膠乳免疫比濁法在奧氮平和喹硫平藥物濃度監測中的應用

金偉峰， 翁 穎， 李 萍， 陳姝子， 陳 慶， 孫佳琪， 李振華， 方 偉， 林 萍

[1.上海交通大學醫學院附屬精神衛生中心檢驗科，上海 200030；2. 復星診斷科技（上海）有限公司，上海 200444]

奧氮平和喹硫平都是第2代非典型抗精神病藥物，具有療效好、不良反應小、不會引起明顯的錐體外系副反應等優點[1]，近年來已廣泛應用于臨床。有研究結果顯示，奧氮平血藥個體差異較大，患者服用奧氮平治療后藥物劑量和血藥濃度呈正相關，臨床療效和毒副反應與每日劑量、血藥濃度等均有關[2]。段迪等[3]的研究結果顯示，喹硫平血藥濃度能在一定程度上反映臨床療效，且血藥濃度的高低與治療有效率和無效率明顯相關。但奧氮平和喹硫平的有效治療濃度范圍（治療窗）非常窄，不同個體之間存在非常大的療效差異。歐洲神經精神藥理學與藥物精神病學協會發布的精神科治療藥物監測共識指南[4]指出，使用奧氮平、喹硫平等精神類藥物治療精神疾病時應進行藥物濃度監測，并提供清晰的治療參考區間和監測流程。目前，用于奧氮平和喹硫平藥物濃度監測的常用方法有高效液相色譜、液相色譜串聯質譜（liquid chromatography tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）等。但這些方法對操作人員要求均較高，且需要昂貴的特殊儀器，難以在中小型醫療機構普及。膠乳免疫比濁法具有準確、快速、簡便的優點，可實現樣本的快速檢測。本研究擬探討膠乳免疫比濁法在奧氮平和喹硫平藥物濃度監測中的臨床應用價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2021年7月上海交通大學醫學院附屬精神衛生中心住院的服用奧氮平的患者50例，其中男31例、女19例，年齡（40.98±18.92）歲；服用喹硫平的患者50例，其中男22例、女28例，年齡（44.58±21.36）歲。收集所有對象檢測剩余血清樣本，所有樣本均無脂血、溶血。

1.2 儀器與試劑

Waters I-Class/Xevo TQD液相質譜聯用儀（美國Waters公司），奧氮平、喹硫平標準品購自美國Sigma公司，流動相A為0.1%甲酸-2 mmol/L甲酸銨-水溶液、流動相B為100%甲醇，試劑均購自上海安譜科技股份有限公司，質控品購自上海市臨床檢驗中心。奧氮平、喹硫平膠乳免疫比濁法試劑購自復星診斷科技（上海）有限公司，校準品、質控品均購自美國Saladax Biomedical公司，檢測儀器為AU680全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）。

1.3 方法

1.3.1 正確度 參照美國臨床實驗室標準化協會（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）EP15-A3文件[5]，以校準品（奧氮平高、低值分別為78.5、46.0 ng/mL，喹硫平高、低值分別為438、88 ng/mL）為樣本，采用膠乳免疫比濁法每天重復測定2次，連續測定5 d。由于精神類藥物檢測無允許總誤差（allowable total error，TEa）的標準，故選用《上海市醫療機構臨床實驗室質量管理規范》[6]中其他治療藥物的TEa（±25%）為標準，以檢測結果與校準品標示值的相對偏移≤1/2TEa（±12.5%）為臨床可接受。

1.3.2 精密度 參照CLSI EP15-A3文件[5]，收集臨床低值樣本（奧氮平為39 ng/mL，喹硫平為155.65 ng/mL）和高值樣本（奧氮平為84.9 ng/mL，喹硫平為520.65 ng/mL）各2份，分別測定20次，計算、s和變異系數（coefficient of variation，CV）。如CV低于廠商聲明，則驗證通過；如s低于廠商聲明的驗證值，則中間精密度驗證通過。

1.3.3 線性范圍 參照我國衛生行業標準WS/T 408—2012[7]，收集臨床高值樣本（奧氮平為134.9 ng/mL，喹硫平為748 ng/mL）和低值樣本（奧氮平為19.7 ng/mL，喹硫平為34 ng/mL），將高值樣本（H）和低值樣本（L）分別按5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H配制成系列濃度樣本，將樣本從低到高或從高到低重復測定3次，計算。將實測值（Y）與理論值（X）進行回歸分析，得到回歸方程Y=bX+a和r值。如廠商聲明的線性范圍（奧氮平為22～114 ng/mL，喹硫平為34～700 ng/mL）在實測線性范圍內，則驗證通過。

1.3.4 分析系統間不定期比對 參照CNASCL02-A003：2018文件[8]，選取服用奧氮平和喹硫平的患者樣本各50例，分為2份，一份用于LCMS/MS檢測，另一份用于膠乳免疫比濁法檢測。2種方法之間應有≥80%的樣本的偏差<1/2 TEa。

1.3.5 分析系統間定期比對 參照CNASCL02-A003：2018文件[8]，選取服用奧氮平和喹硫平的患者樣本各50例，分為2份，一份用于LC-MS/MS檢測，另一份用于膠乳免疫比濁法檢測，根據檢測結果建立回歸方程，采用Passing-Baklok模型進行擬合計算，在醫學決定水平處的系統誤差（相對偏移）[9]應<1/2 TEa。

1.4 統計學方法

采用SPSS 23.0軟件進行統計分析。采用Kolmogorov-Smirnov檢驗評估數據的正態性。呈非正態分布的計量資料以中位數（M）[四分位數（P25～P75）]表示，組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗。采用MedCalc19.4.1軟件進行偏差圖分析，選擇合適的回歸方程進行線性擬合。

2 結果

2.1 正確度

膠乳免疫比濁法檢測奧氮平高、低值校準品的結果與標示值的相對偏移分別為-6.80%、-6.98%，喹硫平高、低值校準品的相對偏移分別為6.99%、4.66%，均<1/2 TEa（±12.5%）。

2.2 精密度

2.2.1 重復性 膠乳免疫比濁法檢測奧氮平低值和高值樣本的CV分別為3.00%和1.26%；檢測喹硫平低值和高值樣本的CV分別為2.05%和0.83%，均低于廠商聲明的重復性（CV<7.5%）。

2.2.2 中間精密度 膠乳免疫比濁法檢測奧氮平低值和高值樣本的實驗室內s分別為1.680、1.786 ng/mL，檢測喹硫平低值和高值樣本的實驗室內s分別為2.068、1.832 ng/mL，均低于廠商聲明的驗證值（奧氮平為4.194、9.331 ng/mL，喹硫平為16.173、52.858 ng/mL）。

2.3 線性范圍

奧氮平的線性回歸方程為Y=1.012 4X-1.411 9（r=0.999 4），線性范圍實測值為19.7～134.9 ng/mL，理論值與實測值之間差異無統計學意義（P>0.05）。喹硫平的線性回歸方程為Y=1.000 6X+5.033 6（r=0.998 0），線性范圍實測值為34～748 ng/mL，理論值與實測值之間差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 奧氮平和喹硫平線性范圍驗證結果及相對偏移

2.4 分析系統間不定期和定期比對結果

LC-MS/MS與膠乳免疫比濁法奧氮平和喹硫平的檢測結果差異均無統計學意義（P>0.05），相對偏差<1/2 TEa的樣本所占比例分別為98.00%、92.00%。不定期比對符合要求。見表2、表3。

表2 LC-MS/MS與膠乳免疫比濁法奧氮平和喹硫平檢測結果比較

表3 分析系統間不定期比對的相對偏差及合格率

奧氮平擬合的回歸方程為Y=2.586+0.934X，在3個醫學決定水平（20、80、150 ng/mL）處的相對偏移分別為6.98%、-2.50%、-4.06%。喹硫平擬合的回歸方程為Y=-0.180+0.979X，在3個醫學決定水平（100、500、1 000 ng/mL）處的相對偏移分別為-2.31%、-2.16%、-2.14%。見表4。

表4 分析系統間定期比對偏移

3 討論

抗精神病藥物的維持治療可使患者明顯獲益，顯著改善臨床癥狀，降低患者死亡率[10-11]。在藥物濃度監測的指導下制定個體化的用藥方案，提升患者對治療的依從性，維持有效治療窗，對于精神疾病的治療至關重要，可使治療效果最大化，毒副作用最小化。由于抗精神病藥物的治療窗很窄，治療劑量與中毒劑量很接近，因此需要對藥物進行濃度監測，以避免出現中毒反應。目前，藥物濃度監測常用的方法為LC-MS/MS，但其需要特殊儀器，對場地、檢測人員的要求均較高，因此中小型醫療機構無法常規開展。膠乳免疫比濁法相對于LC-MS/MS，樣本無需前處理、檢測速度快、通量高；缺點是會與結構相似的非待測物結合，發生假陽性反應，導致檢測結果升高[12]，也會因體內高濃度免疫球蛋白的抑制作用而導致檢測結果降低，出現假陰性，同時，由于方法的局限性，其定量限較質譜方法窄[13-14]。賈萌萌等[15]采用膠乳免疫比濁法檢測了92例患者血漿多西他賽濃度，并與質譜法比較，結果顯示，2種方法的相關性較好（r=0.998，P<0.05），檢測結果差異無統計學意義（P>0.05）。ETO等[16]采用膠乳免疫比濁法和質譜法同時檢測78例患者的唑尼沙胺血藥濃度，并通過Bland-Altman一致性分析評估2種方法的一致性，結果顯示，2種方法之間差異無統計學意義（P>0.05）。

本研究結果顯示，膠乳免疫比濁法檢測奧氮平和喹硫平的血藥濃度具有良好的正確度（奧氮平相對偏移分別為-6.80%、-6.98%、喹硫平相對偏移分別為6.99%、4.66%）、精密度（奧氮平CV≤3%、喹硫平CV≤2.05%）及線性（奧氮平為19.7～134.9 ng/mL，喹硫平為34～748 ng/mL），其線性范圍可以覆蓋歐洲神經精神藥理學與藥物精神病學協會推薦的治療參考區間；LC-MS/MS與膠乳免疫比濁法奧氮平和喹硫平的檢測結果差異均無統計學意義（P>0.05），分析系統間定期比對和不定期比對均符合要求。

綜上所述，膠乳免疫比濁法與LC-MS/MS具有良好的一致性，且更為便捷、快速，可在中小型醫療機構推廣使用。