自身免疫性疾病患者ANA和ANAs聯合檢測的相關性分析

侯素君，尹盟盟，別海文，戰祥彩，張慶蕓

(日照市中醫醫院檢驗科，山東 日照 276800)

自身免疫性疾病是由多種因素引起機體免疫功能紊亂，產生自身免疫應答而造成多系統損害的疾病[1-3]。自身免疫性疾病的診斷標準之一是檢出疾病特異性或相關性自身抗體，自身抗體是指針對自身組織、器官、細胞、細胞亞結構、體內蛋白分子、體內核酸等所有自身抗原的抗體總稱，其本質為機體B細胞分泌的免疫球蛋白[3-4]。隨著自身免疫學科的發展及檢驗技術的逐漸普及，自身抗體已成為大多數醫療機構的常規檢測項目，其中間接免疫熒光法(IIF)檢測抗核抗體(ANA)與免疫印跡法(LIA)檢測抗核抗體譜(ANAs)是臨床開展最為普遍的2類項目。本研究擬對2018-2021年在本院就診并進行ANA與ANAs檢測的患者檢測情況進行回顧性分析，探討兩者聯合檢測在自身免疫性疾病的診斷價值，滿足臨床早期診斷及早期干預的需求。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2018-2021年在本院就診并進行自身抗體檢測的患者共2 495例，其中男950例，女1 545例，年齡13～93歲，平均(53.0±0.5)歲。

1.2方法

1.2.1試劑與儀器 ANA采用IIF法檢測，使用蘇州浩歐博生物醫藥有限公司試劑盒；ANAs采用LIA法檢測，使用蘇州浩歐博生物醫藥有限公司ANAs(IgG)檢測試劑盒，靶抗原包括抗核糖核蛋白、抗SM抗體(SM)、抗干燥綜合征A抗體、抗Ro52抗體、抗干燥綜合征B抗體、抗硬皮病70抗體、抗多發性肌炎抗體、抗Jo-1抗體、抗著絲點B蛋白抗體、抗增殖細胞核抗原抗體、抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體、抗核糖體P蛋白抗體和抗線粒體M2抗體共15項。 熒光顯微鏡購自廣州明美公司MF43，免疫印跡儀使用BIotray 866自動蛋白印跡儀。

1.2.2檢驗方法 采集清晨空腹靜脈血3～4 mL，3 000 r/min離心5 min，分離血清，不能及時檢測的可2～8 ℃環境下保存1周。IIF檢測ANA，熒光顯微鏡下抗體效價大于或等于80判定為ANA-IIF檢測陽性。LIA檢測ANAs，只要一種抗體陽性，就判定為ANAs-LIA檢測陽性。總符合率=100%×[(真陽性+真陰性)/總標本數]；靈敏度=100%×[真陽性/(真陽性+真陰性)]；特異度=100%×[真陰性/(真陰性+假陽性)]。

1.3統計學處理 采用SPSS21.0統計軟件進行數據分析。計數資料以率或構成比表示，采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1患者自身抗體陽性率分析 在2 495例患者中女1 545例，男950例；陽性624例，陽性率為25.01%(624/2 495)。女性陽性率為32.17%(497/1 545),男性陽性率為13.37%(127/950)，女性明顯高于男性，差異有統計學意義(χ2=110.86，P<0.05)。

2.2IIF-ANA與LIA-ANAs 2種方法的結果分析 2 495份標本中，ANA(+)519例，ANA(-)1 976例，ANA陽性率為20.80%(519/2 495)，ANAs(+)404例，ANAs(-)2 091例，ANAs陽性率為16.19%(404/2 495),兩者之間差異有統計學意義(χ2=17.58，P<0.05)。其中ANA(+)/ANAs(+)323例，占(12.95%)，ANA(+)/ANAs(-)196例，占(7.86%),ANA(-)/ANAs(+)81例，占3.25%，ANA(-)/ANAs(-)1 895例，占75.95%，以HEp-2細胞為抗原基質的IIF是ANA檢測的“金標準”[8]，LIA-ANAs法檢測自身抗體的符合率為75.31%，靈敏度為62.24%，特異度為95.90%。見表1。

表1 IIF-ANA與LIA-ANAs 2種方法檢測結果比較(n)

2.2ANA陽性標本核型分析 ANA核型中核顆粒型79.96%(415/519),著絲點型6.74%(35/519)，均質型5.59%(29/519)，混合型4.05%(21/519)，胞漿顆粒型2.31%(12/519)，核點型0.58%(3/519),核仁型0.39%(2/519),核膜型0.39%(2/519)。見圖1。

圖1 ANA陽性標本核型分析

2.3ANAs特異性抗體陽性率分析 ANAs陽性標本的15項特異性抗體中，抗Ro52抗體25.21%(214/849)，抗干燥綜合征-A抗體22.14%(188/849)，抗干燥綜合征-B抗體8.72%(74/849),抗核糖核蛋白8.36%(71/849),抗SM抗體7.89%(67/849)，抗雙鏈DNA抗體5.77%(49/849),抗線粒體M2抗體5.65%(48/849),抗著絲點B蛋白抗體5.54%(47/849),抗核糖體P蛋白抗體4.48%(38/849),抗硬皮病70抗體2.12%(18/849),抗多發性肌炎抗體2.12%(18/849),抗組蛋白抗體1.30%(11/849),抗Jo-1抗體0.59%(5/849)，抗核小體抗體0.12%(1/849)，抗增殖細胞核抗原抗體未檢出陽性。見圖2。

圖2 ANAs特異性抗體陽性率分析

3 討 論

ANA是以自身真核細胞成分作為靶抗原的一組自身抗體的總稱，泛指各種核成分的抗體，是一種廣泛存在的自身抗體[1,5-7]。2018年中國醫師協會風濕免疫科醫師分會自身抗體檢測專業委員會在《中華檢驗醫學雜志》上發表了中國ANA檢測共識，推薦以HEp-2為實驗機制的IIF法是進行ANA檢測的參考方法和首選方法，其針對的靶抗原包括細胞的全部成分，有高敏感度、方法簡易及覆蓋面廣等優點。LIA法檢測的是自身免疫性疾病相關的多種特異性抗體，具有特異性高、易操作、易自動化等優點。

本研究對2018-2021年在本院就診并進行自身抗體檢測的患者共2 495例進行回顧性分析，陽性率為25.01%，高于其他研究報道的18.74%[9]，但低于王琰[6]報道的34.65%，分析原因可能與不同地區環境因素、飲食結構等，不同地區研究對象的疾病構成不同；與不同儀器、不同試劑廠家、試劑質量等有關,試劑性能評價無可以溯源參比的國際組織，檢測結果通常會出現抗體滴度強弱不等；特別是熒光抗體檢測受人為因素影響更大，包括熒光顯微鏡的質量、技術人員的圖像認識、熒光強度的感知、視力的好壞等，缺乏統一判讀標準和標準化報告程序等[4，10]。女性陽性率為32.17%，男性為13.37%，女性明顯高于男性，與所有文獻[5-7]報道結果一致，分析其原因可能與免疫系統受雌激素、孕酮及睪酮等性激素影響有關。雌激素是體液免疫增強劑，而雄激素是天然的免疫抑制劑。因而女性的免疫反應強于男性，更容易患一些自身免疫性疾病[5，11]。

IIF-ANA與LIA-ANAs 2種方法的檢測結果顯示，兩者聯合檢測符合率為75.31%，ANA(+)/ANAs(-)196例，占7.86%,ANA(-)/ANAs(+)81例，占3.25%，ANA與ANAs靈敏度、特異度有差異，ANA的靈敏度明顯高于ANAs，但其特異度差，單獨檢測ANA，會有7.86% 的ANAs的漏檢；ANAs靈敏度差，但其特異度高，單獨檢測ANAs，會有3.25% 的ANA假陰性，容易導致部分患者漏診，兩者聯合檢測在自身免疫性疾病診斷中具有一定互補性，可減少漏診或誤診。

ANAs核型檢測結果顯示，抗Ro52抗體、抗干燥綜合征-A抗體、干燥綜合征-B抗體、抗核糖核蛋白、抗SM抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗線粒體M2抗體、抗著絲點B蛋白抗體陽性比率高。抗Ro52抗體陽性率最高，占比為25.21%。有文獻報道，抗Ro52抗體在其他自身免疫性疾病中也有表達，大約30%的系統性紅斑狼瘡(SLE)、20%的特發性炎癥性肌病、14%的免疫性肌炎中都可以檢測到抗Ro52抗體，因此抗Ro52抗體無疾病特異性，聯合抗干燥綜合征-A和抗干燥綜合征-B抗體，在干燥綜合征的診斷中有重要應用價值[12-13]。抗干燥綜合征-A和抗干燥綜合征-B抗體陽性患者其ANA熒光核型以核顆粒型為主，最常見于干燥綜合征 SLE，也可見于病毒性肝炎和酒精性肝病等，抗干燥綜合征-A抗體特見于新生兒SLE。抗干燥綜合征-B抗體幾乎僅見于SLE和干燥綜合征中，而在干燥綜合征中抗干燥綜合征-A和干燥綜合征-B常同時出現，是診斷干燥綜合征的標志性抗體，干燥綜合征-A靈敏度高，干燥綜合征-B特異度強[14]。抗核糖核蛋白、抗SM抗體陽性患者ANA熒光核型主要為核顆粒型。抗核糖核蛋白是混合結締組織病的特異性抗體，抗SM抗體是SLE的特異性抗體，本次研究抗SM抗體陽性率為7.89%，較楊麗紅等[7]報道的偏低。對于自身免疫性疾病診斷，抗SM抗體的陽性率與抗抗核糖核蛋白/SM抗體的陽性率存在一定的相關性。研究提示，抗抗核糖核蛋白/SM、抗SM和抗干燥綜合征-A的陽性率升高，可能存在一定的狼瘡性腎炎的風險，同時不同的患者抗抗核糖核蛋白/SM陽性率的升高，有利于自身免疫性疾病的鑒別診斷[7]。 抗雙鏈DNA抗體陽性患者ANA熒光核型主要為核均質型，在SLE檢測中意義較大，具有較高的特異性，抗雙鏈DNA與DNA結合后形成免疫復合物沉積在腎小球基底膜，也可直接作用于腎小球抗原造成SLE患者腎損害。隨著疾病活動的控制，抗雙鏈DNA滴度逐漸下降或消失。因而，抗雙鏈DNA抗體是SLE疾病診斷和治療監測的一個重要指標[5]。抗雙鏈DNA抗體診斷SLE特異度高，但靈敏度差，本研究抗雙鏈DNA抗體陽性率為5.77%，存在漏檢，所以抗雙鏈DNA陰性也不能排除SLE[15]。抗線粒體M2抗體主要表現為胞漿顆粒型熒光，抗線粒體M2抗體是原發性膽汁性膽管炎(PBC)的特異性抗體，90%患者為陽性，而且檢測到抗線粒體M2抗體抗體陽性往往早于臨床癥狀，對PBC患者的早期診斷十分重要[16]。抗著絲點B蛋白陽性患者ANA熒光核型主要為著絲點型，本研究抗著絲點B蛋白陽性率為5.54%(47/849)，較陳敏等[17]研究報道的2.54%偏高，熒光核型為著絲點型與抗著絲點B蛋白抗體陽性符合率達61.18%，同時著絲點型之外還存在其他ANA熒光模式，本研究核顆粒型也能表現出抗著絲點B蛋白抗體陽性，抗著絲點B蛋白抗體與著絲點核型模式對自身免疫性疾病的診斷具有重要意義[18]。抗核糖體P蛋白抗體主要表現為核顆粒型熒光，是SLE的高度特異性血清學標志[19]。抗硬皮病抗體和抗多發性肌炎抗體熒光核型主要為核仁型，抗硬皮病抗體常見于彌漫性進行性系統硬化病，抗多發性肌炎抗體以多發性肌炎和系統性硬化征多見[20]。 抗組蛋白抗體熒光核型主要是核均質型，主要見于藥物誘導狼瘡。抗Jo-1抗體主要表現為胞漿顆粒型熒光，是多發性肌炎、皮肌炎的特異性抗體，同時抗核糖核蛋白陽性者臨床上發現有雷諾綜合征表現[11,21]。 抗核小體抗體是SLE常見的自身抗體之一，SLE疾病活動期及SLE腎臟損害患者常呈陽性[17]。

綜上所述，自身免疫性疾病患者自身抗體陽性率女性高于男性；ANA核型中核顆粒型、著絲點型、均質型居多；ANAs以抗Ro52抗體、抗干燥綜合征A抗體、抗干燥綜合征-B抗體陽性率較高。ANA與ANAs靈敏度、特異度有差異，單獨檢測容易漏檢，兩者聯合檢測有助于臨床綜合判斷病情，減少對自身免疫性疾病患者的漏診和誤診。