骨髓流式免疫分型均顯示，25例T淋巴細胞型，39例B淋巴細胞型。

2.2 免疫組化各抗原表達情況

T淋巴細胞型表達率最高的抗原為CD3，占比84.00%，其次為TDT，占比64.00%；B淋巴細胞型表達率最高的抗原為CD20，占比100%，其次為CD79a，占比87.18%，見表1。

2.3 骨髓流式免疫各抗原表達情況

T淋巴細胞型表達率最高的抗原為CD7，占比100.00%，其次為CD3，占比60.00%；B淋巴細胞型表達率最高的抗原為CD19，占比94.87%，其次為CD20，占比56.41%。見表2。

2.4 LCL患者生存周期特點

25例T淋巴細胞型患者生存周期為1～40個月不等，中位生存周期為19.78個月，伴CD3表達缺失中位生存期為12.98個月，不伴CD3表達缺失中位生存期為9.55個月。39例B淋巴細胞型患者生存周期為3～60個月不等，中位生存周期為27.75個月，伴CD20表達缺失中位生存期為7.16個月，不伴CD20表達缺失中位生存期為32.11個月。

3 討論

LCL是血液系統常見的惡性腫瘤之一，其發病率在全球范圍內呈上升趨勢。LCL是一種高度異質性疾病，故易漏診、誤診，延誤治療時間，影響患者預后。隨著白細胞分化抗原的相繼問世，淋巴細胞的起源、發育過程及復雜的生物學特征逐漸被認識[5]。病理診斷是確診LCL的主要手段，病理免疫組化是病理診斷中不可或缺的手段，其通過抗原-抗體反應，可與組織結構、細胞形態學相聯系，但對于臨床高度懷疑淋巴瘤，該檢查手段并未檢測出異常反應性淋巴結細胞使，則檢測難度較大[6-7]。FC目前已被廣泛于血液疾病的診斷中，可多參數、快速地對大量細胞進行測定和分析，能夠有效彌補病理免疫組化檢查的不足，對于淋巴瘤免疫分型及各種細胞比例具有較高敏感性，但檢測中經常出現假陽性結果[8]。

病理免疫組化及FC兩種檢測方法是目前LCL的主要檢測手段，存在各自的優點和缺點，尋找準確、快速的檢測手段十分重要。本研究結果顯示，免疫組化及骨髓流式免疫分型均顯示，25例T淋巴細胞型，39例B淋巴細胞型；免疫組化各抗原表達結果顯示，T淋巴細胞型表達率最高的抗原為CD7，其次為CD3；B淋巴細胞型表達率最高的抗原為CD19，其次為CD20，骨髓流式免疫各抗原表達結果顯示，T淋巴細胞型表達率最高的抗原為CD7，其次為CD3；B淋巴細胞型表達率最高的抗原為CD19，其次為CD20。表明LCL患者病理免疫組化及骨髓流式免疫分型結果一致，但仍有部分抗體結果存在差異，且在腫瘤發展過程中存在部分抗原丟失。非霍奇金淋巴瘤按照腫瘤細胞分化不同，可分為NK/T細胞型NHL和B細胞型NHL，其中15%起源于NK/T細胞系，85%起源于B淋巴細胞系[9]。相關研究顯示，與B細胞淋巴瘤相比，T淋巴細胞瘤發生骨髓侵犯可能性越大[10]。病理免疫組化以免疫學為基本原理，通過化學反應使顯色劑顯色，從而確定體內抗原位置、含量及性質[11-12]。是鑒別和診斷腫瘤的主要手段，準確率較高，并有助于確定原發性惡性腫瘤部位。各種亞型的淋巴瘤均是獨立的疾病實體，且不同病理亞型的淋巴瘤治療方法亦不同，故病理免疫組化結果對指導臨床疾病治療具有重要的意義。FC對于無法獲取淋巴結病理但骨髓已經受累的的淋巴瘤患者具有的一定的輔助診斷價值，且對血液疾病的診斷、預后應用價值較高，已成為淋巴瘤分型的常規手段之一[13-14]。本研究通過對LCL患者生存周期進行分析，結果顯示，25例T淋巴細胞型患者中位生存周期為19.78個月，伴CD3表達缺失中位生存期為12.98個月，不伴CD3表達缺失中位生存期為9.55個月；39例B淋巴細胞型患者中位生存周期為27.75個月，伴CD20表達缺失中位生存期為7.16個月，不伴CD20表達缺失中位生存期為32.11個月，說明T淋巴細胞患者生存周期低于B淋巴細胞患者，分析原因主要是T淋巴細胞惡性程度更高。且在B淋巴細胞瘤患者中，CD20缺失生存周期顯著的降低。有研究顯示，對于CD20缺失的淋巴瘤細胞惡性程度更高[15]。故CD20表達對于評估淋巴瘤患者預后具有重要的意義。病理免疫組化及骨髓流式免疫在LCL中有著各自的優勢和局限性，兩者相互彌補對于提高淋巴瘤診斷率具有重要的意義。但本研究樣本納入量偏少，今后應擴大樣本量，進一步研究，以為臨床診斷、治療提供可靠的指導的意義。

綜上所述，LCL患者病理免疫組化及骨髓流式免疫分型結果一致，兩者相互補充，不可替代，對于臨床治療有一定的指導意義，且T淋巴細胞患者腫瘤惡性程度高，生存周期較B淋巴細胞患者低，腫瘤發展過程中伴隨部分抗原丟失，對于評估預后具有重要價值。